本文關(guān)鍵詞：磷脂類(lèi)藥品與輔料中磷脂組分的分離測(cè)定研究

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【摘要】：磷脂是一種天然的生物表面活性劑,廣泛分布于動(dòng)植物界。磷脂中主要含有磷脂酰膽堿(PC)以及少量的磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、鞘磷脂(SM)、溶血磷脂酰膽堿(LPC)、棕櫚酸甘油酯(TG)、膽固醇(CH)等組分。它們是動(dòng)植物中細(xì)胞膜、核膜、質(zhì)體膜的基本成分,也是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)之一,具有重要的營(yíng)養(yǎng)和醫(yī)用價(jià)值,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化工等領(lǐng)域。由于組分復(fù)雜與缺少紫外吸收,磷脂類(lèi)藥品與輔料的質(zhì)量控制一直以來(lái)是藥物分析的研究熱點(diǎn)與難點(diǎn)。本論文分別采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法和超臨界流體色譜法分離并定量測(cè)定了以豬肺磷脂注射液(商品名：固爾蘇)為代表的磷脂類(lèi)藥品和以蛋黃卵磷脂、大豆磷脂為代表的磷脂類(lèi)輔料中各磷脂組分,為其質(zhì)量控制提供技術(shù)手段和參考依據(jù),論文內(nèi)容主要包括以下兩個(gè)部分：(1)首次建立了高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法分離并測(cè)定固爾蘇中9種磷脂組分。與固爾蘇現(xiàn)行進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)中采用雙向薄層色譜法分離后僅測(cè)定PC含量的方法相比,該方法操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好,能夠提供多種磷脂的檢驗(yàn)數(shù)據(jù),更適用于控制企業(yè)批間產(chǎn)品的一致性。在色譜條件優(yōu)化過(guò)程中,考察了二醇柱、氨基柱以及不同產(chǎn)家硅膠柱對(duì)固爾蘇中各磷脂的分離影響；并以氯仿-甲醇-水-氨水為洗脫系統(tǒng),考察了流動(dòng)相各組分比例改變、流速、柱溫對(duì)固爾蘇中各磷脂組分的分離影響。最終選擇Kromasil硅膠柱(4.6mm×250mm,5 μm)為固定相,以氯仿：甲醇：水：氨水(78：21：0.2：0.4)為流動(dòng)相A,氯仿：甲醇：水：氨水(59：35：5：0.4)為流動(dòng)相B,梯度洗脫,柱溫25℃,流速1.0ml/min,蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)。使用該方法對(duì)同一廠(chǎng)家中2種不同規(guī)格的共5個(gè)不同批號(hào)的樣品進(jìn)行分析,5批固爾蘇樣品中均分離出9種已知磷脂和一種未知組分,對(duì)已知磷脂進(jìn)行定量分析,以SM為對(duì)照計(jì)算未知組分的相對(duì)含量,并對(duì)該方法進(jìn)行了重現(xiàn)性、線(xiàn)性、檢測(cè)限以及回收率等方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果表明,各磷脂組分分離完全,以對(duì)照品溶液濃度的對(duì)數(shù)值(lgc)對(duì)相應(yīng)峰面積的對(duì)數(shù)值(lgA)做線(xiàn)性回歸,9種磷脂的線(xiàn)性關(guān)系均良好,線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)為0.9984～0.9995,日內(nèi)精密度為0.81%～1.83%,日間精密度為0.74%～2.15%,檢測(cè)限為4.1～106.5 ng,定量限為5.5～221.3 ng,回收率為98.5%～101.3%,5批固爾蘇中各磷脂測(cè)定結(jié)果為：CH 0.10～0.13mg/ml,PE 2.62～2.93mg/ml, PI 3.51～3.62 mg/ml,PS 0.50～0.56 mg/ml,LPE 0.05～0.07 mg/ml,PC 68.51～72.42 mg/ml, SM 1.10～1.15 mg/ml,LPC 0.1～0.34 mg/ml,未知組分1.07～1.26 mg/ml。(2)首次建立了超臨界流體色譜法分離并測(cè)定蛋黃卵磷脂和大豆磷脂中8種磷脂組分。該方法簡(jiǎn)便快速、專(zhuān)屬性高,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,方法重復(fù)性好,使用的有機(jī)溶劑較少,減少了對(duì)人體的傷害,為磷脂的定量分析提供了新的檢測(cè)技術(shù)和思路。實(shí)驗(yàn)中采用超臨界流體色譜儀與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器聯(lián)用,考察了硅膠柱(ZorbaxRx-SIL,3.0 mm×100mm,1.8μm)、硅膠柱(ZorbaxSilica,4.6mm×250mm,5μm)、氰基柱(Zorbax CN, 3.0 mm×100mm,1.8μm)、氨基柱(Zorbax NH2,4.6 mm×250mm,5μm)、苯基柱(Pursuit PFP,4.6 mm×150mm,5μm)和二醇柱(LiChrospher 100 Diol,4.0 mm×250mm,5um)對(duì)磷脂的分離影響,選擇ZorbaxSilica柱(4.6mm×250mm,5μm)與LiChrospher 100 Diol柱(4mm×250mm,5μm)串聯(lián),同時(shí)考察了流動(dòng)相中添加劑的種類(lèi)以及組分比例、流速、柱溫、蒸發(fā)光條件的改變對(duì)磷脂分離的影響。最終選擇超臨界流體二氧化碳(CO2)為流動(dòng)相A,甲醇：氨水(100：0.5)為流動(dòng)相B,進(jìn)行梯度洗脫,柱溫為30℃,流速為2.3 ml/min,蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)。使用該方法對(duì)4家企業(yè)提供的共11批蛋黃卵磷脂和3家企業(yè)提供的共4批不同大豆磷脂進(jìn)行分析,磷脂樣品中分離出8種磷脂組分,對(duì)磷脂進(jìn)行定量分析,并對(duì)該方法進(jìn)行了重現(xiàn)性、線(xiàn)性、檢測(cè)限以及回收率等方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果表明,各磷脂組分色譜峰間的分離度為1.90-11.92,理論板數(shù)為3575-18786。以對(duì)照品溶液濃度的對(duì)數(shù)值(1gc)對(duì)相應(yīng)峰面積的對(duì)數(shù)值(lgA)做線(xiàn)性回歸,8種磷脂的線(xiàn)性關(guān)系均良好,線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)為0.9967～0.9998,日內(nèi)精密度為0.2%～2.0%,日間精密度為0.5%～2.0%,檢測(cè)限為137～584 ng,定量限為273～1169 ng,回收率為97.1%～100.6%。11批蛋黃卵磷脂中各磷脂測(cè)得結(jié)果為：TG 0.2%～1.8%,CH 0.4%～2.0%,PE 7.8～15.0%,LPE 0.7%～1.0%, PI 0.7%～1.8%,PC 68.0%～89.4%, SM 1.0%～1.9%, LPC0.6%～1.7%,4批大豆磷脂中各磷脂測(cè)得結(jié)果為：TG 0.1%～0.8%, CH 0.2%～0.3%, PE 5.0%～17.8%,LPE0.0%, PI 0.9%～1.6%,PC 53.6%～72.4%,SM0.0%,LPC 1.0%～2.9%。
【關(guān)鍵詞】：豬肺磷脂 蛋黃卵磷脂 大豆磷脂 高效液相色譜法 超臨界流體色譜 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 二氧化碳
【學(xué)位授予單位】：上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：TQ460.72;O657.7
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 英文縮寫(xiě)說(shuō)明13-14
• 第1章 前言14-26
• 1.1 磷脂的簡(jiǎn)介14-17
• 1.1.1 磷脂的結(jié)構(gòu)及組成14-16
• 1.1.2 磷脂的來(lái)源16
• 1.1.3 磷脂理化性質(zhì)16-17
• 1.2 磷脂的功能及應(yīng)用17-20
• 1.2.1 磷脂的功能17-18
• 1.2.2 磷脂的應(yīng)用18-20
• 1.3 磷脂分析方法的綜述20-24
• 1.3.1 薄層色譜法分析磷脂中各組分20-21
• 1.3.2 高效液相色譜法分析磷脂中各組分21-23
• 1.3.3 質(zhì)譜法分析磷脂中各組分23-24
• 1.4 本課題的研究目的和意義24-26
• 第2章 豬肺磷脂注射液中9種磷脂組分的HPLC-ELSD法測(cè)定26-44
• 2.1 實(shí)驗(yàn)部分27-28
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試藥27
• 2.1.2 溶液的配制27
• 2.1.3 色譜條件27-28
• 2.1.4 定量方法28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-35
• 2.2.1 系統(tǒng)適用性28-29
• 2.2.2 線(xiàn)性關(guān)系29-33
• 2.2.3 精密度試驗(yàn)33
• 2.2.4 檢測(cè)限33
• 2.2.5 回收率試驗(yàn)33-34
• 2.2.6 樣品含量試驗(yàn)34-35
• 2.3 討論35-42
• 2.3.1 色譜系統(tǒng)的選擇35-36
• 2.3.2 Plackett-Burman設(shè)計(jì)優(yōu)化色譜條件36-38
• 2.3.3 流速的選擇38
• 2.3.4 進(jìn)樣濃度的選擇38-40
• 2.3.5 色譜柱的選擇40-42
• 2.4 本章小結(jié)42-44
• 第3章 超臨界流體色譜法測(cè)蛋黃和大豆磷脂中的8種磷脂組分44-64
• 3.1 實(shí)驗(yàn)部分46-48
• 3.1.1 儀器與試藥46
• 3.1.2 溶液的配制46-47
• 3.1.3 色譜條件47-48
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-55
• 3.2.1 系統(tǒng)適用性48-49
• 3.2.2 線(xiàn)性關(guān)系49-52
• 3.2.3 精密度和重復(fù)性試驗(yàn)52-53
• 3.2.4 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)53
• 3.2.5 檢測(cè)限53
• 3.2.6 回收率試驗(yàn)53
• 3.2.7 樣品含量測(cè)定53-55
• 3.3 討論55-62
• 3.3.1 流動(dòng)相中改性劑的選擇55-56
• 3.3.2 色譜柱的選擇56-61
• 3.3.3 色譜條件的選擇61
• 3.3.4 檢測(cè)器條件的選擇61
• 3.3.5 供試品溶液濃度的選擇61-62
• 3.4 本章小結(jié)62-64
• 全文總結(jié)64-67
• 參考文獻(xiàn)67-75
• 致謝75-76
• 攻讀學(xué)位期間所開(kāi)展的科研項(xiàng)目和發(fā)表的學(xué)術(shù)論文76

【相似文獻(xiàn)】

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