鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯（DEHP）是一種普遍存在的內(nèi)分泌干擾性污染物,對(duì)人體健康造成損害,其快速檢測(cè)勢(shì)在必行�；诤怂徇m配體的檢測(cè)方法因其速度快、特異性高而備受青睞。首先,以DEHP為研究對(duì)象,將單鏈DNA（ssDNA）文庫(kù)固定于磁珠表面,構(gòu)建固定文庫(kù)的體外指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)（SELEX）篩選方法。結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Q-PCR）監(jiān)測(cè)技術(shù),經(jīng)多輪正負(fù)篩選獲得識(shí)別DEHP的富集文庫(kù)。進(jìn)而,通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)、金納米粒子（Au NPs）生物傳感器和局域表面等離子體共振技術(shù)（LSPR）的系統(tǒng)組合策略,表征并確定高親和力、高特異性核酸適配體。經(jīng)過(guò)8輪篩選,文庫(kù)的保留率為14%,高通量測(cè)序分析得到20000條序列。經(jīng)Clustal X2和Treeview分析,挑選到129條同源率較高的序列。Au NPs生物傳感器鑒定出4條有較高結(jié)合活性的核酸適配體。經(jīng)LSPR分析,這4條核酸適配體aptamer 31、aptamer 123、aptamer 203、aptamer 281的親和力分別為2.26±0.06 n M、5.33±0.01 n M、2.68±0.2 n M、43... 

【文章來(lái)源】：湖北師范大學(xué)湖北省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DEHP的化學(xué)結(jié)構(gòu)式[1]

—16—呈酒紅色，受到高鹽濃度沖擊的納米金表面因電荷被中和而聚集成為藍(lán)色[80]。其優(yōu)良的穩(wěn)定性、精確性、靈敏性及可重復(fù)性等特點(diǎn)使得膠體金被廣泛應(yīng)用于生物免疫識(shí)別、基因診斷和DNA生物傳感器等快速檢測(cè)領(lǐng)域中[81-82]。納米金生物傳感器是一種簡(jiǎn)單、快速、廉價(jià)的表征方法，在科研中運(yùn)用較為廣泛。該方法已被用于檢測(cè)各種不同種類(lèi)的小分子[83-84]，例如已開(kāi)發(fā)的赭曲霉毒素A的納米金比色核酸適配體傳感器表現(xiàn)出較高靈敏度及特異性，檢測(cè)限可達(dá)到0.02μM，可直接運(yùn)用于實(shí)際食品樣品中赭曲霉毒素A的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)[85]。根據(jù)報(bào)道，納米金比色生物傳感器也可用于從富集的文庫(kù)中鑒定出針對(duì)目標(biāo)小分子的活性適配體，我們運(yùn)用該方法已成功鑒定出了可準(zhǔn)確識(shí)別有害小分子鹽酸克倫特羅的核酸適配體[86]。1.3.2電化學(xué)生物傳感器生物傳感器能夠靈敏識(shí)別被測(cè)物質(zhì)，并且能通過(guò)檢測(cè)儀器將檢測(cè)濃度轉(zhuǎn)化成電信號(hào)進(jìn)行定量檢測(cè)。如圖1-4所示，生物傳感器一般主要由生物識(shí)別元件和信號(hào)轉(zhuǎn)換器這兩個(gè)部分組成。生物識(shí)別元件是能夠與待測(cè)物質(zhì)特異性識(shí)別并結(jié)合的物質(zhì)，識(shí)別元件范圍很廣其中包括抗體、抗原、酶、微生物、組織、細(xì)胞、核酸等各種物質(zhì)[87]。核酸適配體能夠特異性與靶標(biāo)結(jié)合，具有強(qiáng)親和力，合成容易且穩(wěn)定、易修飾，基于這些優(yōu)勢(shì)而被廣泛用于生物傳感器的構(gòu)建[88]。信號(hào)轉(zhuǎn)換元件能夠把生化反應(yīng)產(chǎn)生的生物學(xué)信息轉(zhuǎn)換為可供檢測(cè)的聲、光、電、熱、質(zhì)量等信號(hào)[89]，其中，電化學(xué)阻抗譜（Electrochemicalimpedancespectroscopy,EIS）生物傳感器是最為理想的生物傳感檢圖1-3納米金比色法基本原理

—17—測(cè)方法。電化學(xué)傳感器是將生物識(shí)別元件固定在電極表面，待測(cè)物質(zhì)與生物識(shí)別敏感元件之間通過(guò)分子間的特異性識(shí)別作用選擇性結(jié)合，將靶標(biāo)分子捕獲到電極表面，電極表面發(fā)生了相應(yīng)的變化，基礎(chǔ)電極作為信號(hào)傳導(dǎo)元件能夠?qū)㈦姌O表面發(fā)生的信號(hào)變化傳導(dǎo)出來(lái)轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y(cè)量的電信號(hào)，實(shí)現(xiàn)了被測(cè)物質(zhì)的定性及定量檢測(cè)。對(duì)于四環(huán)素的核酸適配體電化學(xué)傳感器已經(jīng)成功建立并且已經(jīng)運(yùn)用到實(shí)際樣品檢測(cè)中，檢測(cè)限達(dá)0.00966ng/mL[90]�？敲顾氐暮怂徇m配體電化學(xué)傳感器也相繼被構(gòu)建，特點(diǎn)是無(wú)須標(biāo)記且可實(shí)現(xiàn)超靈敏檢測(cè)，充分展現(xiàn)了電化學(xué)生物傳感器的優(yōu)點(diǎn)[91]。1.3.3局域表面等離子共振技術(shù)近年來(lái)，局域表面等離子體共振技術(shù)因操作簡(jiǎn)單成本低廉等優(yōu)勢(shì)，在各個(gè)科學(xué)研究領(lǐng)域迅速擴(kuò)展開(kāi)來(lái)，在開(kāi)辟的新領(lǐng)域中特別是傳感領(lǐng)域的應(yīng)用研究已經(jīng)發(fā)展到了重要階段[92]。局域表面等離子體技術(shù)是將納米材料作為L(zhǎng)SPR傳感層固定在金屬薄膜表面，當(dāng)自由電子與入射光頻率相等發(fā)生共振時(shí)，表面等離子體波被局限在納米結(jié)構(gòu)附近，則為局域表面等離子體共振[93]。由于局域表面等離子體是存在于金屬納米結(jié)構(gòu)中的電荷密度震蕩，因而受到金屬納米結(jié)構(gòu)的材料、性狀、尺寸、粒子之間距離、以及微環(huán)境的介電常數(shù)等的影響[94-95]。局域表面等離子體震蕩使金屬納米結(jié)構(gòu)表面電磁場(chǎng)增，強(qiáng)產(chǎn)生局域表面增強(qiáng)效應(yīng)，出現(xiàn)強(qiáng)烈表面等離子體共振吸收，在紫外-可見(jiàn)光波段圖1-4生物傳感器基本原理

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3555706