建立了新型反相/強陰離子交換混合模式材料（C18/SAX）的磷酸化肽富集方法�？疾炝肆鲃酉嘟M成（乙腈濃度、甲酸濃度、緩沖鹽濃度）對酪蛋白（α-Casein）酶解液中磷酸化肽分離選擇性的影響。實驗結(jié)果表明,磷酸化肽在C18/SAX上的保留行為受疏水和離子交換作用力的共同調(diào)控,單磷酸化肽先于多磷酸化肽從材料上洗脫出來。隨著甲酸濃度增加,磷酸化肽的保留減弱;隨著鹽濃度增加,磷酸化肽保留變小。采用優(yōu)化后的流動相,建立以20%ACN/20 mmol/L NH4Ac作為上樣溶液,20%ACN/0.1%FA和50%ACN/100 mmol/L NH4Ac/2%FA分別作為洗脫液分段洗脫單、多磷酸化肽的方法。以α-Casein和人血清白蛋白（HSA）酶解液的混合溶液（1∶20,n/n）作為模擬樣品,實現(xiàn)了單、多磷酸化肽的同時富集和分段洗脫,分別檢測到4條單磷酸化肽和14條多磷酸化肽的信號。將本方法用于牛奶中的磷酸化肽檢測,共鑒定到4條單磷酸化肽和8條多磷酸化肽信號。結(jié)果表明,本富集方法選擇性高,有良好的應(yīng)用前景。 

【文章來源】：分析化學. 2017,45(01)北大核心EISCICSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

流動相中乙腈濃度對肽段在C18/SAX材料上保留的影響結(jié)果

0.2983（2+）*797.8428(2+)*830.4337(2+)880.4390*924.3406（2+）A1312.4336（2+）*×4983.3186(2+)*964.8286(2+)*×4*692.8423*748.3442*964.3121（2+）***976.4339（2+）1029.4451（3+）1159.0270m/zm/zm/z1267.66671383.6730圖2流動相中酸度對磷酸化肽在C18-SAX材料上富集的影響。50%ACN/0．1%FA(A)，50%ACN/0.5%FA(B)，50%ACN/1%FA(C)和50%ACN/2%FA(D)，*標記為磷酸化肽，其它為非磷酸化肽Fig．2InfluenceofformicacidcontentinmobilephaseonselectiveenrichmentofphosphopeptideonC18/SAXmatrix．50%ACN/0．1%FA(A)，50%ACN/0．5%FA(B)，50%ACN/1%FA(C)and50%ACN/2%FA(D)．Peaksmarkedwith*arephosphopeptides，andothersarenon-phosphopeptidesm/z964．31(2+)，m/z983．28(2+)，m/z1002．26(2+)，m/z1339．95(2+)，m/z1373．91(2+)。這是因為在離子交換作用下，多磷酸化肽比單磷酸化肽在C18/SAX上的保留更強，提高流動相鹽濃度能夠減弱PO3!4與C18/SAX材料的離子交換作用。上述結(jié)果表明，鹽濃度的逐漸增高能夠?qū)崿F(xiàn)單、多磷酸化肽分段洗脫，溶液中鹽濃度提高到100mmol/LNH4Ac時，大多數(shù)多磷酸化肽能夠被洗脫。3．4C18/SAX材料的富集選擇性將α-Casein酶解液-HSA酶解液(1∶20，n/n)配制的混合樣品溶液作為模擬樣品，以20%ACN/0．1%FA和50%ACN/2%FA/100mmol/LNH4Ac分別作為兩步洗脫條件，分段洗脫單磷酸化肽和多磷酸?

718(2+)1339.9998(2+)B×4m/z100806040200Intensity（%）65070075080085090095010001050110011501200125013001350140014501500696.6146797.8559(2+)*****814.3614830.8867(2+)880.4716899.4460924.6929(2+)976.9856(2+)1044.4189A749.7885m/z100806040200圖4α-Casein和HSA(1∶20，mol/mol)混合酶解液經(jīng)C18-SAX富集后再洗脫的質(zhì)譜圖。A，20%ACN/0．1%FA洗脫;B，50%ACN/2%FA/100mMNH4Ac洗脫。*標記為磷酸化肽，其它為非磷酸化肽Fig．4Enrichmentofmixtureofα-CaseinandHSAdigests(1∶20，mol/mol)．A，Eluentby20%ACN/0．1%FAaqueoussolution;B，Eluentby50%ACN/2%FA/100mmol/LNH4Acaqueoussolution．Peaksmarkedwith*arephosphopeptides，andothersarenon-phosphopeptides．00分析化學第45卷

【參考文獻】：
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本文編號：3532520