發(fā)布時(shí)間：2017-08-18 04:08

  本文關(guān)鍵詞：量子點(diǎn)為探針的夾心免疫法檢測(cè)β-淀粉樣肽的含量

  更多相關(guān)文章： 阿爾茨海默病 量子點(diǎn) β-淀粉樣肽 夾心免疫法

【摘要】：量子點(diǎn)(quantum dots,QDs),又稱半導(dǎo)體納米晶,是準(zhǔn)零維的納米材料,由少量的原子組合所形成的,三個(gè)維度的尺寸都在100 nm以下。量子點(diǎn)的外觀恰似一極小的點(diǎn)狀物,主要為球形或類球形,是由IIB~ⅥA或IIIA~VA元素組成的半導(dǎo)體材料制成的,直徑納米級(jí)的顆粒。量子點(diǎn)由于它自身的量子效應(yīng),當(dāng)顆粒尺寸為納米級(jí)時(shí),尺寸限域?qū)⒁鸪叽缧?yīng)、量子限域效應(yīng)、宏觀量子隧道效應(yīng)和表面效應(yīng),因此與傳統(tǒng)有機(jī)熒光試劑相比,它具有寬的激發(fā)光譜和窄的發(fā)射光譜、很好的光穩(wěn)定性、較大的斯托克斯位移等優(yōu)越的熒光特性,是一種理想的熒光探針。因此,近年來,量子點(diǎn)在生命科學(xué)等相關(guān)學(xué)科的應(yīng)用也越來越成為人們關(guān)注的焦點(diǎn),特別是量子點(diǎn)在生物物質(zhì)的熒光標(biāo)記方面應(yīng)用更多。已報(bào)道的QDs在這一領(lǐng)域的應(yīng)用大部分集中于以量子點(diǎn)為熒光探針的識(shí)別和成像方面,如生物大分子之間的相互作用、細(xì)胞及組織的單色和多色標(biāo)記、生物體組織和在體光學(xué)成像,以及其在蛋白質(zhì)、DNA等生物樣品檢測(cè)中的應(yīng)用。阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一種進(jìn)行性的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。臨床主要表現(xiàn)為認(rèn)知功能下降、行為障礙、執(zhí)行功能障礙以及人格和行為改變等。根據(jù)2015年《世界阿爾茨海默病報(bào)告》顯示,預(yù)計(jì)到2050年,全球患有老年癡呆的人數(shù)將從目前的4600萬人增加至1.315億人。從報(bào)告顯示的數(shù)據(jù)可知近年來AD患者的數(shù)量急劇增加,并且該病在老年人中的患病率和致殘率高,治療的時(shí)間長(zhǎng)且治療費(fèi)用很高,給患者的家庭和社會(huì)帶來極大的負(fù)擔(dān)。毫無疑問,阿爾茨海默病是當(dāng)今和未來人類所面臨的最大的全球公共健康和社會(huì)保健挑戰(zhàn)之一。所以,探索早期診斷和治療這種疾病的方法是至關(guān)重要的。研究表明,細(xì)胞外淀粉樣斑塊的沉積是導(dǎo)致AD的主要原因,淀粉樣蛋白斑塊的主要成分是由42個(gè)氨基酸組成的肽,這種肽被稱為β-淀粉樣肽(Aβ(1-42)),它具有折疊和形成毒性聚合物的趨勢(shì)。由于Aβ(1-42)和AD之間的關(guān)系,Aβ(1-42)被認(rèn)為是AD早期診斷的標(biāo)志物。目前,已建立一些檢測(cè)Aβ的方法,但是大多數(shù)的方法操作繁瑣,儀器昂貴,靈敏度不高。因此,發(fā)展高靈敏度并且不需要昂貴儀器的檢測(cè)方法對(duì)早期診斷AD非常有必要�；诹孔恿己玫臒晒庑阅�,和其能夠用在生物樣品中作為信號(hào)標(biāo)記物,本論文的主要研究工作如下:(1)以量子點(diǎn)作為熒光探針和磁分離技術(shù)相結(jié)合而建立的夾心免疫法定量檢測(cè)Aβ(1-42)的含量。以表面修飾鏈霉親合素(Strepavidin,SA)磁珠(Magenetic Beads)與生物素修飾的AβC-端抗體(C terminiated Antibody,C-Ab)偶聯(lián),與樣品混合,再依次加入生物素修飾的N端抗體(N-Ab)、過量鏈霉親和素修飾的量子點(diǎn)(SA-QDs)。當(dāng)樣品中存在Aβ(1-42)時(shí),會(huì)形成MB-C-Ab-Aβ-N-Ab-QDs免疫夾心復(fù)合物。通過外加磁場(chǎng)可以從溶液中除去此夾心復(fù)合物,導(dǎo)致溶液中QDs濃度減小、熒光降低;且熒光的降低與Aβ(1-42)的濃度成線性�；诖�,成功構(gòu)建了免疫測(cè)定Aβ(1-42)的新方法,檢測(cè)的線性范圍是0.5-8.0 nmol L-1,檢出限為0.2 nmol L-1。該方法能用于檢測(cè)人腦脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中的Aβ(1-42)的檢測(cè)。(2)基于第一個(gè)工作,為了減少反應(yīng)時(shí)間,第一個(gè)工作時(shí)間為10.5 h,第二個(gè)工作時(shí)間為6 h;不需要用磁鐵進(jìn)行分離,實(shí)驗(yàn)操作更簡(jiǎn)單,同時(shí)提高檢測(cè)的靈敏度,本研究建立了一個(gè)以QDs作為信號(hào)標(biāo)記的高靈敏度免疫分析方法檢測(cè)Aβ(1-42)。首先,將Aβ(1-42)的C端抗體(C-Ab)固定在對(duì)抗體具有強(qiáng)結(jié)合力的96孔板上,加入樣品后,再加入生物素化的N端抗體(N-Ab);最后加入過量的QDs。當(dāng)樣品中存在當(dāng)樣品中存在Aβ(1-42)時(shí),會(huì)形成緊密結(jié)合在微孔板表面的C-Ab-Aβ-N-Ab-QDs免疫夾心復(fù)合物而導(dǎo)致上清中QDs濃度減小、熒光降低。上清溶液525 nm處的熒光強(qiáng)度與Aβ(1-42)的濃度在5-100 pmol L-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,檢出限1.7 pmol L-1。該方法也成果用于CSF中Aβ(1-42)的檢測(cè)。相比磁分離再檢測(cè),本方法靈敏度更高、操作更簡(jiǎn)單、分析速度更快、檢測(cè)成本更低,有希望用于臨床檢測(cè)中。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 量子點(diǎn) β-淀粉樣肽 夾心免疫法
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O657.3;R927.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 緒論11-27
• 1.1 引言11-12
• 1.2 量子點(diǎn)12-23
• 1.2.1 量子點(diǎn)的概述12
• 1.2.2 量子點(diǎn)的結(jié)構(gòu)12-13
• 1.2.3 量子點(diǎn)的熒光性能13-17
• 1.2.4 量子點(diǎn)的制備17-18
• 1.2.5 量子點(diǎn)的應(yīng)用18-23
• 1.3 阿爾茨海默病23-25
• 1.3.1 阿爾茨海默病的簡(jiǎn)介23-24
• 1.3.2 β-淀粉樣肽的簡(jiǎn)介24-25
• 1.3.3 β-淀粉樣肽的檢測(cè)25
• 1.4 本論文的研究?jī)?nèi)容及意義25-27
• 第二章 基于量子點(diǎn)的夾心免疫法檢測(cè)Aβ(1-42)27-38
• 2.1 引言27-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分28-31
• 2.2.1 試劑與儀器28
• 2.2.2 Aβ(1-42)單體的制備和腦脊液樣品的制備28-29
• 2.2.3 抗體的溶解與保存方法29
• 2.2.4 緩沖液的配制29
• 2.2.5 Aβ(1-42)的檢測(cè)步驟29-31
• 2.3 結(jié)果和討論31-36
• 2.3.1 Aβ(1-42)的檢測(cè)機(jī)制31-32
• 2.3.2 夾心免疫檢測(cè)的條件優(yōu)化32-34
• 2.3.3 方法的選擇性34-36
• 2.3.4 人腦脊液中Aβ(1-42)的檢測(cè)36
• 2.4 結(jié)論36-38
• 第三章 基于量子點(diǎn)雙抗體夾心免疫法檢測(cè)Aβ(1-42)38-48
• 3.1 引言38-40
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分40-42
• 3.2.1 試劑與儀器40
• 3.2.2 Aβ(1-42)單體的制備和腦脊液樣品的制備40-41
• 3.2.3 抗體的溶解與保存方法41
• 3.2.4 緩沖溶液的配制41
• 3.2.5 Aβ(1-42)的檢測(cè)步驟41-42
• 3.3 結(jié)果和討論42-46
• 3.3.1 Aβ(1-42)的檢測(cè)原理42
• 3.3.2 檢測(cè)條件的優(yōu)化42-44
• 3.3.3 方法的選擇性44-45
• 3.3.4 人腦脊液中Aβ(1-42)的檢測(cè)45-46
• 3.4 結(jié)論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-61
• 致謝61-63
• 碩士期間發(fā)表論文63

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 季雷華;高素蓮;張斌;;量子點(diǎn)的合成、毒理學(xué)及其應(yīng)用[J];環(huán)境化學(xué);2008年05期

2 王富;劉春艷;;發(fā)光碳量子點(diǎn)的合成及應(yīng)用[J];影像科學(xué)與光化學(xué);2011年04期

3 伊魁宇;王猛;邵明云;;量子點(diǎn)作為離子探針的分析應(yīng)用[J];廣州化工;2012年11期

4 羅慧;李曦;方婷婷;劉鵬;;量子點(diǎn)的毒性研究進(jìn)展[J];材料導(dǎo)報(bào);2013年19期

5 田瑞雪;武玲玲;趙清;胡勝亮;楊金龍;;碳量子點(diǎn)的氨基化及其對(duì)發(fā)光性能的影響[J];化工新型材料;2014年01期

6 ;“量子點(diǎn)”晶體將推動(dòng)部分物理工藝的進(jìn)步[J];光機(jī)電信息;2002年10期

7 徐萬幫;汪勇先;許榮輝;尹端l，

本文編號(hào)：692578