發(fā)布時(shí)間：2023-05-05 23:14

　　乳腺癌是眾多威脅女性健康的惡性腫瘤之一。隨著人類對(duì)乳腺癌深入研究發(fā)現(xiàn)攜帶有抑癌基因BRCA1突變的患者比常人更易患病。BRCA1蛋白可維持基因組穩(wěn)定性,其突變會(huì)影響RAD51蛋白的修復(fù)功能,使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。為了改善RAD51蛋白的修復(fù)功能,我們對(duì)BRCA1蛋白進(jìn)行突變,研究突變肽與RAD51的相互作用。選擇BRCA1蛋白中的保守片段BRCA1^846-871作為研究的多肽,以RAD51蛋白中的關(guān)鍵肽段為受體,通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)并篩選出與RAD51蛋白相互作用較強(qiáng)的BRCA1^846-871單突變肽6條和五突變肽9條。采用固相合成法將目標(biāo)多肽合成并利用反相高效液相色譜技術(shù)對(duì)這些多肽分離純化得到純度大于93%的目標(biāo)產(chǎn)物。使用電噴霧電離質(zhì)譜技術(shù)對(duì)這些多肽進(jìn)行表征。通過(guò)圓二色光譜法和熒光光譜法研究BRCA1^846-871及其突變肽與RAD51關(guān)鍵肽段的相互作用。圓二色譜圖顯示,任意一條BRCA1片段配體均使RAD51關(guān)鍵肽段的二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化。單突變肽中,F、G、E和N使RAD51^181-200受體的二...

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 多肽的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 多肽的概念及來(lái)源
        1.1.2 多肽的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及性質(zhì)
        1.1.3 多肽的功能及應(yīng)用
    1.2 RAD51和BRCA1
        1.2.1 乳腺癌
        1.2.2 BRCA1的結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.3 RAD51的結(jié)構(gòu)和功能
    1.3 計(jì)算機(jī)輔助活性多肽的設(shè)計(jì)
    1.4 多肽的化學(xué)合成
        1.4.1 固相有機(jī)合成法
        1.4.2 多肽分段合成法
    1.5 多肽的純化及表征
        1.5.1 反相高效液相色譜
        1.5.2 凝膠過(guò)濾色譜法
        1.5.3 離子交換色譜法
        1.5.4 多維高效液相色譜
        1.5.5 多肽的表征
    1.6 多肽BRCA1和RAD51 相互作用的研究方法
        1.6.1 圓二色光譜法
        1.6.2 熒光光譜法
    1.7 論文的研究目的和內(nèi)容
        1.7.1 研究目的
        1.7.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 BRCA^1846-871、BRCA^1846-871突變肽的設(shè)計(jì)、合成及靶肽RAD關(guān)鍵肽段的合成與表征
    2.1 目標(biāo)多肽的設(shè)計(jì)及其理化性質(zhì)
        2.1.1 目標(biāo)多肽的設(shè)計(jì)
        2.1.2 目標(biāo)多肽理化性質(zhì)
    2.2 目標(biāo)多肽的固相合成與表征
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 溶液的配制
        2.2.4 多肽合成步驟
            2.2.4.1 樹(shù)脂的溶脹
            2.2.4.2 脫除Fmoc氨基保護(hù)基團(tuán)
            2.2.4.3 氨基酸的活化、偶聯(lián)及封端
            2.2.4.4 切割樹(shù)脂并離心粗品
            2.2.4.5 分離純化粗品
        2.2.5 多肽的質(zhì)譜表征
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 設(shè)計(jì)結(jié)果與理化性質(zhì)分析
        2.3.2 目標(biāo)多肽的RP-HPLC分析及質(zhì)譜表征結(jié)果
    2.4 本章小結(jié)
第三章 BRCA^1846-871及BRCA^1846-871突變肽與RAD51 關(guān)鍵肽段的相互作用研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)部分
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品
        3.1.2 溶液的配制
        3.1.3 圓二色光譜法研究配體多肽與受體多肽間相互作用
        3.1.4 熒光光譜法研究配體多肽與受體多肽間相互作用
    3.2 結(jié)果與討論
        3.2.1 圓二色光譜分析
            3.2.1.1 BRCA^1846-871 K862 單突變配體與RAD51^181-200 受體間相互作用
            3.2.1.2 BRCA^1846-871 五突變配體與RAD51^158-180 受體間相互作用
            3.2.1.3 BRCA^1846-871 五突變配體與RAD51^181-200 受體間相互作用
        3.2.2 熒光光譜分析
            3.2.2.1 BRCA^1846-871及BRCA^1846-871K862 單突變肽與RAD51^181-200 相互作用的熒光光譜分析
            3.2.2.2 BRCA^1846-871及BRCA^1846-871 五突變肽與RAD51^158-180 相互作用的熒光光譜分析
            3.2.2.3 BRCA^1846-871及BRCA^1846-871 五突變肽與RAD51^181-200 相互作用的熒光光譜分析
    3.3 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3808551