研究目的:殼聚糖(Chitosan,CS)是一種典型的陽離子線性多糖,是由N-乙酰-D-氨基葡萄糖和D-氨基葡萄糖單元通過β-(1,4)糖苷鍵連接構(gòu)成。殼聚糖可與DNA通過正負(fù)電荷相互作用形成復(fù)合物,并且可以對DNA起到保護(hù)作用,使其免受DNA酶的降解,被認(rèn)為是一種良好的基因運送載體。但是殼聚糖在基因遞送過程中,具有低轉(zhuǎn)染效率和低特異性,質(zhì)子緩沖能力差等問題。我們?yōu)榱颂岣咂浠蜣D(zhuǎn)染效率和質(zhì)子緩沖能力,采用聚乙烯亞胺(Polyethyleneimine,PEI)進(jìn)行修飾,PEI具備高電荷密度、良好的DNA結(jié)合能力,其質(zhì)子海綿效應(yīng)可以促進(jìn)胞內(nèi)逃逸。并將葉酸(Folate,FA)連接在載體上以期提高載體的靶向治療作用。相關(guān)研究表明,癌細(xì)胞之所以能夠逃避機體免疫系統(tǒng)的識別,其中很重要的一個原因就是其表面具有高表達(dá)的PD-L1。為此,我們構(gòu)建了可以靶向PD-L1的RNAi表達(dá)質(zhì)粒shPD-L1。CS-PEI-FA納米復(fù)合物負(fù)載治療基因shPD-L1用于乳腺癌的治療。研究內(nèi)容與結(jié)果:(1)合成與表征:利用馬來酸酐(Maleicanhydride,MAH)活化殼聚糖的氨基,PEI與CS活化的氨基反應(yīng)...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 載體合成與表征
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 質(zhì)粒
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 實驗試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 CS-PEI的合成
        2.3.2 CS-PEI-FA的合成
        2.3.3 FITC標(biāo)記
        2.3.4 核磁共振氫譜(1H-NMR)
        2.3.5 傅里葉紅外光譜(FTIR)
        2.3.6 電位
        2.3.7 粒徑
        2.3.8 透射電子顯微鏡(TEM)
        2.3.9 DNA凝膠阻滯實驗
        2.3.10 載體的pH緩沖效應(yīng)
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 核磁共振氫譜
        2.4.2 紅外光譜
        2.4.3 電位
        2.4.4 粒徑
        2.4.5 TEM
        2.4.6 DNA凝膠阻滯
        2.4.7 CS-PEI-FA/DNA粒徑與電位測定
        2.4.8 pH緩沖效應(yīng)
    2.5 結(jié)論
第3章 體外細(xì)胞實驗
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 質(zhì)粒與細(xì)胞株
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 實驗試劑
        3.2.4 主要溶液的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 細(xì)胞毒性
        3.3.3 細(xì)胞周期
        3.3.4 細(xì)胞凋亡
        3.3.5 細(xì)胞攝取
        3.3.6 胞內(nèi)分布
        3.3.7 攝取機制
        3.3.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.3.9 熒光實時定量PCR
        3.3.10 Westernblot
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 細(xì)胞毒性
        3.4.2 細(xì)胞周期
        3.4.3 細(xì)胞凋亡
        3.4.4 細(xì)胞攝取
        3.4.5 胞內(nèi)分布
        3.4.6 攝取機制
        3.4.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.4.8 熒光實時定量PCR
        3.4.9 Westernblot
    3.5 結(jié)論
第4章 體內(nèi)動物實驗
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 質(zhì)粒、細(xì)胞株、動物
        4.2.2 實驗儀器
        4.2.3 實驗試劑
        4.2.4 主要溶液的配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 荷瘤小鼠模型的建立
        4.3.2 分組、給藥
        4.3.3 瘤體積
        4.3.4 相對腫瘤增殖率
        4.3.5 抑瘤率
        4.3.6 熒光實時定量PCR
        4.3.7 Westernblot
        4.3.8 腫瘤切片
        4.3.9 各臟器病理切片
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 體重
        4.4.2 相對腫瘤體積
        4.4.3 相對腫瘤增值率
        4.4.4 抑瘤率
        4.4.5 熒光實時定量PCR
        4.4.6 Westernblot
        4.4.7 腫瘤切片
        4.4.8 病理切片
    4.5 結(jié)論
第5章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
個人簡歷
致謝



本文編號：3864752