本文關(guān)鍵詞：中藥材污染真菌毒素的液質(zhì)聯(lián)用高通量檢測研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 建立一種適合中藥材污染黃曲霉毒素B1,B2,G1,G2,赭曲霉毒素A和雜色曲霉毒素的液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS/MS)高通量檢測方法；并應(yīng)用該方法檢測收集自廣州地區(qū)不同藥店和醫(yī)院藥房的中藥材,從而初步了解該地區(qū)的中藥材污染以上6種真菌毒素的現(xiàn)狀,為國家管理部門制定相關(guān)的限量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。 方法： 以中藥材苦杏仁和太子參為代表藥材(分別代表果實(shí)種子類和根及根莖類中藥材),通過優(yōu)化高效液相的色譜條件(流動(dòng)相和洗脫梯度)、三重四級桿質(zhì)譜儀的參數(shù)和樣品前處理方法(提取溶劑、定容溶劑的選擇和稀釋法的應(yīng)用),以期提高整個(gè)檢測系統(tǒng)對黃曲霉毒素B1,B2,G1,G2,赭曲霉毒素A和雜色曲霉毒素的靈敏度,克服由中藥材復(fù)雜的化學(xué)成分所引起的基質(zhì)效應(yīng),從而提高LC-MS/MS檢測方法的準(zhǔn)確度；進(jìn)一步,本研究采用黃曲霉素專用商品多功能凈化柱Mycosep226純化樣品提取液,并比較柱純化方法與本研究建立的前處理方法在黃曲霉毒素B1,B2,G1和G2回收率上的差異,探討Mycosep226凈化柱用于中藥材污染四種黃曲霉毒素檢測的適用性；最后,本研究將建立的新方法拓展至薏苡仁、枸杞子等其它37種中藥材和花生等3種食品的檢測,分別考察這些樣品在高、中、低三個(gè)濃度水平的基質(zhì)效應(yīng),以評估該LC-MS/MS方法的可行性和適用性。 結(jié)果： 本研究最終確定的樣品制備和檢測方法為：取中藥材粉末(過三號篩),加10mL84%乙腈(體積比)渦旋振蕩提取70min后,取250μL的上清液在氮?dú)庀麓蹈?殘?jiān)尤?mL色譜甲醇復(fù)溶,最后經(jīng)過0.22μm的有機(jī)微孔濾膜過濾,直接進(jìn)樣檢測(10μL)；以C18色譜柱為固定相,4.0mmol/L醋酸銨-0.1%甲酸水溶液(水相)和甲醇(有機(jī)相)為流動(dòng)相,采用梯度洗脫的方式,樣品經(jīng)色譜分離后注入三重四級桿質(zhì)譜儀,在選擇反應(yīng)監(jiān)測模式(SRM)下檢測(ESI+)6種真菌毒素的峰面積,通過外標(biāo)法計(jì)算相應(yīng)的濃度。 經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證,黃曲霉毒素B1,B2,G1,G2,赭曲霉毒素A和雜色曲霉毒素在各自的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r0.995,兩種代表中藥材在高、中、低3個(gè)濃度水平的絕對回收率為84.8%-110.6%,提取回收率為83.6～106.1%,定量限為1.6-25.0ng/L,精密度RSD9.9%,長期穩(wěn)定性表明該檢測系統(tǒng)在一個(gè)月內(nèi)的穩(wěn)定性良好,RSD9.8%；而對比實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示所建立的方法與使用Mycosep226凈化柱純化樣品的方法相比,具有準(zhǔn)確度更高、操作更簡便和檢測成本更低等優(yōu)點(diǎn)。 在考察的39種中藥材中,薏苡仁和黨參等25種的基質(zhì)效應(yīng)80.2%-118.6%,該偏差與文獻(xiàn)報(bào)道的允許范圍一致,表明基質(zhì)效應(yīng)不會(huì)對這些中藥材的準(zhǔn)確定量造成影響,可忽略不計(jì),并且相應(yīng)藥材樣品的檢測結(jié)果可采用外標(biāo)法進(jìn)行定量換算；而紅棗和紅參等其他14種中藥材的考察結(jié)果顯示,每種藥材均有1或2個(gè)真菌毒素的基質(zhì)效應(yīng)小于80%或大于120%,表明中藥材產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)會(huì)對這些真菌毒素的檢測結(jié)果產(chǎn)生一定影響,該LC-MS/MS方法仍存在一定的局限性。 對收集自廣州地區(qū)5家大型連鎖型藥店和5家三甲醫(yī)院中藥房的39種中藥材共365份樣品的LC-MS/MS檢測結(jié)果顯示,中藥材污染雜色曲霉毒素的情況最嚴(yán)重(污染率23.8%),其次是黃曲霉毒素B1(7.9%)、赭曲霉毒素A(4.4%)和黃曲霉毒素B2(3.8%),最后是黃曲霉毒素G1(1.6%)和G2(0.3%)。 利用本論文的方法測得大米、花生和玉米三種食品的基質(zhì)效應(yīng)為82.1%-118.3%,表明該方法同樣適用于這三種樣品的高通量檢測。對購買自廣州地區(qū)5家超市共16份樣品的檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),樣品中污染最嚴(yán)重的真菌毒素是黃曲霉毒素B1(25.0%),其次是雜色曲霉毒素(18.8%)、黃曲霉毒素B2(12.5%)和G2(6.3%),但未見黃曲霉毒素G1和赭曲霉毒素A的污染。 結(jié)論： 本研究建立的LC-MS/MS方法具有預(yù)處理簡便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn),樣品無需經(jīng)過凈化柱純化即可通過外標(biāo)法進(jìn)行準(zhǔn)確的定量,從而適合用這39種中藥材及3種食品污染6種真菌毒素的高通量檢測。對采集白藥店和醫(yī)院藥房的中藥材樣品的檢測結(jié)果表明雜色曲霉毒素的污染情況是6種真菌毒素中最嚴(yán)重的,但此前并未見有相關(guān)的報(bào)道�？紤]到雜色曲霉毒素是黃曲霉毒素B1在生物合成途徑上的前體化合物,并且被世界衛(wèi)生組織劃定為2B致癌物,因此這一現(xiàn)狀應(yīng)當(dāng)引起有關(guān)部門的重視,開展更廣泛的調(diào)查和研究,以保證中藥材的用藥安全。
【關(guān)鍵詞】：中藥材 黃曲霉毒素 赭曲霉毒素A 雜色曲霉毒素 液質(zhì)聯(lián)用
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R284.1;O657.63
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 目錄7-9
• 圖目錄9-10
• 表目錄10-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-22
• 第一節(jié) 真菌毒素的簡介及其限量標(biāo)準(zhǔn)11-15
• 一、黃曲霉毒素11-12
• 二、赭曲霉毒素A12
• 三、雜色曲霉毒素12-13
• 四、中藥材污染真菌毒素現(xiàn)狀分析13-14
• 五、真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)14-15
• 第二節(jié) 中藥材污染真菌毒素檢測方法的概述15-22
• 一、薄層色譜法15
• 二、氣相色譜法15-16
• 三、高效液相色譜法16
• 四、液質(zhì)聯(lián)用法16-22
• 第二章 LC-MS/MS檢測6種真菌毒素方法的優(yōu)化及建立22-37
• 第一節(jié) 材料與方法22-24
• 一、儀器22
• 二、試劑與材料22
• 三、工作對照品溶液的配制22-23
• 四、中藥材采集23
• 五、實(shí)驗(yàn)條件23-24
• 第二節(jié) LC-MS/MS方法的優(yōu)化24-28
• 一、質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化24-25
• 二、液相條件優(yōu)化25-27
• 三、樣品前處理方法的優(yōu)化27-28
• 第三節(jié) LC-MS/MS的方法學(xué)考察28-35
• 一、專屬性試驗(yàn)28
• 二、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立28-29
• 三、檢測限(LOD)及定量限(LOQ)29-31
• 四、日內(nèi)、日間精密度試驗(yàn)31
• 五、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)31
• 六、基質(zhì)效應(yīng)的考察31-32
• 七、回收率實(shí)驗(yàn)32
• 八、樣品前處理方法的對比實(shí)驗(yàn)32-35
• 第四節(jié) 討論35-36
• 一、LC-MS/MS方法的優(yōu)化35
• 二、柱純化方法的探討35-36
• 第五節(jié) 小結(jié)36-37
• 第三章 LC-MS/MS方法高通量檢測中藥材污染的6種真菌毒素37-50
• 第一節(jié) 基質(zhì)效應(yīng)的考察37-41
• 一、中藥材樣品的采集37-38
• 二、基質(zhì)效應(yīng)的考察38-41
• 第二節(jié) 中藥材樣品的檢測41-48
• 一、目標(biāo)峰確認(rèn)的依據(jù)41
• 二、樣品的檢測與分析41-48
• 第三節(jié) 討論48-49
• 一、基質(zhì)效應(yīng)的考察48
• 二、中藥材污染真菌毒素的現(xiàn)狀分析48-49
• 第四節(jié) 小結(jié)49-50
• 第四章 LC-MS/MS方法拓展應(yīng)用的研究50-53
• 一、樣品采集50
• 二、基質(zhì)效應(yīng)考察50-51
• 三、樣品的檢測與分析51
• 四、討論51-52
• 五、小結(jié)52-53
• 第五章 結(jié)論與展望53-55
• 第一節(jié) 結(jié)論53
• 第二節(jié) 展望53-55
• 一、基質(zhì)效應(yīng)的考察53-54
• 二、真菌毒素的檢測54
• 三、真菌毒素檢測結(jié)果的確證54
• 四、建立中藥材污染真菌毒素的預(yù)警方法的必要性54-55
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 英文縮略語58-59
• 在校期間發(fā)表論文情況59-61
• 致謝61-62
• 資助項(xiàng)目62

【參考文獻(xiàn)】

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：中藥材污染真菌毒素的液質(zhì)聯(lián)用高通量檢測研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：472206