本文關(guān)鍵詞：靈芝菌絲體和子實體中三萜酸的高效提取及其組分初步分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：靈芝三萜酸是除多糖外靈芝中最主要的活性成分,具有廣泛的藥理作用。然而,目前市場上三萜酸產(chǎn)品稀少,價格昂貴,嚴重阻礙了對其藥理和應(yīng)用開發(fā)的進一步研究。因此,對不同來源的靈芝材料進行三萜酸的提取并對其組分進行分析具有重要的現(xiàn)實意義。本論文以靈芝子實體和菌絲體為研究對象,分別對其三萜酸的提取技術(shù)進行了試驗,在此基礎(chǔ)上,對三萜酸的組分進行了初步分析,并對相應(yīng)產(chǎn)品的穩(wěn)定性進行了研究,得出以下主要結(jié)果：1.以靈芝子實體為研究對象,通過對比實驗確定以無水乙醇為提取溶劑,不經(jīng)酶預(yù)處理的回流提取法作為研究靈芝子實體中三萜酸高效提取的基礎(chǔ)。進一步進行單因素實驗、Box-Benhnken設(shè)計以及響應(yīng)面法優(yōu)化。以液料比(A)、提取時間(B)和提取次數(shù)(C)為提取的關(guān)鍵因素,通過Box-Benhnken設(shè)計及響應(yīng)面法優(yōu)化,得到了可預(yù)測靈芝了實體三萜酸提取率的回歸模型：Y=0.33+0.003125A+0.021B-0.014C+0.0005AB-0.019AC-0.005BC-0.044A2-0.040B2-0.032C2.經(jīng)分析,得到提取靈芝子實體中三萜酸的最佳條件為：液料比25：1,提取時間2h,提取次數(shù)3次。最優(yōu)條件下的子實體三萜酸提取率為(0.335±0.008)mg/g,與模型預(yù)測值相符。2.以靈芝CGMCC5.616菌株為研究對象,通過搖瓶發(fā)酵獲得大量菌絲體。確定以無水乙醇進行回流提取的前提下,采用單因素實驗考察液料比、提取時間和提取次數(shù)等對靈芝菌絲體三萜酸提取率的影響,然后通過中心組合旋轉(zhuǎn)設(shè)計和響應(yīng)面優(yōu)化實驗,得到了靈芝菌絲體三萜酸提取率對這三個因素的多元回歸方程：Y=0.52+0.022A+0.027B+0.064C+0.021AB-0.013AC+0.010BC-0.056A2-0.094B2-0.057C2。確定了最佳提取條件為：液料比12：1,提取時間2h,提取次數(shù)3次。驗證試驗結(jié)果表明菌絲體三萜酸提取率為(0.537±0.005))mg/g,與模型預(yù)測值相符。3.以ADS-8大孔樹脂為媒介,對提取的靈芝三萜酸進行了初分離�？疾炝讼疵摿魉賹`芝菌絲體三萜酸的影響,液相色譜分析顯示,不同流速下洗脫出的三萜酸組成不同,特別是保留時間為44.66mmin的色譜峰在含量上差異較大；當流速為3mL/min時,與1 mL/min,2mL/min條件下相比,洗出了兩個新的組分峰(保留時間分別為66.27min和67.31min)。另外,乙醇濃度對菌絲體三萜酸的洗脫有顯著影響,70%-90%的乙醇可將三萜酸完全洗脫下來,60%的乙醇可洗脫下大部分的三萜酸,而40%和20%的乙醇洗脫效果不理想。高效液相色譜進一步分析表明,菌絲體和子實體中三萜酸的組分存在著明顯差異,子實體中三萜酸成分出峰較晚,且組分相對較多。4.采用LC-ESI-MS分析靈芝菌絲體中三萜酸成分,結(jié)果顯示,菌絲體中含有少量的靈芝酸A和靈芝酸B。另外,菌絲體中兩個主要的洗脫峰,一個為靈芝酸A的類似物,另一個為Ganolucidic acid B的類似物,但其具體結(jié)構(gòu)還有待進一步確定。5.三萜酸對溶劑的穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明,菌絲體與子實體三萜酸的穩(wěn)定性相似,都受酸催化的影響,與溶劑的極性無關(guān)。對溫度的穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明,在溫度為25℃及以下時,子實體和菌絲體三萜酸相對較穩(wěn)定；隨著溫度的升高,兩類三萜酸都有不同程度的降解。
【關(guān)鍵詞】：靈芝 三萜酸 響應(yīng)面法 組分 穩(wěn)定性
【學(xué)位授予單位】：中南林業(yè)科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：O652;R284.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 1 緒論11-23
• 1.1 靈芝概況11-12
• 1.2 靈芝三萜的結(jié)構(gòu)12-13
• 1.3 靈芝三萜酸的藥理作用及構(gòu)效關(guān)系13-16
• 1.3.1 靈芝三帖酸的藥理作用13-15
• 1.3.2 靈芝三帖酸的構(gòu)效關(guān)系15-16
• 1.4 靈芝三萜液體發(fā)酵16
• 1.5 靈芝三萜酸的提取方法16-18
• 1.5.1 有機溶劑浸提法17
• 1.5.2 傳統(tǒng)回流法17
• 1.5.3 超聲波提取法17-18
• 1.5.4 微波萃取法18
• 1.5.5 超臨界CO2萃取法18
• 1.6 靈芝三萜酸的分離純化18-20
• 1.6.1 靈芝三萜酸的初分離18-19
• 1.6.2 靈芝三萜酸的再分離純化19-20
• 1.7 靈芝三萜酸的分析20-21
• 1.7.1 薄層層析法(TLC)20
• 1.7.2 紫外分光光度法20
• 1.7.3 高效液相色譜(HPLC)20-21
• 1.7.4 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)21
• 1.8 論文研究的目的、意義及主要內(nèi)容21-23
• 1.8.1 目的和意義21-22
• 1.8.2 主要研究內(nèi)容22-23
• 2 靈芝子實體中三萜酸的提取研究23-37
• 2.1 試驗材料23-24
• 2.1.1 材料23
• 2.1.2 主要試劑23-24
• 2.1.3 主要儀器24
• 2.2 試驗方法24-26
• 2.2.1 靈芝子實體的粉碎24
• 2.2.2 熊果酸標準曲線的繪制24-25
• 2.2.3 靈芝子實體中三萜酸含量的測定25-26
• 2.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析26
• 2.3 結(jié)果與討論26-36
• 2.3.1 熊果酸標準曲線制作26
• 2.3.2 靈芝子實體中三萜酸的提取工藝研究26-29
• 2.3.3 回流法提取工藝參數(shù)的確定29-31
• 2.3.4 響應(yīng)面優(yōu)化試驗31-36
• 2.4 小結(jié)與討論36-37
• 3 靈芝菌絲體中三萜酸的提取工藝研究37-51
• 3.1 實驗材料37-38
• 3.1.1 菌種37
• 3.1.2 主要試劑37-38
• 3.1.3 主要儀器38
• 3.1.4 培養(yǎng)基38
• 3.2 實驗方法38-40
• 3.2.1 菌絲體的制備38-39
• 3.2.2 熊果酸標準曲線的繪制39
• 3.2.3 靈芝菌絲體三萜酸含量的測定39-40
• 3.2.4 數(shù)據(jù)分析40
• 3.3 結(jié)果與討論40-49
• 3.3.1 熊果酸標準曲線制作40
• 3.3.2 不同提取溶劑對靈芝菌絲體三萜酸提取率的影響40-41
• 3.3.3 纖維素酶預(yù)處理對靈芝菌絲體三萜酸提取率的影響41
• 3.3.4 不同提取方法對靈芝菌絲體三萜酸提取率的影響41-42
• 3.3.5 回流法提取工藝參數(shù)的確定42-44
• 3.3.6 響應(yīng)面優(yōu)化試驗44-49
• 3.4 小節(jié)與討論49-51
• 4 靈芝三萜酸的組分及其穩(wěn)定性研究51-71
• 4.1 試驗材料51-53
• 4.1.1 材料51-52
• 4.1.2 主要試劑52
• 4.1.3 主要儀器52-53
• 4.2 實驗方法53-56
• 4.2.1 靈芝三萜酸提取液的制備53
• 4.2.2 大孔樹脂吸附分離53-54
• 4.2.3 高相液相色譜(HPLC)分析54-55
• 4.2.4 質(zhì)譜(MS)分析55
• 4.2.5 靈芝三萜酸的穩(wěn)定性55-56
• 4.3 結(jié)果與討論56-70
• 4.3.1 菌絲體和子實體三萜酸的組分差異56-57
• 4.3.2 洗脫條件對三萜酸組分的影響57-59
• 4.3.3 靈芝酸標準品的ESI/MS分析59-64
• 4.3.4 菌絲體中三萜酸成分的鑒定64-66
• 4.3.5 三萜酸的穩(wěn)定性實驗66-70
• 4.4 小節(jié)與討論70-71
• 5 主要結(jié)論71-73
• 參考文獻73-81
• 附錄A (攻讀學(xué)位期間的主要學(xué)術(shù)成果)81-83
• 致謝83

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 呂超田;姚向陽;孫程;;靈芝主要活性物質(zhì)及其藥理作用研究進展[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(上半月刊);2011年01期

2 王幫武,楊新林,張利剛,孫智杰,徐建蘭;靈芝酸性組分的提取分離及抑菌活性研究[J];北京理工大學(xué)學(xué)報;2002年01期

3 劉太鋒;;靈芝的現(xiàn)代研究概述[J];產(chǎn)業(yè)與科技論壇;2012年18期

4 馬禮金,姚汝華,黃自然;超臨界流體萃取紅芝三萜化合物[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;1998年03期

5 戴玉成;;中國多孔菌名錄[J];菌物學(xué)報;2009年03期

6 賀紅,肖省娥,徐新春,徐鴻華;靈芝菌絲體深層培養(yǎng)的研究[J];廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;1998年03期

7 劉高強;丁重陽;章克昌;王曉玲;韓文軍;;藥用昆蟲蜣螂對靈芝多糖生物合成的影響[J];生物工程學(xué)報;2009年06期

8 劉高強;趙艷;;紫芝胞外三萜物質(zhì)的體外抑菌作用[J];食品工業(yè)科技;2008年12期

9 余素萍,張勁松,楊焱,賈薇,潘迎捷;靈芝胞內(nèi)三萜高產(chǎn)菌株的篩選及發(fā)酵條件的優(yōu)化[J];微生物學(xué)通報;2005年01期

10 李平作,夏結(jié)紅,章克昌;靈芝深層發(fā)酵產(chǎn)物中四環(huán)三萜酸定性分析[J];中草藥;1999年08期

  本文關(guān)鍵詞：靈芝菌絲體和子實體中三萜酸的高效提取及其組分初步分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：389908