發(fā)布時間：2017-10-10 07:43

  本文關(guān)鍵詞：shRNA沉默TRAF6基因?qū)毙愿螕p傷小鼠炎癥反應(yīng)的影響

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【摘要】：目的通過shRNA沉默腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(tumour necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)基因表達,研究TRAF6沉默基因?qū)?nèi)毒素/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)誘導(dǎo)的急性肝衰竭小鼠炎癥反應(yīng)的影響。方法通過體外實驗篩選針對TRAF6基因的最有效小干擾RNA(siRNA)序列,采用流體力學(xué)注射法將pTRAF6-shRNA表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BALB/c小鼠,24h后重復(fù)注射1次。第2次注射后24h,予LPS/D-GalN腹腔注射制備急性肝衰竭內(nèi)毒素炎癥模型。設(shè)正常對照組、模型對照組、空白質(zhì)粒/LPS組及RNAi/LPS組。觀察各組小鼠肝臟病理變化,Real-time PCR檢測TRAF6、IL-6及COX-2mRNA的表達,ELISA檢測血清TNF-α、IL-1β及TGF-β1水平變化,Western blot檢測肝細胞TRAF6、NF-κB p65的表達。結(jié)果 Real-time PCR及Western blot檢測顯示,pTRAF6-shRNA1能有效沉默TRAF6mRNA及蛋白表達,其中TRAF6mRNA表達較正常小鼠下降約60.13%,TRAF6蛋白表達降低約52.08%,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.01)。ELISA檢測顯示各組小鼠TNF-α、IL-1β均于造模后8h達到峰值,TGF-β1于16h達到峰值;RNAi/LPS組小鼠血清TNF-α、IL-1β及TGF-β1水平明顯低于同時間點模型對照組。Real-time PCR結(jié)果顯示RNAi/LPS組小鼠IL-6、COX-2及TRAF6mRNA表達下降,與模型對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.01)。Western blot結(jié)果顯示RNAi/LPS組小鼠肝組織總蛋白NF-κB p65表達水平顯著高于正常對照組(P0.05),與模型對照組無差異,而胞核NF-κB p65明顯低于模型對照組(P0.05)。結(jié)論 pTRAF6-shRNA可能通過下調(diào)NF-κB p65水平,抑制炎癥相關(guān)細胞因子和炎性介質(zhì)表達水平,從而減輕內(nèi)毒素/半乳糖誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷。
【作者單位】： 武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心(武漢市兒童醫(yī)院)重癥醫(yī)學(xué)科;華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院感染科;華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院消化內(nèi)科;華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院中心實驗室;
【關(guān)鍵詞】： TRAF RNA干擾 TLR信號通路 NF-κB 急性肝衰竭
【分類號】：R575.3
【正文快照】： 急性肝功能衰竭(acute liver failure,ALF)是臨床危重疾患之一,目前的內(nèi)科綜合治療效果不理想,病死率高達80%。目前普遍認為,由內(nèi)毒素(li-popolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的以腫瘤壞死因子(tumour necrosis factor,TNF)為核心的炎癥反應(yīng)在肝衰竭中扮演著重要的角色[1-2],上調(diào)這些細

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10 張文;張p，

本文編號：1005190