抗體在癌癥治療和免疫診斷中起著重要作用,抗體藥物作為新一代抗腫瘤藥物有著廣闊的市場。目前,蛋白A親和層析(Protein A affinity chromatography)是用于抗體純化最常用的色譜技術平臺,但其存在配體造價高昂、重復使用性差、洗脫條件苛刻等問題,一定程度上制約了抗體行業(yè)的發(fā)展。近年來,聚酰胺-胺樹枝狀大分子(Poly amidoamine,PAMAM)在生物醫(yī)藥和免疫吸附中的應用越來越多,已證明將樹枝狀大分子用作間隔臂是提高配基密度和吸附容量的有效手段。而基于溫敏聚合物開發(fā)的溫敏色譜(Temperature-responsive affinity chromatography,TRAC)則可在純水作為流動相的條件下,通過響應溫度變化調節(jié)填料表面的親疏水性質,實現(xiàn)對目標物有效分離和提純。基于此,本論文將樹枝狀聚合物和溫敏色譜的特點相結合,制備了一種用于抗體分離純化高容量溫敏親和色譜介質,使用純水作流動相,僅通過改變溫度,以更溫和的方式(40℃上樣,5℃洗脫,p H 8.0)實現(xiàn)了抗體蛋白的分離純化,并且大大提高吸附容量。分離過程綠色環(huán)保,高效安全,克服了當前抗體純化過...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 前言
    1.2 抗體簡介
        1.2.1 抗體的結構、分類和功能
        1.2.2 抗體的生產(chǎn)制備
    1.3 抗體的分離純化
        1.3.1 蛋白A親和色譜
        1.3.2 混合模式色譜
        1.3.3 疏水電荷誘導色譜
        1.3.4 短肽仿生親和色譜
        1.3.5 其它色譜方法
    1.4 樹枝狀大分子
    1.5 刺激響應性聚合物
    1.6 溫敏色譜
        1.6.1 溫敏親和色譜
        1.6.2 溫敏色譜的應用
    1.7 本論文的研究意義和研究內容
    參考文獻
第二章 高容量溫敏親和色譜固定相的制備和表征
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 試劑
        2.2.2 儀器
        2.2.3 高容量溫敏親和色譜固定相的制備
        2.2.4 材料表征
        2.2.5 色譜柱的裝填
        2.2.6 抗體蛋白保留行為的測試
        2.2.7 抗體蛋白保留特征的測試
        2.2.8 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析
    2.3 結果與討論
        2.3.1 材料的表征
        2.3.2 高容量溫敏親和色譜對IgG的分離純化
        2.3.3 溫度對抗體蛋白保留的影響
        2.3.4 鹽濃度對抗體蛋白保留的影響
        2.3.5 洗脫pH對抗體蛋白保留的影響
    2.4 本章小結
    參考文獻
第三章 高容量溫敏親和色譜吸附性能研究及實際樣品應用
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 試劑
        3.2.2 儀器
        3.2.3 蛋白吸附動力學測定
        3.2.4 蛋白吸附等溫線測定
        3.2.5 蛋白吸附特征的測試
        3.2.6 溫敏親和色譜介質的重復使用性
        3.2.7 人血清和雞蛋黃的預處理
        3.2.8 色譜柱的裝填
        3.2.9 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析
    3.3 結果與討論
        3.3.1 吸附動力學
        3.3.2 溫度對吸附性能的影響
        3.3.3 鹽濃度對吸附性能的影響
        3.3.4 pH值對吸附性能的影響
        3.3.5 溫敏親和色譜固定相的吸附選擇性
        3.3.6 溫敏親和色譜固定相的重復使用性
        3.3.7 對實際樣品的分離特征
    3.4 本章小結
    參考文獻
結論與展望
攻讀碩士學位期間取得的科研成果
致謝



本文編號：3857171