本文關鍵詞：基于EXOⅢ酶的熒光信號放大探針的高靈敏基因檢測及凝膠電泳技術篩選細胞核酸適配體

  更多相關文章： EXOⅢ酶 信號放大探針 基因檢測 凝膠電泳 細胞 核酸適配體

【摘要】：本文第一部分就信號放大技術及其在基因檢測方面的應用作了相關研究。首先,用活化的PAA(MW=8000)交聯(lián)Fe_3O_4磁性納米粒制得表面帶有活化羧基的Fe_3O_4磁珠。利用氨基-羧基反應將氨基化的熒光核酸探針固定在Fe_3O_4磁珠表面,制備了熒光核酸探針-Fe_3O_4磁珠復合物。Fe_3O_4磁珠不僅能夠作為分離載體,還能夠有效淬滅熒光核酸探針上的熒光基團,降低了背景熒光信號,為后續(xù)熒光信號放大奠定了基礎。在加入待測靶分子后,靶分子與熒光核酸探針通過堿基互補形成雙鏈,利用核酸外切酶EXOⅢ獨特的水解特性,使得EXOⅢ水解探針并釋放出靶分子和熒光信號。靶分子繼續(xù)和過量的熒光核酸探針雜交,使EXOⅢ繼續(xù)水解釋放靶分子和熒光信號,這樣熒光信號得到顯著放大,建立了基于EXOⅢ輔助的循環(huán)信號放大的DNA檢測體系。與傳統(tǒng)的分子信標方法相比,該方法靈敏度更高,熒光信號放大能力更為顯著。此外,將雙熒光標記的熒光探針混合,能夠通過熒光檢測信號的不同對基因SNP進行快速分型。近年來,越來越多的核酸探針應用于識別和捕獲檢測癌細胞,用于癌癥的早期診斷和治療。核酸適配體是一種單鏈DNA/RNA探針,類似抗體,能夠作為分子探針廣泛應用于分子生物醫(yī)學領域。本文第二部分基于瓊脂糖凝膠電泳技術,結(jié)合基于細胞的指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(Cell-SELEX),對完整的靶細胞進行核酸適體篩選。以急性早幼粒細胞白血病細胞HL-60為靶細胞,將靶細胞固定于瓊脂糖凝膠中,通過電泳過程中ssDNA與靶細胞的親和力不同而導致的電泳遷移率不同,分離出強特異性的核酸適體。通過對電泳、PCR等條件的優(yōu)化,經(jīng)5輪篩選從原始隨機ssDNA文庫中初步篩選出了對HL-60細胞特異性結(jié)合的核酸適體。
【關鍵詞】：EXOⅢ酶 信號放大探針 基因檢測 凝膠電泳 細胞 核酸適配體
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：O657.3;R440
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 序言9-24
• 1. 信號放大技術9-15
• 1.1 信號放大技術概述9
• 1.2 基于核酸外切酶輔助的靶分子循環(huán)信號放大技術9-14
• 1.3 基于核酸外切酶輔助的靶分子循環(huán)信號放大技術在基因檢測中的應用14-15
• 2. 核酸適配體的篩選15-23
• 2.1 核酸適配體概述15-16
• 2.2 核酸適體的篩選方法16-21
• 2.3 核酸適體的應用21-23
• 3. 本文的立題思想和研究內(nèi)容23-24
• 第一部分 熒光信號放大探針在基因檢測中的應用24-41
• 第一章 基于EXOⅢ酶的熒光信號放大探針的SNP基因分型及定量測定24-41
• 1. 引言24-25
• 2. 實驗25-28
• 3. 結(jié)果與討論28-39
• 4. 小結(jié)39-41
• 第二部分 細胞核酸適配體篩選41-65
• 第二章 建立基于瓊脂糖凝膠電泳的HL-60細胞適體篩選方法41-50
• 1. 引言41
• 2．實驗41-45
• 3. 結(jié)果與討論45-49
• 4．小結(jié)49-50
• 第三章 單鏈次級文庫的制備50-56
• 1. 引言50
• 2. 實驗50-52
• 3. 結(jié)果與討論52-55
• 4. 小結(jié)55-56
• 第四章 基于瓊脂糖凝膠電泳的HL-60細胞適配體篩選56-65
• 1. 引言56
• 2. 實驗56-59
• 3. 結(jié)果與討論59-64
• 4. 小結(jié)64-65
• 結(jié)論與展望65-66
• 參考文獻66-74
• 攻讀學位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文74-75
• 致謝75-76

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本文編號：693412