發(fā)布時間：2017-09-05 14:31

  本文關(guān)鍵詞：基于分子印跡識別兩類天然兩親性化合物的初步研究

  更多相關(guān)文章： 分子印跡 反相微乳液聚合 靶向 分離純化

【摘要】：目的在本研究中,針對部分天然化合物的兩親性特征,我們將結(jié)合分子印跡技術(shù)(molecular imprinting technique,MIT),嘗試采用表面分子印跡策略來構(gòu)建一種對兩親性模板分子具有較高識別和結(jié)合的印跡聚合物(MIPNPs)。這一策略的優(yōu)點在于,對于兩親性的模板分子,采用反相微乳液聚合法制備聚合物的過程中,模板分子將傾向于停留在兩相界面(親水端嵌于材料內(nèi)部,疏水端暴露于表面),當(dāng)除去模板分子后,在MIPNPs的表面或近表面則會留下與模板分子(親水部分)相同的“孔穴”。由于MIPNPs的識別位點位于聚合物表面,因此能夠有效地改善傳統(tǒng)方法中模板分子過度包埋和不易脫除等問題,在實際應(yīng)用中更好的實現(xiàn)對模板分子的識別與分離。方法與結(jié)果在本課題的第一部分研究中,我們將從銅綠假單胞菌細胞壁中得到的具有兩親性的脂多糖分子,作為模板分子,制備得到的脂多糖MIPNPs形態(tài)較為圓整,大小均一,分布均勻,平均粒徑為(38.31±2.13)nm,分散性PDI為(0.112±0.102)。經(jīng)熒光偏振技術(shù)和微量熱泳動技術(shù)的研究測定,與非印跡聚合物NIPNPs相比,制備所得的脂多糖MIPNPs對LPS表現(xiàn)出了較好的特異性結(jié)合能力。流式細胞技術(shù)研究顯示,銅綠假單胞菌對脂多糖MIPNPs具有較好的攝取。在上述基礎(chǔ)上,我們構(gòu)建了銅綠假單胞菌小鼠腦膜炎模型,將包載熒光素的脂多糖MIPNPs以靜脈注射的方法注入模型小鼠體內(nèi),活體成像顯示,在模型小鼠的病灶部位(腦部)有較多的熒光分布,表明,脂多糖MIPNPs在體內(nèi)對模板分子也具有較好的識別能力。上述研究顯示,針對兩親性模板分子——脂多糖,由反相微乳液聚合法制備得到的結(jié)合位點位于材料表面的分子印跡聚合物,對模板分子在體內(nèi)外均表現(xiàn)出了良好的靶向識別能力,表明這種制備工藝和策略方法具有較好的可行性和研究成果。在本課題的第二部分研究中,我們將人參中主要的兩親性化合物——人參皂苷,作為模板分子,來制備MIPNPs。研究中,以人參皂苷Rg5作為模板分子,采用反相微乳液聚合方法制備得到的Rg5-MIPNPs,具有較好的粒徑分布,且對模板分子Rg5表現(xiàn)出了較高的親和力。我們用另一人參皂苷R1和具有相似結(jié)構(gòu)的甘草酸GA對Rg5-MIPNPs的選擇性進行驗證,結(jié)果顯示,Rg5-MIPNPs僅對Rg5表現(xiàn)出了特異的結(jié)合性,而對同樣的兩親性分子R1和GA則沒有特異性吸附。在此基礎(chǔ)上,我們將制備得到的Rg5-MIPNPs進一步制備得到凝膠柱,考察其對實際樣品的分離效果。結(jié)果顯示,以Rg5為模板分子制備并填充的凝膠柱,對Rg5具有較好的特異性識別分離能力。結(jié)論本課題研究針對部分天然化合物的兩親性,結(jié)合分子印跡技術(shù),采用表面分子印跡策略成功制備得到了對兩親性模板分子具有較高識別和結(jié)合的印跡聚合物。一方面,以脂多糖為模板,制備得到的脂多糖印跡聚合物,對模板分子在分子水平和細胞水平上均具有較高的特異性識別結(jié)合能力。初步實現(xiàn)了對目標細菌的體外靶向作用以及體內(nèi)病灶部位的位點識別作用,為靶向遞藥系統(tǒng)提供了新的研究思路。另一方面以人參皂苷為模板,制備得到的人參皂苷印跡聚合物,對模板分子亦具有較好的特異性識別結(jié)合能力,通過制備印跡聚合物的凝膠柱,初步實現(xiàn)了對目標物的分離,在兩親性化合物的分離純化上提供了一定的參考價值。
【關(guān)鍵詞】：分子印跡 反相微乳液聚合 靶向 分離純化
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O631.3
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 前言10-14
• 1 研究背景10-13
• 1.1 分子印跡技術(shù)10
• 1.2 分子印跡技術(shù)的應(yīng)用10-12
• 1.2.1 靶向遞藥與分子印跡10-11
• 1.2.2 分離純化與分子印跡11-12
• 1.3 兩親性化合物12-13
• 1.4 反相微乳液聚合法13
• 2 課題設(shè)計與研究內(nèi)容13-14
• 2.1 研究目的13
• 2.2 研究內(nèi)容13-14
• 第1部分 以脂多糖為模板分子的印跡聚合物的初步研究14-30
• 1 以脂多糖為模板分子的印跡聚合物的制備與表征15-18
• 1.1 材料15
• 1.2 儀器15-16
• 1.3 實驗方法16-17
• 1.3.1 反相微乳液聚合法制備脂多糖印跡聚合物16
• 1.3.2 模板分子的洗脫測定16
• 1.3.3 聚合物平均粒徑和分布的測定16
• 1.3.4 聚合物的形態(tài)測定16-17
• 1.4 結(jié)果與討論17-18
• 1.4.1 模板分子洗脫測定結(jié)果17
• 1.4.2 聚合物的粒徑分布情況17
• 1.4.3 聚合物的透射電鏡圖譜17-18
• 2 脂多糖印跡聚合物與模板分子相互作用的檢測18-23
• 2.1 材料18-19
• 2.2 儀器19
• 2.3 實驗方法19-20
• 2.3.1 異硫氰酸熒光素標記模板分子19
• 2.3.2 熒光偏振法測定脂多糖印跡聚合物與模板分子的相互作用19-20
• 2.3.3 微量熱泳動議法測定脂多糖印跡聚合物與模板分子的相互作用20
• 2.4 結(jié)果與討論20-23
• 2.4.1 熒光偏振測定結(jié)果20-22
• 2.4.2 微量熱泳動儀測定結(jié)果22-23
• 3 印跡聚合物納米粒的功能評價23-28
• 3.1 材料23
• 3.2 儀器23
• 3.3 細菌攝取實驗23-24
• 3.3.1 細菌培養(yǎng)23
• 3.3.2 包載 6-氨基熒光素FAM聚合物的制備23-24
• 3.3.3 流式細胞儀檢測細菌攝取24
• 3.4 小動物活體成像檢測聚合物的體內(nèi)分布24-25
• 3.4.1 銅綠假單胞菌小鼠腦膜炎模型的建立24
• 3.4.2 包載熒光素IR-783聚合物的制備24
• 3.4.3 小動物活體成像檢測聚合物體內(nèi)分布情況24-25
• 3.5 結(jié)果與討論25-28
• 3.5.1 聚合物包載熒光素FAM的含量測定結(jié)果25
• 3.5.2 細菌對不同聚合物的攝取結(jié)果25-26
• 3.5.3 聚合物體內(nèi)分布實驗26-28
• 4 本章小結(jié)28-30
• 第2部分 以人參皂苷為模板分子印跡聚合物的初步研究30-44
• 1 人參皂苷印跡聚合物的制備與表征31-37
• 1.1 材料31
• 1.2 儀器31
• 1.3 實驗方法31-33
• 1.3.1 反相微乳液聚合法制備人參皂苷Rg5印跡聚合物31-32
• 1.3.2 人參皂苷Rg5聚合物平均粒徑和分布的測定32
• 1.3.3 模板分子Rg5標準曲線的建立32
• 1.3.4 模板洗脫驗證32-33
• 1.3.5 高效液相色譜法測定人參皂苷Rg5印跡聚合物對模板分子的吸附性33
• 1.4 結(jié)果與討論33-37
• 1.4.1 人參皂苷Rg5聚合物的粒徑分布情況33-34
• 1.4.2 模板分子的洗脫測定結(jié)果34
• 1.4.3 人參皂苷Rg5印跡聚合物對模板分子的吸附性能34-37
• 2 人參皂苷印跡聚丙烯酰胺凝膠填充柱的制備37-41
• 2.1 材料37
• 2.2 儀器37
• 2.3 實驗方法37-39
• 2.3.1 不同凝膠濃度和交聯(lián)度對凝膠制備的影響37-38
• 2.3.2 聚丙烯酰胺凝膠的制備38
• 2.3.3 聚丙烯酰胺凝膠柱的制備38
• 2.3.4 聚丙烯酰胺凝膠柱對模板分子的吸附實驗38
• 2.3.5 聚丙烯酰胺凝膠柱分離結(jié)構(gòu)相似物38-39
• 2.4 結(jié)果與討論39-41
• 2.4.1 不同凝膠濃度和交聯(lián)度對凝膠制備的影響39
• 2.4.2 人參皂苷聚丙烯酰胺凝膠柱對模板分子的吸附實驗39-40
• 2.4.3 人參皂苷聚丙烯酰胺凝膠柱分離結(jié)構(gòu)相似物40-41
• 3 本章小結(jié)41-44
• 全文總結(jié)44-46
• 參考文獻46-52
• 文獻綜述52-64
• 參考文獻60-64
• 致謝64-66
• 碩士學(xué)位期間科研工作匯報66-68
• 附：英漢縮略語名詞對照68

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