【摘要】：本文研究Fe304-海藻酸鈉固定化重組大腸桿菌BL21 (DE3)PET21-NIT催化水解底物1-氰基環(huán)己基乙腈,得到產(chǎn)物1-氰基環(huán)己基乙酸,這是合成藥物加巴噴丁的中間體。首先,對Fe304-海藻酸鈉固定化大腸桿菌細胞的制備條件進行了優(yōu)化,最佳固定化條件是：大腸桿菌濃度50 g/L,海藻酸鈉質量濃度3%,Fe304質量濃度50g/L, CaCl2濃度0.2 mol/L,粒徑大小1.5 nm,最佳pH值為7.0；其次,對得到的磁性固定化細胞進行了表征,發(fā)現(xiàn)其在外加磁場下可以在幾秒鐘內快速分離,相對于未添加Fe304的海藻酸鈉固定化細胞,其機械強度有了顯著提高,在測試條件下處理3 h,海藻酸鈉固定化細胞和海藻酸鈉-Fe304磁性固定化細胞的破碎率分別為90%和30%；。最后,對海藻酸鈉-Fe304磁性固定化細胞的各項性能進行了測試。發(fā)現(xiàn)磁性固定化細胞的pH穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性比游離細胞有所增強,在4度下儲存30天其剩余酶活在60%以上,但是游離細胞只有40%。海藻酸鈉磁性固定化細胞作為催化劑重復利用40批次后,1-氰基環(huán)己基乙酸的產(chǎn)率保持在84%,而海藻酸鈉固定化細胞為催化劑時,1-氰基環(huán)己基乙酸的產(chǎn)率為70%。在細胞的基礎上又研究鎳螯合瓊脂糖磁珠作為載體固定化帶有組氨酸標簽的腈水解酶。最佳固定化條件為：Buffer A緩沖液中的咪唑濃度為15 mM,腈水解酶的濃度為6 g/L,固定化時間為30 min,瓊脂糖磁珠最佳加入量針對不同底物3-氰基吡啶和1-氰基環(huán)己基乙腈分別為3 g/L和4 g/L,最佳反應pH值為7。固定化酶與游離酶pH穩(wěn)定性研究表明固定化酶較游離酶更加的穩(wěn)定,固定化酶反應8批次后,剩余酶活為68%。
【學位授予單位】：上海應用技術學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：TQ033;Q814.2

【參考文獻】

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1 白永慶;龔福忠;李丹;徐運貴;;微乳液的結構性質及其應用進展[J];化工技術與開發(fā);2007年11期

本文編號：2749026