本文關(guān)鍵詞：基于納米金和熒光物質(zhì)光譜法檢測生物分子的研究

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【摘要】：納米金作為目前新興的納米材料,以其特有的物理、化學(xué)性質(zhì)被廣泛應(yīng)用在各個領(lǐng)域中。核酸適配體是人工合成的特定DNA或RNA序列,它能和靶物質(zhì)特異性結(jié)合后形成二級或三階結(jié)構(gòu),可以提高生物傳感器的特異性。熒光染料可以用來構(gòu)建熒光信號與靶物質(zhì)濃度的存在關(guān)系,通過觀測熒光強(qiáng)度的改變來檢測靶物質(zhì)。本論文主要利用納米金和熒光染料的光譜特性來構(gòu)建不同的生物傳感器檢測萊克多巴胺、溶菌酶、凝血酶,主要包括以下三個部分:(1)基于納米金和陽離子熒光染料的生物探針檢測溶液中的萊克多巴胺。通過改良檸檬酸鈉法制備表面帶負(fù)電荷的納米金,納米金和陽離子熒光染料靜電吸附,納米金發(fā)生團(tuán)聚,并且陽離子熒光染料的熒光猝滅,加入萊克多巴胺后,萊克多巴胺先使納米金團(tuán)聚,釋放出陽離子熒光染料,體系熒光恢復(fù)。陽離子熒光染料熒光強(qiáng)度的恢復(fù)與萊克多巴胺的濃度成正比,線性范圍0.91-273 nM,檢出限是0.28 nM。本方法能對實(shí)際樣品中的萊克多巴胺進(jìn)行定量檢測,具有重要的意義。(2)基于納米金和陽離子熒光染料的適配體傳感器檢測溶菌酶。在沒有溶菌酶存在時,陽離子熒光染料和核酸適配體靜電吸附,熒光猝滅,加入納米金后,納米金不團(tuán)聚,再次加入陽離子熒光染料,納米金團(tuán)聚,體系呈現(xiàn)微弱熒光。當(dāng)溶菌酶存在時,溶菌酶和適配體特異性結(jié)合,陽離子熒光染料導(dǎo)致納米金部分團(tuán)聚,再次加入陽離子熒光染料,體系熒光恢復(fù)。據(jù)此,可采用比色、紫外、熒光法對溶菌酶進(jìn)行檢測。熒光法檢測范圍為0.9-36 nM,檢出限為17 pM。(3)基于核酸染料、適配體以及核酸外切酶1之間的相互作用檢測凝血酶。沒有凝血酶時,適配體和其互補(bǔ)DNA形成雙鏈DNA,核酸外切酶1不能裂解雙鏈DNA,嵌入核酸染料后提供弱的背景熒光。加入凝血酶后,凝血酶與適配體特異性結(jié)合形成G-四聯(lián)體,能夠被核酸外切酶1裂解,釋放出凝血酶繼續(xù)從雙鏈DNA中競爭出其適配體,破壞雙鏈DNA,釋放出更多核酸染料嵌入到G-四聯(lián)體中,熒光增強(qiáng)。對于凝血酶的檢測范圍是0.28-86 nM,檢出限為30 pM。此方法提供了一個簡單、靈敏、特異性高的檢測凝血酶的新思路,并且能夠較好的應(yīng)用到實(shí)際樣品的檢測中去。
【關(guān)鍵詞】：熒光染料 納米金 核酸適配體
【學(xué)位授予單位】：湘潭大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O657.3
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 第1章 緒論10-21
• 1.1 納米金的概述10-12
• 1.1.1 納米金的介紹及制備10-11
• 1.1.2 納米金在生物傳感器中的應(yīng)用11-12
• 1.2 核酸適配體的概述12-14
• 1.2.1 核酸適配體的的介紹及制備12-13
• 1.2.2 核酸適配體在分析研究中的應(yīng)用13-14
• 1.3 紫外-可見分光光度法14-15
• 1.3.1 紫外可見吸收光譜的原理及介紹14-15
• 1.3.2 紫外可見吸收光譜在分析檢測中的應(yīng)用15
• 1.4 熒光光譜法15-19
• 1.4.1 熒光的發(fā)展歷史15-16
• 1.4.2 熒光分析法的原理及介紹16-17
• 1.4.3 陽離子熒光染料和SYBR Green I染料的介紹及應(yīng)用17-19
• 1.5 選題思路及研究內(nèi)容19-21
• 第2章 基于納米金和陽離子熒光染料無標(biāo)記檢測萊克多巴胺21-30
• 2.1 引言21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分21-23
• 2.2.1 儀器與試劑21-22
• 2.2.2 納米金微粒的制備22
• 2.2.3 陽離子熒光染料的合成22-23
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)步驟23
• 2.3 結(jié)果與討論23-29
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)原理23-24
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)條件的選擇24-25
• 2.3.3 紫外可見光譜檢測25-26
• 2.3.4 目視比色法檢測26-27
• 2.3.5 熒光光譜法檢測27-28
• 2.3.6 干擾實(shí)驗(yàn)28
• 2.3.7 加標(biāo)回收28-29
• 2.4 結(jié)論29-30
• 第3章 基于納米金和陽離子熒光染料的適配體傳感器檢測溶菌酶30-41
• 3.1 緒論30
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分30-32
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)使用儀器及主要試劑30-31
• 3.2.2 納米金的制備31-32
• 3.2.3 陽離子熒光染料的制備32
• 3.2.4 實(shí)驗(yàn)過程32
• 3.3 結(jié)果與討論32-40
• 3.3.1 實(shí)驗(yàn)原理32-33
• 3.3.2 溶菌酶對陽離子熒光染料熒光的影響33
• 3.3.3 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化33-36
• 3.3.4 比色、紫外法檢測溶菌酶36-38
• 3.3.5 熒光光譜法檢測溶菌酶38-39
• 3.3.6 選擇性實(shí)驗(yàn)39
• 3.3.7 樣品分析及加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)39-40
• 3.4 結(jié)論40-41
• 第4章 基于核酸外切酶1和SGI染料信號放大無標(biāo)記熒光法檢測凝血酶41-51
• 4.1 緒論41
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分41-43
• 4.2.1 儀器與試劑41-42
• 4.2.2 凝膠電泳的測定42
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)過程42-43
• 4.3 結(jié)果與討論43-50
• 4.3.1 實(shí)驗(yàn)原理43
• 4.3.2 體系中各物質(zhì)的熒光特性43-44
• 4.3.3 Exo I對實(shí)驗(yàn)體系熒光增強(qiáng)的驗(yàn)證44-45
• 4.3.4 凝膠電泳分析45-46
• 4.3.5 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化46-48
• 4.3.6 熒光光譜法檢測凝血酶48-49
• 4.3.7 選擇性實(shí)驗(yàn)49
• 4.3.8 不同方法檢測凝血酶的對比49-50
• 4.3.9 樣品分析及加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)50
• 4.4 結(jié)論50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 致謝59-60
• 個人簡歷、在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果60

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本文編號：900047