本文關鍵詞：膠體金刺突長度對赭曲霉毒素A免疫層析試紙條檢測性能影響的研究

  更多相關文章： 免疫層析檢測 多枝狀膠體金納米粒子 刺突長度 檢測性能

【摘要】：本文初步探討了多枝狀膠體金刺突長度對免疫層析試紙條檢測性能的影響。分別采用檸檬酸三鈉還原法和種子介導生長法合成了無刺突球狀,短刺突多枝狀和長刺突多枝狀三種膠體金,粒子粒徑均為30-40 nm;采用以上三種膠體金研制了赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的免疫層析試紙條;以試紙條T/C比值法建立了赭曲霉毒素A的試紙條定量檢測方法;系統(tǒng)評價以三種膠體金為探針時,每張試紙條的抗體以及探針消耗量、50%的競爭抑制濃度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)、試紙條定量檢測的最低檢測限(Limit of detection,LOD)及所需的平衡反應時間等指標差異;并進一步分析了三種金標納米探針分別與檢測線以及質控線結合的動力學變化。制備三種試紙條的主要參數(shù)如下:NC膜檢測線上OTA-BSA濃度為1.2mg/mL,質控線二抗?jié)舛葹?.4 mg/mL;抗赭曲霉毒素A腹水標記三種探針量(無刺突球狀、短刺突多枝狀和長刺突多枝狀)為4.5μg/mL;結合墊上三種金標抗體納米探針的噴涂量分別為4.0μL/cm,2μL/cm和0.8μL/cm(保證T線顯色強度基本一致)。在此條件下,無刺突球狀、短刺突多枝狀及長刺突多枝狀三種膠體金試紙條T/C比值進入平衡的時間分別為17 min,15 min和12 min,表明長刺突多枝狀膠體金在試紙條上具有更快的釋放速率和涌動速率;平衡時三種試紙條T/C比值分別為0.67±0.03,0.95±0.01和1.29±0.02,以上數(shù)據(jù)顯示長刺突多枝狀金納米粒子與T線抗原具有更強的結合能力;三種膠體金試紙條定量曲線采用四參數(shù)進行模擬擬合,具體方程分別如下:y=145.6914/[1+(x/2.9255)-1.0554]-1.8735(R~2=0.9903,無刺突球狀膠體金探針),y=259.0171/[1+(x/5.4329)-0.7548]-1.1688(R~2=0.9937,短刺突多枝狀膠體金探針)和y=226.9642/[1+(x/1.9879)-~(1.0601)]+0.0713(R~2=0.9960,長刺突多枝狀膠體金探針),定性檢測閾值分別為5 ng/mL、3 ng/mL和2 ng/mL,IC50分別是1.68 ng/mL、0.84 ng/mL及0.61 ng/mL;LOD分別為0.29 ng/mL,0.1 ng/mL和0.07 ng/mL。其中,長刺突多枝狀膠體金試紙條的定性檢測閾值、定量檢測的IC50和LOD分別是無刺突球狀膠體金試紙條的2.5、2.75和4.14倍。以上數(shù)據(jù)初步表明長刺突多枝狀膠體金替代傳統(tǒng)球狀膠體金(30-40 nm)作為標記探針可以提高競爭法試紙條檢測方法的檢測性能。
【關鍵詞】：免疫層析檢測 多枝狀膠體金納米粒子 刺突長度 檢測性能
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：O648.1;O652
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-7
• 縮略語表7-10
• 第1章 前言10-23
• 1.1 膠體金的概述10-11
• 1.2 膠體金在免疫學上的應用11-13
• 1.2.1 膠體金標記技術12
• 1.2.2 膠體金標記原理12-13
• 1.2.3 膠體金標記技術應用前景13
• 1.3 多枝狀膠體金的介紹13-14
• 1.3.1 多枝狀膠體金的特性13-14
• 1.3.2 多枝狀膠體金的應用14
• 1.4 赭曲霉毒素的概述14-16
• 1.4.1 赭曲霉毒素A的理化性質14-15
• 1.4.2 赭曲霉毒素A的毒性機理及危害15-16
• 1.5 赭曲霉毒素A現(xiàn)行檢測方法16-19
• 1.5.1 高效液相色譜法 (HPLC)17-18
• 1.5.2 液相色譜-質聯(lián)用法 (LC-MS/MS)18
• 1.5.3 氣相色譜-質聯(lián)用法 (GC-MS)18
• 1.5.4 酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)18-19
• 1.5.5 免疫層析試紙條法 (GICA)19
• 1.6 免疫層析技術19-22
• 1.6.1 雙抗夾心免疫層析模式20-21
• 1.6.2 競爭抑制免疫層析模式21
• 1.6.3 免疫層析技術的應用及發(fā)展趨勢21-22
• 1.7 本文的研究內容和意義22-23
• 第2章 膠體金刺突長短對赭曲霉毒素A免疫層析試紙條檢測性能的影響23-44
• 2.1 材料與儀器24-25
• 2.1.1 主要試劑及材料24
• 2.1.2 主要儀器設備24
• 2.1.3 主要試劑的配制24-25
• 2.2 實驗方法25-29
• 2.2.1 膠體金溶液的合成25-26
• 2.2.2 膠體金的表征26
• 2.2.3 膠體金的標記26
• 2.2.4 赭曲霉毒素A免疫層析試紙條的構建26-28
• 2.2.5 赭曲霉毒素A膠體金免疫層析試紙條參數(shù)優(yōu)化28-29
• 2.3 結果與分析29-44
• 2.3.1 紫外分光光度分析29-31
• 2.3.2 透射電鏡分析31-32
• 2.3.3 合成不同刺突長度納米金溶液的參數(shù)匯總32
• 2.3.4 膠體金標記條件的優(yōu)化32-34
• 2.3.5 三種赭曲霉毒素 A 免疫層析試紙條檢測性能的比較34-44
• 第3章 結論與展望44-45
• 3.1 結論44
• 3.2 展望44-45
• 致謝45-46
• 參考文獻46-50
• 附錄1 試劑與材料50-51
• 附錄2 儀器設備51-52
• 個人介紹52
• 攻讀學位期間的研究成果52

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐鵬;膠體金刺突長度對赭曲霉毒素A免疫層析試紙條檢測性能影響的研究[D];南昌大學;2016年

，

本文編號：922871