固定化酶微反應(yīng)器(IMER)是將酶的固定化與微通道內(nèi)酶促反應(yīng)相結(jié)合而得到的一類酶反應(yīng)裝置。IMER兼具酶的特異性催化、固定化酶的優(yōu)點和微通道反應(yīng)的低試劑消耗等優(yōu)勢,為生物醫(yī)學、蛋白質(zhì)組學和藥學研究等創(chuàng)造了更多可能性。近年來,基于毛細管柱的IMER可與毛細管電泳(CE)進行聯(lián)用(CE-IMER),結(jié)合CE分析速度快、試劑消耗少以及分離模式多等優(yōu)勢,在酶分析領(lǐng)域顯示出巨大的潛力。針對如何實現(xiàn)毛細管柱的多酶固定化以及提高IMER的催化效率、穩(wěn)定性和重復(fù)使用性等性能,發(fā)展IMER的制備方法是至關(guān)重要的。論文采取DNA定向固定化技術(shù)(DDI)將模型酶固定于用聚酰胺胺樹狀大分子(PAMAM)修飾的毛細管內(nèi)壁,利用DNA雙鏈的互補作用,構(gòu)建一種可調(diào)控的雙酶固定化開管式IMER。并且將該微反應(yīng)器與CE聯(lián)用應(yīng)用于葡萄糖的檢測和酶抑制劑的篩選,證明此方法具有推廣于生物分析領(lǐng)域的可行性。(1)采用兩組不同的DNA鏈分別與葡萄糖氧化酶(GOx)和辣根過氧化物酶(HRP)錨定,然后通過DDI技術(shù)將兩種DNA-酶復(fù)合物共固定在由PAMAM修飾的毛細管內(nèi)壁,構(gòu)建一種基于毛細管柱的新型雙酶固定化開管式IMER。PAM...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 毛細管電泳
        1.1.1 毛細管電泳的原理
        1.1.2 毛細管電泳的特點
    1.2 固定化酶微反應(yīng)器
        1.2.1 固定化酶技術(shù)
        1.2.2 多酶固定化
        1.2.3 固定化酶微反應(yīng)器
    1.3 毛細管電泳-固定化酶微反應(yīng)器在酶分析方面的應(yīng)用
        1.3.1 酶反應(yīng)動力學研究
        1.3.2 酶抑制劑篩選
    1.4 DNA定向固定化技術(shù)
    1.5 課題提出與研究內(nèi)容
第二章 基于DNA定向固定化技術(shù)的開管式毛細管固定化多酶微反應(yīng)器的制備及其應(yīng)用
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 實驗試劑
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 實驗過程
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 OT-IMER的表征
        2.3.2 OT-IMER酶解條件的探究
        2.3.3 OT-IMER的動力學研究
        2.3.4 OT-IMER的可逆性考察
        2.3.5 OT-IMER的穩(wěn)定性和重復(fù)使用性
        2.3.6 不同氨基化方法對OT-IMER酶解效果的影響
        2.3.7 葡萄糖檢測
    2.4 小結(jié)
第三章 基于DNA定向固定化技術(shù)的在線模式毛細管固定化多酶微反應(yīng)器的制備及其應(yīng)用
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 實驗試劑
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 實驗過程
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 在線模式CE-IMER酶分析效果考察
        3.3.2 在線模式CE-IMER酶分析條件的優(yōu)化
        3.3.3 CE-IMER在抑制劑分析中的應(yīng)用
    3.4 小結(jié)
第四章 結(jié)論
參考文獻
研究成果及其發(fā)表的學術(shù)論文
    第一作者發(fā)表的論文
    與他人合作發(fā)表的論文
致謝
作者及導(dǎo)師簡介
附件



本文編號：3872725