本文基于末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶延伸聚T堿基序列原位生成的銅納米簇,和通過簡單的水熱法合成的金納米粒子來構建光學傳感器檢測DNA甲基化。論文主要由以下幾個部分組成:1.緒論部分主要介紹了表觀遺傳學的概念及其研究內(nèi)容、DNA甲基化的概念及其檢測方法、金屬納米材料及其相關的應用,著重介紹了檢測DNA甲基化的方法和銅納米簇與金納米粒子的性質(zhì)及其應用。最后闡述了本論文的主要研究內(nèi)容及研究意義。2.基于末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶延伸聚T堿基序列原位生成的銅納米簇,構建了一種無標記熒光探針檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性的方法。基于CpG甲基轉(zhuǎn)移酶M.SssI和限制性核酸內(nèi)切酶HpaⅡ的特異性識別以及末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶的延伸效果和銅納米簇優(yōu)異的熒光信號,可實現(xiàn)對M.SssI MTase活性的檢測。利用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶催化的有效聚合延伸反應和具有大斯托克斯位移的銅納米簇代替熒光染料標記,實現(xiàn)了靈敏度的提高及檢測范圍的拓寬,檢測的線性范圍為1-300 U mL-1,檢測限為0.176 U mL-1。此方法對M.SssI具有特異性,并且可應用于篩選甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑。3.基于未修飾的金納米粒子,構建了一種無標記和無酶的一步...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 表觀遺傳學
        1.1.1 表觀遺傳學概述
        1.1.2 表觀遺傳學研究內(nèi)容
    1.2 DNA甲基化
        1.2.1 DNA甲基化的簡介
        1.2.2 甲基轉(zhuǎn)移酶的簡介
        1.2.3 區(qū)分甲基化DNA的基本方法
        1.2.4 檢測DNA甲基化的基本方法
    1.3 金屬納米材料
        1.3.1 金屬納米材料的簡介
        1.3.2 銅納米簇性質(zhì)及其應用
        1.3.3 金納米粒子性質(zhì)及其應用
    1.4 本論文的主要研究內(nèi)容
第2章 基于末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶延伸聚T堿基序列原位生成銅納米簇檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 實驗藥品與試劑
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 發(fā)夾DNA的甲基化和剪切
        2.2.4 甲基轉(zhuǎn)移酶的活性檢測
        2.2.5 M.SssI選擇性研究
        2.2.6 M.SssI MTase抑制評估
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 可行性分析
        2.3.2 實驗條件的優(yōu)化
        2.3.3 M.SssI MTase活性檢測
        2.3.4 選擇性分析
        2.3.5 抑制效果研究
    2.4 結(jié)論
第3章 基于未修飾的金納米粒子的一步法快速比色檢測DNA甲基化
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 實驗藥品與試劑
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 金納米粒子的制備
        3.2.4 亞硫酸氫鹽處理DNA
        3.2.5 DNA雜交
        3.2.6 比色分析DNA甲基化
        3.2.7 實際樣品檢測
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 可行性分析
        3.3.2 實驗條件的優(yōu)化
        3.3.3 檢測甲基化的DNA
        3.3.4 人血清樣品中檢測甲基化DNA
    3.4 緒論
第4章 總結(jié)與展望
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果



本文編號：3791738