鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯（DEHP）是一種普遍存在的內(nèi)分泌干擾性污染物,對人體健康造成損害,其快速檢測勢在必行�；诤怂徇m配體的檢測方法因其速度快、特異性高而備受青睞。首先,以DEHP為研究對象,將單鏈DNA（ssDNA）文庫固定于磁珠表面,構(gòu)建固定文庫的體外指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(shù)（SELEX）篩選方法。結(jié)合實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Q-PCR）監(jiān)測技術(shù),經(jīng)多輪正負篩選獲得識別DEHP的富集文庫。進而,通過高通量測序技術(shù)、金納米粒子（Au NPs）生物傳感器和局域表面等離子體共振技術(shù)（LSPR）的系統(tǒng)組合策略,表征并確定高親和力、高特異性核酸適配體。經(jīng)過8輪篩選,文庫的保留率為14%,高通量測序分析得到20000條序列。經(jīng)Clustal X2和Treeview分析,挑選到129條同源率較高的序列。Au NPs生物傳感器鑒定出4條有較高結(jié)合活性的核酸適配體。經(jīng)LSPR分析,這4條核酸適配體aptamer 31、aptamer 123、aptamer 203、aptamer 281的親和力分別為2.26±0.06 n M、5.33±0.01 n M、2.68±0.2 n M、43... 

【文章來源】：湖北師范大學湖北省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DEHP的化學結(jié)構(gòu)式[1]

—16—呈酒紅色，受到高鹽濃度沖擊的納米金表面因電荷被中和而聚集成為藍色[80]。其優(yōu)良的穩(wěn)定性、精確性、靈敏性及可重復性等特點使得膠體金被廣泛應用于生物免疫識別、基因診斷和DNA生物傳感器等快速檢測領(lǐng)域中[81-82]。納米金生物傳感器是一種簡單、快速、廉價的表征方法，在科研中運用較為廣泛。該方法已被用于檢測各種不同種類的小分子[83-84]，例如已開發(fā)的赭曲霉毒素A的納米金比色核酸適配體傳感器表現(xiàn)出較高靈敏度及特異性，檢測限可達到0.02μM，可直接運用于實際食品樣品中赭曲霉毒素A的現(xiàn)場快速檢測[85]。根據(jù)報道，納米金比色生物傳感器也可用于從富集的文庫中鑒定出針對目標小分子的活性適配體，我們運用該方法已成功鑒定出了可準確識別有害小分子鹽酸克倫特羅的核酸適配體[86]。1.3.2電化學生物傳感器生物傳感器能夠靈敏識別被測物質(zhì)，并且能通過檢測儀器將檢測濃度轉(zhuǎn)化成電信號進行定量檢測。如圖1-4所示，生物傳感器一般主要由生物識別元件和信號轉(zhuǎn)換器這兩個部分組成。生物識別元件是能夠與待測物質(zhì)特異性識別并結(jié)合的物質(zhì)，識別元件范圍很廣其中包括抗體、抗原、酶、微生物、組織、細胞、核酸等各種物質(zhì)[87]。核酸適配體能夠特異性與靶標結(jié)合，具有強親和力，合成容易且穩(wěn)定、易修飾，基于這些優(yōu)勢而被廣泛用于生物傳感器的構(gòu)建[88]。信號轉(zhuǎn)換元件能夠把生化反應產(chǎn)生的生物學信息轉(zhuǎn)換為可供檢測的聲、光、電、熱、質(zhì)量等信號[89]，其中，電化學阻抗譜（Electrochemicalimpedancespectroscopy,EIS）生物傳感器是最為理想的生物傳感檢圖1-3納米金比色法基本原理

—17—測方法。電化學傳感器是將生物識別元件固定在電極表面，待測物質(zhì)與生物識別敏感元件之間通過分子間的特異性識別作用選擇性結(jié)合，將靶標分子捕獲到電極表面，電極表面發(fā)生了相應的變化，基礎(chǔ)電極作為信號傳導元件能夠?qū)㈦姌O表面發(fā)生的信號變化傳導出來轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y量的電信號，實現(xiàn)了被測物質(zhì)的定性及定量檢測。對于四環(huán)素的核酸適配體電化學傳感器已經(jīng)成功建立并且已經(jīng)運用到實際樣品檢測中，檢測限達0.00966ng/mL[90]。卡那霉素的核酸適配體電化學傳感器也相繼被構(gòu)建，特點是無須標記且可實現(xiàn)超靈敏檢測，充分展現(xiàn)了電化學生物傳感器的優(yōu)點[91]。1.3.3局域表面等離子共振技術(shù)近年來，局域表面等離子體共振技術(shù)因操作簡單成本低廉等優(yōu)勢，在各個科學研究領(lǐng)域迅速擴展開來，在開辟的新領(lǐng)域中特別是傳感領(lǐng)域的應用研究已經(jīng)發(fā)展到了重要階段[92]。局域表面等離子體技術(shù)是將納米材料作為LSPR傳感層固定在金屬薄膜表面，當自由電子與入射光頻率相等發(fā)生共振時，表面等離子體波被局限在納米結(jié)構(gòu)附近，則為局域表面等離子體共振[93]。由于局域表面等離子體是存在于金屬納米結(jié)構(gòu)中的電荷密度震蕩，因而受到金屬納米結(jié)構(gòu)的材料、性狀、尺寸、粒子之間距離、以及微環(huán)境的介電常數(shù)等的影響[94-95]。局域表面等離子體震蕩使金屬納米結(jié)構(gòu)表面電磁場增，強產(chǎn)生局域表面增強效應，出現(xiàn)強烈表面等離子體共振吸收，在紫外-可見光波段圖1-4生物傳感器基本原理

【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于表面等離子體共振原理的傳感技術(shù)在物證檢驗中的應用[J]. 王霄,崔勐,陳彭波,劉艷,曹艷萍,郝紅霞.  刑事技術(shù). 2019(06)
[2]基于核酸適配體檢測動物性食品中氯霉素殘留的研究進展[J]. 王鑫,劉河冰,陶曉奇.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2019(18)
[3]豬偽狂犬病毒實時熒光定量PCR檢測方法的建立及初步應用[J]. 溫書香,安利民,趙協(xié),張軍,潘燕燕,葛位西.  江蘇農(nóng)業(yè)科學. 2019(07)
[4]局域表面等離子體共振效應在光催化技術(shù)中的應用[J]. 姚國英,劉清路,趙宗彥.  化學進展. 2019(04)
[5]水及可樂中鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯的遷移規(guī)律[J]. 段麗麗,句榮輝,王輝,孫玉清,汪長鋼.  中國食物與營養(yǎng). 2018(08)
[6]電噴霧萃取電離質(zhì)譜法直接檢測環(huán)境水樣中的鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯[J]. 梁大鵬,方媛萍,劉文杰,張華,裘彥挺,董祎銘,寧楊.  分析化學. 2018(06)
[7]磁珠法和煮沸法核酸提取在HPV-DNA分型中的比較[J]. 許瓊,李文靜,田芯瑗,徐紅星,吳冬生,許華英.  檢驗醫(yī)學與臨床. 2018(06)
[8]基于核酸適配體-金納米粒子比色傳感器快速檢測食品中赭曲霉毒素A[J]. 曾憲冬,曾灼祥,陳興會.  食品安全導刊. 2018(07)
[9]核酸適配體篩選方法研究進展[J]. 韓小東,符兆英,郭姝彤,張正祥.  陜西醫(yī)學雜志. 2018(03)
[10]谷物中赭曲霉毒素A核酸適配體熒光傳感器的研究[J]. 唐琳玥.  福建分析測試. 2018(01)

博士論文
[1]基于核酸適配體傳感器的蜂蜜中四環(huán)素殘留快速檢測方法研究[D]. 王賽.北京化工大學 2017
[2]恒溫型AuNPs-RCA-SPR傳感器檢測結(jié)核桿菌DNA及SELEX篩選流感嗜血桿菌適配體研究[D]. 朱曉艷.第三軍醫(yī)大學 2016
[3]基于功能化石墨烯新型DNA生物傳感器的構(gòu)建及在腫瘤檢測中的研究[D]. 陳梅.重慶大學 2016
[4]鐮刀菌毒素核酸適配體的篩選及分析應用研究[D]. 陳秀娟.江南大學 2015

碩士論文
[1]磁珠固定二氫葉酸還原酶指數(shù)富集篩選混合物中低豐度高親和力配體[D]. 周偉.重慶醫(yī)科大學 2019
[2]基于功能型寡聚核苷酸傳感界面的電化學生物傳感器[D]. 張韜順.閩南師范大學 2018
[3]PVC食品保鮮膜中DEHP和DEHA向豬肉中遷移規(guī)律及控制技術(shù)的初步研究[D]. 趙鵬.山東農(nóng)業(yè)大學 2018
[4]基于寡聚核苷酸構(gòu)建高靈敏電化學生物傳感器[D]. 陳穎旭.信陽師范學院 2018
[5]胰蛋白酶核酸適配體篩選及胰蛋白酶固定化新方法研究[D]. 趙海杰.青島科技大學 2017
[6]基于EXOⅢ酶的熒光信號放大探針的高靈敏基因檢測及凝膠電泳技術(shù)篩選細胞核酸適配體[D]. 陳哲.蘇州大學 2016
[7]非標記型電化學核酸適配體生物傳感器的研究[D]. 查文玲.華東交通大學 2013
[8]基于貴金屬納米粒子LSPR生物傳感器的研究[D]. 楊嬌鳳.天津大學 2012
[9]適配體Au、CdTe納米粒子功能化修飾及凝血酶電化學傳感研究[D]. 文艷清.湖南師范大學 2010



本文編號：3555706