發(fā)布時間：2017-05-09 16:00

  本文關(guān)鍵詞：基于腦微透析技術(shù)的丹紅注射液抗腦缺血藥效學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：建立同時測定丹紅注射液中丹參素、原兒茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A含量的HPLC-DAD(高效液相色譜-二極管陣列檢測器)方法,運(yùn)用UV-VIS(紫外-可見分光光度法)檢測丹紅注射液中有效部位(總黃酮)的含量。建立同時測定丹紅提取液中三種有效成分(丹參素、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸)含量的高效液相色譜法。以丹紅為模型藥物,對微透析技術(shù)應(yīng)用于中藥復(fù)方藥動學(xué)研究進(jìn)行探索。建立同時測定大鼠腦脊液中三種氨基酸的方法(Asp、Glu和GABA)含量的高效液相色譜方法。通過測定腦缺血大鼠腦內(nèi)氨基酸水平動態(tài)變化對丹紅注射液藥效學(xué)研究。 方法：(1)6種有效成分的定量采用Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6×150mm,5μm)；乙腈-0.1%磷酸水流動相；流速1.0mL·min-1；波長330nm、280nm；柱溫30℃。有效部位以蘆丁為對照品,UV-VIS法進(jìn)行測定。(2)利用微透析法獲得透析液,HPLC-DAD梯度洗脫測定透析液中待測成分含量,計算丹紅體外回收率,考察丹參素、HSYA、迷迭香酸在丹參提取液、紅花提取液和丹紅提取液透析媒介中回收率變化情況,并考察濃度、流速對回收率的影響。(3)測定大鼠腦脊液中氨基酸含量的方法建立。大腦中動脈栓塞(MCAO)60min建立大鼠局部腦缺血模型。丹紅組在缺血前10min尾靜脈注射丹紅注射液2mL,用腦微透析儀收集缺血前后和再灌注過程海馬區(qū)的細(xì)胞外液,測定氨基酸含量變化。 結(jié)果：(1)樣品中6種成分良好分離,線性關(guān)系良好(R0.999,n=6),；平均加樣回收率分別為98.98%,100.86%,100.44%,98.73%,101.35%,100.17%。10批丹紅注射液每1mL含6種有效成分的總量11.50mg；總黃酮9.00mg。(2)3種待測成分在30min內(nèi)達(dá)到良好分離,線性關(guān)系良好(R0.999,n=6)。當(dāng)灌流速度為1.0μL·min-1時,混合標(biāo)準(zhǔn)液中丹參素鈉、HSYA、迷迭香酸的回收率依次為11.05%,5.81%,6.73%,隨著透析媒介中物質(zhì)數(shù)量的增多,特定成分的回收率有下降趨勢,在相同濃度下回收率隨流速增大而減少,但與透析媒介中該成分的濃度無關(guān)。(3)腦局部缺血后,氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)均會有一定程度的升高,在造模后30min左右達(dá)到峰值,然后逐漸下降。與模型組比較,尾靜脈給藥后,Asp、Glu升高幅度有降低,GABA升高的幅度有所增加。 結(jié)論：(1)該方法操作簡單,結(jié)果準(zhǔn)確,具有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性,可為丹紅注射液的質(zhì)量控制提供參考。微透析技術(shù)可以用于丹參紅花復(fù)方藥動學(xué)研究。(2)文中建立的HPLC-DAD可作為微透析研究中丹紅回收率的測定方法。微透析實(shí)驗(yàn)應(yīng)考慮影響回收率因素,選擇合適的實(shí)驗(yàn)條件,以方便微透析檢測。(3)丹紅注射液對腦缺血具有一定的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：丹紅注射液 高效液相色譜-二極管陣列檢測器 總黃酮 中藥復(fù)方 腦微透析 腦缺血 氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R285.5;O657.72
【目錄】：

• 目錄3-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-12
• 第一部分 丹紅注射液有效成分和有效部位的質(zhì)量控制研究12-24
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法12-18
• (一) 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑12-13
• (二) 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備13
• (三) 實(shí)驗(yàn)方法13-18
• 二、結(jié)果18-21
• (一) HPLC-DAD測定丹紅注射液中有效成分含量18-21
• (二) UV-VIS測定丹紅注射液中總黃酮有效部位含量21
• 三、分析與討論21-23
• (一) 檢測波長的選擇21-22
• (二) 流動相的選擇22
• (三) 樣品的穩(wěn)定性22
• (四) 含量測定結(jié)果的分析22-23
• (五) 有效部位與有效成分的質(zhì)量控制23
• 四、小結(jié)23-24
• 第二部分 丹參紅花微透析回收率的體外測定及影響因素24-37
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法24-31
• (一) 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑24
• (二) 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備24-25
• (三) 實(shí)驗(yàn)方法25-31
• 二、結(jié)果31-35
• (一) 丹參紅花微透析回收率的體外測定方法建立31-32
• (二) 體外微透析實(shí)驗(yàn)32-35
• 三、分析與討論35-36
• (一) 檢測波長的選擇35
• (二) 微透析用于復(fù)方藥35
• (三) 微透析回收率影響因素35-36
• 四、小結(jié)36-37
• 第三部分 丹紅注射液對腦部微透析藥效學(xué)37-52
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法37-45
• (一) 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑37
• (二) 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備37-38
• (三) 實(shí)驗(yàn)動物38
• (四) 實(shí)驗(yàn)方法38-45
• 二、結(jié)果45-49
• (一) 測定大鼠腦脊液中氨基酸含量的方法建立45-46
• (二) 丹紅注射液對腦缺血誘導(dǎo)的大鼠腦內(nèi)氨基酸水平動態(tài)變化的影響46-49
• 三、分析與討論49-51
• 四、小結(jié)51-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 致謝56-57
• 文獻(xiàn)綜述57-66
• 參考文獻(xiàn)65-66

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：基于腦微透析技術(shù)的丹紅注射液抗腦缺血藥效學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：352779