寶丹酮作為一種重要的蛋白同化雄性激素類固醇,具有提升肌肉質(zhì)量和耐力的功能。寶丹酮的傳統(tǒng)合成方法是以1,4-雄烯二酮(ADD)為底物通過化學(xué)法合成,但過程復(fù)雜、污染嚴(yán)重。17β-羥基類固醇脫氫酶(17β-HSD)可催化甾體化合物C-17位點的氧化還原反應(yīng),實現(xiàn)ADD和寶丹酮的相互轉(zhuǎn)化。本研究通過基因序列同源性分析,篩選到6種不同來源的17β-HSD基因并對其在大腸桿菌中進(jìn)行異源表達(dá)。利用不同重組菌轉(zhuǎn)化ADD合成寶丹酮,結(jié)果表明重組菌BL21/pET28a-HSDPy的ADD轉(zhuǎn)化率最高,因此選擇BL21/pET28a-HSDPy進(jìn)行進(jìn)一步研究。鑒定了重組菌的酶學(xué)性質(zhì)并優(yōu)化其全細(xì)胞轉(zhuǎn)化條件。結(jié)果表明在生物量為36 g·L^-1、底物濃度為5.40 g·L^-1條件下,經(jīng)過兩次補(bǔ)料,獲得了3.66g·L^-1寶丹酮,比優(yōu)化前提高了4.1倍。而且在生物轉(zhuǎn)化過程中未檢測到副產(chǎn)物。為生物合成寶丹酮提供了可能。

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【文章目錄】：
引言
1 實驗材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 基因、引物、質(zhì)粒和菌株
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.2 17β-HSD在大腸桿菌中的表達(dá)和純化
        1.2.3 17β-HSD酶活性測定和酶學(xué)性質(zhì)分析
        1.2.4 重組菌株BL21/pET28a-HSD對ADD的全細(xì)胞轉(zhuǎn)化
        1.2.5 分析方法
2 實驗結(jié)果與討論
    2.1 17β-羥基類固醇脫氫酶基因的篩選
    2.2 重組17β-HSD的構(gòu)建表達(dá)和活性分析
    2.3 重組酶HSDPy的酶學(xué)性質(zhì)分析
    2.4 重組大腸桿菌BL21/pET28a-HSDPy轉(zhuǎn)化ADD生產(chǎn)寶丹酮
3 結(jié)論



本文編號：3820585