發(fā)布時間：2024-06-07 05:58

　　新阿波羅棲熱袍菌(Thermotoga neapolitana)是一種超嗜熱菌,屬于革蘭氏陰性菌,其最適生長溫度高達80℃,T.neapolitana利用廣泛的底物發(fā)酵產氫和微量乙醇,其代謝途徑中的一個關鍵酶是丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶(PFOR)。PFOR全酶是由α,β,γ,δ四個亞基組成,PFOR酶催化丙酮酸和輔酶A轉化成乙酰輔酶A。它使用焦磷酸硫胺素(TPP)作為輔酶。新阿波羅棲熱袍菌(T.neapolitana)來源的丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶的酶學特性還未闡明,本研究從新阿波羅棲熱袍菌(T.neapolitana)中克隆丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶基因,在大腸桿菌中進行重組表達,對重組表達的PFOR酶進行純化,和酶學性質分析,以及對PFOR酶酶法合成乙酰輔酶A進行了探索。主要研究內容與研究結果如下:(1)構建丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶重組表達質粒pET-PFOR:采用PCR方法從新阿波羅棲熱袍菌全基因組中擴增出目標基因片段,并以pET表達載體為基礎,構建出含丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶基因的重組表達質粒。(2)重組丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶的表達和純化。將重組表達質粒轉入到大腸桿菌E.coli BL21...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

產量是釀酒酵母的2.5倍，也是公認的安全菌株，但是它只能利用如葡萄糖、果糖、蔗糖等，不能代謝戊糖，而且還會代謝一些副產物[運動發(fā)酵單胞菌在工業(yè)應用上有了較大的局限性。利用大腸桿菌產有較其它常溫菌的優(yōu)勢，它有完整的五碳糖和六碳糖的代謝途徑，,底物范圍廣等優(yōu)點，但同時存在與運動....

乙酸和乙醇。嗜熱厭丙酮酸代謝（通常在嗜熱厭氧桿菌和嗜熱厭氧桿菌中）由PFOR催化，酸轉化為乙酰輔酶A和CO2。這些氧化還原酶的活性取決于細菌種類長條件[59]。已有報道顯示在解糖熱厭氧桿菌中大部分電子以NAD（P）失而不是產生氫。在熱纖梭菌中，通過PFL酶形成甲酸....

并在丙酮酸異化中起關鍵作用[64]。丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶（PFOR）基因在古細菌和真核生物中存在（如圖1.3）。古細菌中似乎都含有PFOR基因；它廣泛分布于細菌中，厭氧原生動物也存在PFOR基因[65]。圖1.3丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶[64]Fig1.3Pyru....

圖1.3丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶[64]Fig1.3PyruvateFerredoxinOxidoreductase[64]酮酸鐵氧化還原酶的結構eapolitanaPFOR與非洲脫硫弧菌PFOR一樣，含有3個[4Fe-4列分析證實存在兩種典型的高度保守的富....

本文編號：3990887