本文關(guān)鍵詞：一例pH實(shí)時(shí)監(jiān)控?zé)晒馓结樤O(shè)計(jì)及作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 熒光探針 溶酶體 腫瘤 pH 青蒿琥酯

【摘要】：細(xì)胞內(nèi)pH值在調(diào)節(jié)各種生理活動(dòng)中發(fā)揮著重要的作用,因此,實(shí)時(shí)監(jiān)控pH值的變化具有重要意義。相比于傳統(tǒng)檢測(cè)方法,熒光檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn),加之現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)的發(fā)展和各種先進(jìn)的熒光檢測(cè)技術(shù)及儀器,熒光探針技術(shù)日益成為熒光成像、基因診斷、醫(yī)療診斷等領(lǐng)域非常重要的研究手段。溶酶體是細(xì)胞中一種酸性亞細(xì)胞器,其pH的變化與溶酶體的功能息息相關(guān)。微環(huán)境的酸度與腫瘤的生長(zhǎng)、入侵和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),因此,對(duì)溶酶體和腫瘤組織成像并且監(jiān)控其pH變化具有重要意義。本文設(shè)計(jì)合成了一例可用于實(shí)時(shí)監(jiān)控活體pH變化的熒光探針RA,該探針在pH 4.25和7.20之間具有很好的可逆循環(huán)性,不僅能定位溶酶體,實(shí)時(shí)監(jiān)控青蒿琥酯(ART)、氯喹(CQ)以及地塞米松(DEX)誘導(dǎo)過(guò)程中細(xì)胞溶酶體pH的變化。該探針還能對(duì)卵巢癌腫瘤成像,證明了腫瘤組織的酸性環(huán)境,同時(shí)根據(jù)該探針在癌細(xì)胞和正常細(xì)胞中熒光強(qiáng)度的不同,推測(cè)其可以用于區(qū)分正常細(xì)胞和癌細(xì)胞,為癌癥的檢測(cè)和治療提供重要的信息。對(duì)于氯喹和地塞米松誘導(dǎo)溶酶體pH變化的研究有很多,而關(guān)于青蒿琥酯對(duì)細(xì)胞溶酶體作用的報(bào)道很少。本文設(shè)計(jì)合成了三例染料E、B、N,分別用于標(biāo)記ART得到AE、AB、AN。通過(guò)4種測(cè)試手段對(duì)AE、AB、AN進(jìn)行比較：首先,AE、AB、AN與E、B、N的光譜性質(zhì)基本沒(méi)有差異,隨后通過(guò)與Lyso Tracker Red進(jìn)行細(xì)胞復(fù)染實(shí)驗(yàn),用熒光的手段證明了ART聚集在細(xì)胞溶酶體內(nèi)。酶水解測(cè)試說(shuō)明AE與AB容易發(fā)生水解,而AN基本不被分解,加之其較低的細(xì)胞毒性,因此AN比較適合用于研究ART對(duì)細(xì)胞溶酶體的作用。
【關(guān)鍵詞】：熒光探針 溶酶體 腫瘤 pH 青蒿琥酯
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：O657.3
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 緒論8-28
• 1.1 細(xì)胞內(nèi)pH值的測(cè)定9-11
• 1.1.1 弱酸弱堿分布法9
• 1.1.2 核磁共振法9-10
• 1.1.3 微電極法10
• 1.1.4 熒光探針?lè)?/span>10-11
• 1.2 pH熒光探針研究進(jìn)展11-26
• 1.2.1 溶酶體pH探針11-19
• 1.2.2 線粒體pH探針19-23
• 1.2.3 腫瘤pH探針23-26
• 1.2.4 其他pH探針26
• 1.3 論文設(shè)計(jì)思想及研究?jī)?nèi)容26-28
• 2 實(shí)時(shí)監(jiān)控活體內(nèi)pH的熒光探針28-56
• 2.1 引言28-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分29-34
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑29
• 2.2.2 探針?lè)肿拥暮铣?/span>29-30
• 2.2.3 探針?lè)肿拥男阅軠y(cè)試30-34
• 2.3 結(jié)果與討論34-55
• 2.3.1 RA對(duì)H~+的響應(yīng)機(jī)理34-35
• 2.3.2 RA的體外光譜性質(zhì)和對(duì)H+的選擇性35-39
• 2.3.3 RA對(duì)活細(xì)胞的毒性測(cè)試39-40
• 2.3.4 RA在活細(xì)胞中的成像40-44
• 2.3.5 RA實(shí)時(shí)監(jiān)控細(xì)胞溶酶體pH的變化44-49
• 2.3.6 RA在SPF小鼠體內(nèi)成像49-52
• 2.3.7 RA對(duì)移植有HeLa和HL-7702小鼠成像52-53
• 2.3.8 RA對(duì)卵巢癌腫瘤小鼠成像53-55
• 2.4 本章小結(jié)55-56
• 3 熒光修飾對(duì)青蒿琥酯誘導(dǎo)溶酶體作用的影響56-71
• 3.1 引言56-57
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分57-62
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑57
• 3.2.2 染料分子合成及青蒿琥酯(ART)的熒光修飾57-61
• 3.2.3 E、B、N及ART的熒光修飾AE、AB、AN性能測(cè)試61-62
• 3.3 結(jié)果與討論62-70
• 3.3.1 E、B、N與AE、AB、AN的光譜性質(zhì)比較62-64
• 3.3.2 E、B、N、AE、AB、AN在活細(xì)胞中的熒光成像64-65
• 3.3.3 E、B、N、AE、AB、AN溶酶體定位實(shí)驗(yàn)65-67
• 3.3.4 液相色譜分析AE、AB、AN酶水解率67-68
• 3.3.5 ART與AE、AB、AN以及A+E、A+B、A+N對(duì)細(xì)胞活性的差異68-70
• 3.4 本章小結(jié)70-71
• 結(jié)論71-72
• 參考文獻(xiàn)72-79
• 附錄A 化合物的譜圖79-89
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況89-90
• 致謝90-91

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 張思佳;段小紅;焦陽(yáng);周密;;細(xì)胞內(nèi)pH值測(cè)定方法的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年21期

2 陳巍;馬會(huì)民;;檢測(cè)活性氧物種的氧雜蒽類(lèi)光學(xué)探針的研究進(jìn)展[J];分析化學(xué);2012年09期

3 黃婷;歐陽(yáng)翰;史真;高勇;;基于off-on機(jī)理的羅丹明基金屬離子熒光探針研究進(jìn)展[J];廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年S1期

4 李娜;劉美玲;尹文婷;楊征;李劍利;史真;;羅丹明基“OFF-ON”型熒光探針研究的一些新進(jìn)展[J];有機(jī)化學(xué);2011年01期

5 丁友法;胃液pH對(duì)β-葡萄糖醛酸苷酶活性的影響[J];臨床檢驗(yàn)雜志;1993年03期

，

本文編號(hào)：677930