發(fā)布時間：2017-09-21 22:43

  本文關(guān)鍵詞：殼聚糖基AIE熒光探針的分子設(shè)計(jì)及其在細(xì)胞成像中的應(yīng)用

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【摘要】：殼聚糖因具有優(yōu)異的生物相容性、生物可降解性以及低毒性等眾多優(yōu)點(diǎn)而被當(dāng)做一種醫(yī)用材料廣泛使用。然而,殼聚糖有限的水溶性限制了它在藥物釋放以及生物監(jiān)測方面的應(yīng)用。解決這個問題的一個有效途徑是對殼聚糖進(jìn)行水溶性修飾,而在眾多方法中,聚乙二醇修飾殼聚糖是一種較為有效的手段。將聚乙二醇接枝到殼聚糖上主要有兩種途徑：通過2號位上的氨基引入聚乙二醇；以及通過6號位上的羥基引入聚乙二醇。在這兩種途徑中,后者保留了活性氨基,使得后續(xù)進(jìn)一步修飾成為可能,因而被認(rèn)為是更加有效地一種方法。另一方面,熒光檢測技術(shù)具有高靈敏度、低噪音等突出優(yōu)點(diǎn)。而一般小分子熒光染料因?yàn)榫哂芯奂T導(dǎo)淬滅特性,而極大地限制了其應(yīng)用范圍,影響檢測效果。與之相反,具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光特性(AIE)的熒光分子則不會在聚集態(tài)下發(fā)生熒光淬滅,光譜隨濃度變化無漂移,且敏感度高,這些因素使得AIE特性的熒光分子在生物監(jiān)測領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛。本論文結(jié)合以上兩種思路,以使用殼聚糖為主體制備具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光性能的熒光探針,同時增強(qiáng)其水溶性以提高在生物體內(nèi)的長循環(huán)時間,主要取得了以下成果：通過點(diǎn)擊反應(yīng)成功合成出結(jié)構(gòu)可控的聚乙二醇接枝殼聚糖產(chǎn)物,并以此進(jìn)一步制備了四苯基乙烯(TPE)修飾的聚乙二醇接枝殼聚糖熒光探針。該熒光探針的激發(fā)波及熒光發(fā)射峰分別位于320 nm及474nm。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了該材料無細(xì)胞毒性,熒光顯微鏡照片顯示熒光分子成功進(jìn)入細(xì)胞,成像效果良好。此外,通過巰基-雙硫鍵的交換反應(yīng)制備得到了通過雙硫鍵接枝PEG的殼聚糖衍生物。
【關(guān)鍵詞】：殼聚糖 聚乙二醇 點(diǎn)擊反應(yīng) 聚集誘導(dǎo)發(fā)光 雙硫鍵
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O657.3
【目錄】：

• 致謝3-5
• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-34
• 1.1. 殼聚糖10-20
• 1.1.1. 殼聚糖的物理化學(xué)性質(zhì)10-12
• 1.1.2. 粘膜給藥12
• 1.1.3. 基因治療12-13
• 1.1.4. 殼聚糖作為藥物載體的局限13-14
• 1.1.5. 殼聚糖衍生物14-20
• 1.1.5.1. 羥甲基化殼聚糖14-15
• 1.1.5.2. 季銨化殼聚糖15
• 1.1.5.3. PEG化殼聚糖15-16
• 1.1.5.4. PEG化殼聚糖的合成方法16-20
• 1.2. 具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光現(xiàn)象(AIE)的熒光分子20-32
• 1.2.1. 具有AIE性質(zhì)的各類小分子22-23
• 1.2.2. 具有AIE性質(zhì)的大分子23-32
• 1.2.2.1. 大分子的設(shè)計(jì)和合成23-25
• 1.2.2.2. 自由基聚合25-28
• 1.2.2.3. 共聚28-30
• 1.2.2.4. AIE修飾的大分子30-32
• 1.3. 課題提出及方案設(shè)計(jì)32-34
• 1.3.1. 課題提出32
• 1.3.2. 研究思路與內(nèi)容32-34
• 第二章 實(shí)驗(yàn)部分34-50
• 2.1. 原料及儀器34-35
• 2.1.1. 實(shí)驗(yàn)原料34-35
• 2.1.2. 實(shí)驗(yàn)儀器35
• 2.2. 測試與表征35-36
• 2.2.1. 核磁共振35
• 2.2.2. 紫外-可見光譜(UV-Vis)35-36
• 2.2.3. 元素分析36
• 2.2.4. 紅外光譜分析(IR)36
• 2.3. 殼聚糖原料的制備與測定36-38
• 2.3.1. 殼聚糖的脫乙�；幚�36
• 2.3.2. 殼聚糖的降解36
• 2.3.3. 脫乙酰度的測定36-37
• 2.3.4. 分子量的測定37-38
• 2.4. 具有牢固結(jié)構(gòu)的PEG-CS-TPE熒光探針的制備38-43
• 2.4.1. N-鄰苯甲酰化殼聚糖的制備38-39
• 2.4.2. 6-對甲苯磺酸基-N-鄰苯甲�；瘹ぞ厶侵苽�39-40
• 2.4.3. 6-疊氮基-N-鄰苯甲�；瘹ぞ厶堑闹苽�40-41
• 2.4.4. 端炔基的mPEG的制備41
• 2.4.5. 聚乙二醇-殼聚糖的制備41-42
• 2.4.6. TPE標(biāo)記的聚乙二醇-殼聚糖的制備42-43
• 2.5. 細(xì)胞培養(yǎng)43-46
• 2.5.1. 磷酸鹽緩沖液的配置43
• 2.5.2. 細(xì)胞復(fù)蘇43-44
• 2.5.3. 細(xì)胞傳代44
• 2.5.4. 細(xì)胞計(jì)數(shù)44
• 2.5.5. 細(xì)胞毒性測試(MTT測試)44-45
• 2.5.6. 細(xì)胞凍存45
• 2.5.7. 細(xì)胞成像45-46
• 2.6. 通過雙硫鍵鏈接的PEG-CS的制備46-50
• 2.6.1. 琥珀�；瘹ぞ厶堑闹苽�46
• 2.6.2. 巰基化殼聚糖的制備46-47
• 2.6.3. 端羧基的mPEG的制備47
• 2.6.4. 胱胺鹽酸鹽的制備47
• 2.6.5. mPEG-ss-NH_2的制備47-48
• 2.6.6. mPEG-ss-CS的制備48-50
• 第三章 結(jié)果與討論50-71
• 3.1. 各個聚合產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征50-61
• 3.1.1. 鄰苯甲�；瘹ぞ厶堑暮铣膳c表征50-52
• 3.1.2. 6-對甲苯磺酸酯N-鄰苯甲�；瘹ぞ厶堑暮铣膳c表征52-53
• 3.1.3. 6-疊氮基N-鄰苯甲�；瘹ぞ厶堑暮铣膳c表征53-56
• 3.1.4. 端炔基的端甲氧基聚乙二醇的合成與表征56-57
• 3.1.5. 點(diǎn)擊反應(yīng)制備聚乙二醇?xì)ぞ厶墙又Ξa(chǎn)物的合成與表征57-58
• 3.1.6. TPE標(biāo)記的聚乙二醇接枝殼聚糖產(chǎn)物的合成與表征58-60
• 3.1.7. 小結(jié)60-61
• 3.2. TPE標(biāo)記的聚乙二醇接枝殼聚糖產(chǎn)物在生物檢測方面的應(yīng)用61-66
• 3.2.1. TPE標(biāo)記的聚乙二醇接枝殼聚糖產(chǎn)物的熒光性能分析61-62
• 3.2.2. TPE-CS-mPEG對細(xì)胞存活和增值的影響62
• 3.2.3. TPE-CS-mPEG的細(xì)胞成像測試62-65
• 3.2.4. 小結(jié)65-66
• 3.3. 雙硫鍵接枝聚乙二醇的殼聚糖衍生物表征66-71
• 3.3.1. 琥珀�；瘹ぞ厶堑暮铣膳c表征66
• 3.3.2. 巰基化殼聚糖的合成與表征66-68
• 3.3.3. PEG-ss-NH_2的合成與表征68
• 3.3.4. mPEG-ss-CS的合成與表征68-70
• 3.3.5. 小結(jié)70-71
• 第四章 全文總結(jié)71-72
• 參考文獻(xiàn)72-79

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王姍姍;;小分子熒光探針在硫醇檢測中的最新研究進(jìn)展[J];科技信息;2010年23期

2 向雨秘;龍少波;朱R，

本文編號：897334