目的采用對(duì)氨基苯甲酸乙酯（p-ABBE）為衍生劑,建立L-（-）-巖藻糖含量測(cè)定的柱前衍生-高效液相色譜法。方法對(duì)L-（-）-巖藻糖樣品與p-ABBE的衍生比例、衍生溫度、衍生時(shí)間等衍生條件進(jìn)行優(yōu)化,同時(shí)進(jìn)行色譜柱、流動(dòng)相等高效液相色譜條件的優(yōu)化。結(jié)果衍生化條件為:衍生化試劑（p-ABEE）和L-（-）-巖藻糖的摩爾比為7∶1,衍生溫度為85℃,反應(yīng)時(shí)間為1. 5 h;色譜條件為:色譜柱Agilent 5 TC-C₁₈（2）（250 mm×4. 6 mm,5μm）,流動(dòng)相為0. 02%TFA-乙腈（77∶23,V/V）,流速為1. 0 ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為307 nm。本方法在0. 50 mmol/L～6. 02 mmol/L濃度與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r=0. 999 5）,定量限（S/N=10）及檢出限（S/N=3）分別為0. 20 ng/ml和0. 10 ng/ml;平均加標(biāo)回收率為82. 94%,RSD為1. 74%。結(jié)論本方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、實(shí)用性強(qiáng),能夠用于L-（-）-巖藻糖的含量測(cè)定。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2020,30(07)

【文章頁(yè)數(shù)】：3 頁(yè)

【部分圖文】：

p-ABBE柱前衍生法測(cè)定L-(-)-巖藻糖的反應(yīng)原理

L-(-)-巖藻糖是6-脫氧半乳糖，結(jié)構(gòu)與2-去氧葡萄糖結(jié)構(gòu)類(lèi)似，因此首先參考柱前衍生-ABBE法測(cè)定2-去氧葡萄糖的色譜條件:Thermo ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)，流動(dòng)相:0.02%TFA/乙腈=80∶20，流速:1.00 ml/min，柱溫:35℃;紫外檢測(cè)波長(zhǎng):307 nm[15]。試驗(yàn)結(jié)果表明采用此色譜條件，L-(-)-巖藻糖主峰跟雜峰分離度不是很好，因此改變流動(dòng)相比例(乙腈的比例75%～85%)，進(jìn)一步考察樣品主峰與雜質(zhì)峰的分離效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，其他色譜條件不變，流動(dòng)相比例在77∶23(水相/有機(jī)相，V/V)時(shí)，主峰與雜峰分離效果較好。同時(shí)本文考察了不同型號(hào)色譜柱[Thermo ODS2(250 mm×4.6 mm,5μm)、Agilent SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)、Agilent TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)]對(duì)衍生后L-(-)-巖藻糖主峰與雜質(zhì)峰的分離效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，在相同的色譜條件下，Agilent TC-C18(2)對(duì)主峰及雜質(zhì)峰的分離效果最佳(圖2、圖3)。圖3 Agilent TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱上的L-(-)-巖藻糖和空白樣品色譜圖

Agilent TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱上的L-(-)-巖藻糖和空白樣品色譜圖

【參考文獻(xiàn)】：
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