酶是生命活動中一類重要的物質(zhì),人體中有5000多種酶參與者各類生物化學反應。酶活性的異常往往與疾病的發(fā)生息息相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),弗林蛋白酶活性的異常與神經(jīng)退行性及疾病,如阿爾茨海默病、帕金森癥等聯(lián)系相關(guān);細胞表面具有蛋白激酶活性的人表皮生長因子erb2（HER2）的異常指示著許多癌癥的發(fā)生,特別是乳腺癌的發(fā)生。因此,檢測細胞內(nèi)相關(guān)酶的含量及活性對于了解相關(guān)病理生理過程就有著非常重要的意義。本論文主要采用了電化學傳感和表面增強拉曼光譜兩種分析方法,設計并開發(fā)了高選擇性、高靈敏度、抗干擾的酶傳感器用于細胞內(nèi)酶含量（活性）的分析檢測。具體內(nèi)容如下:（一）設計并開發(fā)了一種高靈敏、高選擇性、抗干擾的比率型電化學傳感器,用于細胞內(nèi)弗林蛋白酶活性的檢測。1)依據(jù)Furin可選擇性切割含Arg-X-Lys/Arg-Arg↓-X序列的多肽的原理,設計了一種包含此序列的多信號源多肽（P3）;2)制備了具有高導電性的,富含多枝結(jié)構(gòu)的金鈴鐺花納米材料,顯著提高了電極的比表面積,進一步實現(xiàn)識別信號的放大;3)引入內(nèi)參比分子甲基藍（MB）共組裝于電極界面,構(gòu)筑比率型電化學傳感。結(jié)果表明,該傳感器對于弗林蛋白酶有良好的... 

【文章來源】：華東師范大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

PC家族蛋白同源性的圖示

華東師范大學碩士學位論文7圖1.5 基于螢火蟲熒光素酶底和弗林蛋白酶識別切割序列的熒光探針2011年，Ye等人[51]通過控制細胞內(nèi)大環(huán)化反應對細胞內(nèi)弗林蛋白酶的活性進行了熒光成像分析，成功實現(xiàn)了MDA-MB-468細胞中弗林蛋白酶活性的分析（圖1.6）用于，而且還發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)大環(huán)化反應發(fā)生在細胞中高爾基體的附近。圖1.6 基于細胞內(nèi)大環(huán)化反應對細胞內(nèi)弗林蛋白酶活性的熒光分析探針2014年，Jing Mu等人[52]發(fā)展了一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）的探針用于細胞中弗林蛋白酶活性的檢測。如圖1.7所示，這種位于細胞表面對于弗林蛋白酶響應的探針（MFP）在酶的作用下，會在特定位置發(fā)生切割導致分子斷裂。斷裂前由于FITC的熒

Q基團會離開FITC，因此FITC的熒光會恢復，從而可以實現(xiàn)細胞弗林蛋白酶活性的檢測。圖1.7 一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的熒光探索針用于細胞中弗林蛋白酶活性的檢測2015年，Yuan等人[53]發(fā)展了一種細胞內(nèi)通過自淬滅的納米粒子的拆卸使近紅外熒光增強來檢測細胞和腫瘤組織中弗林蛋白酶的活性(圖1.8)。1-NPs在弗林蛋白酶作用下會發(fā)生拆卸從而導致熒光增強，利用這種酶解策略，成功對細胞內(nèi)弗林蛋白酶活性進行了近紅外檢測和成像；同時使用1-NPs成功對裸鼠中MDA-MB-468腫瘤進行了近紅外成像。圖1.8 基于自淬滅納米粒子拆卸增強近紅外熒光檢測細胞和腫瘤組織中弗林蛋白酶活性

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]原代培養(yǎng)大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞分泌兒茶酚胺的高效液相色譜-電化學檢測[J]. 宋玲,楊軍民.  中國藥學雜志. 1999(03)
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碩士論文
[1]汞離子的比率型電化學傳感和熒光增強分析[D]. 馬榮勵.華東師范大學 2017
[2]基于固體納米通道陣列的新型電化學方法的研究[D]. 曹菲菲.華東師范大學 2017
[3]19F核磁共振探針用于體外和活細胞內(nèi)弗林蛋白酶的活性檢測[D]. 王丁俐.中國科學技術(shù)大學 2014
[4]茶多酚類物質(zhì)對弗林蛋白酶（furin）活性的抑制研究[D]. 朱晶晶.西北大學 2009
[5]毛細管電泳與化學發(fā)光/生物發(fā)光聯(lián)用技術(shù)用于單細胞分析[D]. 治卿.上海交通大學 2007



本文編號：3346425