本文關(guān)鍵詞：不同粒徑球狀納米金的合成及其對(duì)免疫層析方法檢測(cè)靈敏度影響的探究

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【摘要】：傳統(tǒng)膠體金納米粒子(20~30 nm)具有較小的摩爾消光系數(shù)以及較弱的呈色效應(yīng),導(dǎo)致以其作為探針載體的膠體金免疫層析法靈敏度偏低。隨著膠體金納米粒子的粒徑增加,其摩爾消光系數(shù)顯著升高,理論上能夠顯著提高免疫層析方法的檢測(cè)靈敏度。但是,金納米粒子尺寸過(guò)大可能會(huì)導(dǎo)致免疫反應(yīng)過(guò)程產(chǎn)生嚴(yán)重的空間位阻。為了探究球狀金納米粒子粒徑大小對(duì)免疫層析方法檢測(cè)靈敏度的影響,本研究制備了粒徑分別為20、60、100和180 nm的四種檸檬酸三鈉穩(wěn)定的膠體金。首先采用經(jīng)典的檸檬酸三鈉還原法合成20 nm膠體金,再通過(guò)層層種子生長(zhǎng)法合成較大粒徑的膠體金,最后將四種粒徑的金納米粒子分別用于制備赭曲霉毒素A(OTA)檢測(cè)探針。其次,采用生物膜干涉技術(shù)測(cè)定了四種粒徑的金納米探針對(duì)于OTA與牛血清白蛋白(BSA)的偶聯(lián)產(chǎn)物(OTA-BSA)的親和力,結(jié)果表明隨著金納米探針的粒徑增大,其對(duì)于全抗原的親和力顯著提高;其次通過(guò)硝酸纖維素膜(NC膜)上金納米探針與OTA-BSA抗原的免疫反應(yīng)動(dòng)力學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)100 nm金納米探針由于較高的摩爾消光系數(shù)及其對(duì)抗原較高的親和力而使得試紙條上檢測(cè)條帶呈現(xiàn)較強(qiáng)的判讀信號(hào),而180 nm金納米粒子因其較大的空間位阻效應(yīng)及較高的光散射系數(shù)不宜作為免疫層析方法的標(biāo)記探針。最后,本研究組裝并優(yōu)化了基于四種不同粒徑金納米探針的免疫層析試紙條,分別用于OTA的快速檢測(cè),結(jié)果顯示100 nm的金納米粒子作為探針載體表現(xiàn)出最高的檢測(cè)靈敏度。其中,濕法測(cè)試中,肉眼可見(jiàn)加標(biāo)阻斷濃度(Cut-off value)為2 ng/mL和競(jìng)爭(zhēng)分析半數(shù)抑制濃度(IC50)為0.27 ng/mL,分別較傳統(tǒng)粒徑(20 nm)膠體金免疫層析試紙條優(yōu)12.5和10倍;干法測(cè)試中,其Cut-off value和IC50分別較傳統(tǒng)粒徑(20 nm)膠體金免疫層析試紙條優(yōu)7.15和5.3倍。因此,100 nm膠體金作為新型探針載體材料在免疫層析檢測(cè)中具有良好的研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：金納米粒子 粒徑 免疫層析方法 親和力 免疫反應(yīng)動(dòng)力學(xué) 靈敏度
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：TB383.1;O657
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-5
• 縮略語(yǔ)表5-9
• 第一章 前言9-18
• 1.1 膠體金免疫層析快速檢測(cè)法概述9-11
• 1.1.1 膠體金概述9-10
• 1.1.2 免疫層析技術(shù)概述10
• 1.1.3 膠體金免疫層析方法概述10-11
• 1.2 生物膜干涉技術(shù)概述11-12
• 1.2.1 生物膜干涉技術(shù)原理11-12
• 1.2.2 生物膜干涉技術(shù)特點(diǎn)與應(yīng)用12
• 1.3 赭曲霉毒素概述12-16
• 1.3.1 赭曲霉毒素的毒性及作用機(jī)理12-13
• 1.3.2 赭曲霉毒素A的理化性質(zhì)13
• 1.3.3 赭曲霉毒素A臨床癥狀及毒性機(jī)理13-14
• 1.3.4 赭曲霉毒素A衛(wèi)生限量標(biāo)準(zhǔn)14
• 1.3.5 赭曲霉毒素A的檢測(cè)方法14-16
• 1.3.5.1 薄層色譜法14
• 1.3.5.2 高效液相色譜法14-15
• 1.3.5.3 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法15
• 1.3.5.4 分子印跡技術(shù)15
• 1.3.5.5 膠體金免疫層析技術(shù)15-16
• 1.4 本論文的研究意義及主要內(nèi)容16-18
• 第二章 不同粒徑膠體金的制備及其表面功能化修飾18-25
• 2.1 前言18-19
• 2.2 材料與儀器19
• 2.2.1 主要試劑及材料19
• 2.2.2 主要儀器設(shè)備19
• 2.2.3 主要試劑的配制19
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 2.3.1 20 nm AuNSs的合成19-20
• 2.3.2 60、100和 180 nm膠體金的合成20
• 2.3.3 不同粒徑膠體金的形態(tài)、大小以及光學(xué)特性表征20
• 2.3.4 四種粒徑膠體金免疫探針的制備20-21
• 2.4 結(jié)果與討論21-24
• 2.4.1 不同粒徑膠體金的合成及表征21-22
• 2.4.2 不同粒徑膠體金表面腹水飽和標(biāo)記量的確定22-23
• 2.4.3 膠體金探針的制備及表征23-24
• 2.5 小結(jié)24-25
• 第三章 不同粒徑膠體金免疫探針與OTA-BSA人工抗原親和力的測(cè)定25-33
• 3.1 前言25-26
• 3.2 材料與儀器26
• 3.2.1 主要試劑及材料26
• 3.2.2 主要儀器設(shè)備26
• 3.2.3 主要試劑的配制26
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法26-29
• 3.3.1 不同粒徑膠體金免疫探針的制備與處理26-27
• 3.3.2 DCC/NHS活潑酯法制備OTA-BSA人工全抗原及其表征27
• 3.3.3 生物素化全抗原的制備與處理27-28
• 3.3.4 BLItz@系統(tǒng)測(cè)試參數(shù)的設(shè)置及鏈霉親和素化檢測(cè)探針的處理28
• 3.3.5 利用BLI技術(shù)測(cè)定免疫反應(yīng)動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)28-29
• 3.3.6 不同粒徑免疫金探針對(duì)OTA-BSA人工抗原親和力的確定與比較29
• 3.4 結(jié)果與討論29-32
• 3.4.1 OTA-BSA人工全抗原的制備及表征29-30
• 3.4.2 生物素化全抗原的制備30
• 3.4.3 親和動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)的擬合及常數(shù)測(cè)定30-32
• 3.5 小結(jié)32-33
• 第四章 球狀膠體金粒徑大小對(duì)免疫層析試紙條檢測(cè)性能影響的探究33-42
• 4.1 引言33
• 4.2 材料與儀器33-34
• 4.2.1 主要試劑及材料33-34
• 4.2.2 主要儀器設(shè)備34
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 4.3.1 不同粒徑球狀金納米探針在試紙條上的免疫反應(yīng)動(dòng)力學(xué)34
• 4.3.2 不同粒徑膠體金免疫層析試紙條的檢測(cè)性能評(píng)價(jià)34-35
• 4.4 結(jié)果與討論35-41
• 4.4.1 不同粒徑膠體金免疫層析試紙條的免疫反應(yīng)動(dòng)力學(xué)分析35-38
• 4.4.2 四種粒徑膠體金免疫層析試紙條的檢測(cè)性能比較38-41
• 4.5 小結(jié)41-42
• 第五章 結(jié)論與展望42-43
• 5.1 結(jié)論42
• 5.2 展望42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 附錄A 試劑材料50-52
• 附錄B 儀器設(shè)備52-53
• 附錄C 試劑配制53-54
• 個(gè)人介紹54
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果54

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