酶是生命活動(dòng)中一類重要的物質(zhì),人體中有5000多種酶參與者各類生物化學(xué)反應(yīng)。酶活性的異常往往與疾病的發(fā)生息息相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),弗林蛋白酶活性的異常與神經(jīng)退行性及疾病,如阿爾茨海默病、帕金森癥等聯(lián)系相關(guān);細(xì)胞表面具有蛋白激酶活性的人表皮生長因子erb2（HER2）的異常指示著許多癌癥的發(fā)生,特別是乳腺癌的發(fā)生。因此,檢測細(xì)胞內(nèi)相關(guān)酶的含量及活性對于了解相關(guān)病理生理過程就有著非常重要的意義。本論文主要采用了電化學(xué)傳感和表面增強(qiáng)拉曼光譜兩種分析方法,設(shè)計(jì)并開發(fā)了高選擇性、高靈敏度、抗干擾的酶傳感器用于細(xì)胞內(nèi)酶含量（活性）的分析檢測。具體內(nèi)容如下:（一）設(shè)計(jì)并開發(fā)了一種高靈敏、高選擇性、抗干擾的比率型電化學(xué)傳感器,用于細(xì)胞內(nèi)弗林蛋白酶活性的檢測。1)依據(jù)Furin可選擇性切割含Arg-X-Lys/Arg-Arg↓-X序列的多肽的原理,設(shè)計(jì)了一種包含此序列的多信號源多肽（P3）;2)制備了具有高導(dǎo)電性的,富含多枝結(jié)構(gòu)的金鈴鐺花納米材料,顯著提高了電極的比表面積,進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)識別信號的放大;3)引入內(nèi)參比分子甲基藍(lán)（MB）共組裝于電極界面,構(gòu)筑比率型電化學(xué)傳感。結(jié)果表明,該傳感器對于弗林蛋白酶有良好的... 

【文章來源】：華東師范大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PC家族蛋白同源性的圖示

華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文7圖1.5 基于螢火蟲熒光素酶底和弗林蛋白酶識別切割序列的熒光探針2011年，Ye等人[51]通過控制細(xì)胞內(nèi)大環(huán)化反應(yīng)對細(xì)胞內(nèi)弗林蛋白酶的活性進(jìn)行了熒光成像分析，成功實(shí)現(xiàn)了MDA-MB-468細(xì)胞中弗林蛋白酶活性的分析（圖1.6）用于，而且還發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)大環(huán)化反應(yīng)發(fā)生在細(xì)胞中高爾基體的附近。圖1.6 基于細(xì)胞內(nèi)大環(huán)化反應(yīng)對細(xì)胞內(nèi)弗林蛋白酶活性的熒光分析探針2014年，Jing Mu等人[52]發(fā)展了一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）的探針用于細(xì)胞中弗林蛋白酶活性的檢測。如圖1.7所示，這種位于細(xì)胞表面對于弗林蛋白酶響應(yīng)的探針（MFP）在酶的作用下，會在特定位置發(fā)生切割導(dǎo)致分子斷裂。斷裂前由于FITC的熒

Q基團(tuán)會離開FITC，因此FITC的熒光會恢復(fù)，從而可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞弗林蛋白酶活性的檢測。圖1.7 一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的熒光探索針用于細(xì)胞中弗林蛋白酶活性的檢測2015年，Yuan等人[53]發(fā)展了一種細(xì)胞內(nèi)通過自淬滅的納米粒子的拆卸使近紅外熒光增強(qiáng)來檢測細(xì)胞和腫瘤組織中弗林蛋白酶的活性(圖1.8)。1-NPs在弗林蛋白酶作用下會發(fā)生拆卸從而導(dǎo)致熒光增強(qiáng)，利用這種酶解策略，成功對細(xì)胞內(nèi)弗林蛋白酶活性進(jìn)行了近紅外檢測和成像；同時(shí)使用1-NPs成功對裸鼠中MDA-MB-468腫瘤進(jìn)行了近紅外成像。圖1.8 基于自淬滅納米粒子拆卸增強(qiáng)近紅外熒光檢測細(xì)胞和腫瘤組織中弗林蛋白酶活性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]19F核磁共振探針用于體外和活細(xì)胞內(nèi)弗林蛋白酶的活性檢測[J]. 王丁俐,梁高林.  中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(02)
[2]原代培養(yǎng)大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞分泌兒茶酚胺的高效液相色譜-電化學(xué)檢測[J]. 宋玲,楊軍民.  中國藥學(xué)雜志. 1999(03)
[3]單細(xì)胞內(nèi)Ca2＋時(shí)空變化的激光共聚焦顯微測定[J]. 楊小毅,顏坤,黃有國.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 1996(05)

碩士論文
[1]汞離子的比率型電化學(xué)傳感和熒光增強(qiáng)分析[D]. 馬榮勵(lì).華東師范大學(xué) 2017
[2]基于固體納米通道陣列的新型電化學(xué)方法的研究[D]. 曹菲菲.華東師范大學(xué) 2017
[3]19F核磁共振探針用于體外和活細(xì)胞內(nèi)弗林蛋白酶的活性檢測[D]. 王丁俐.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2014
[4]茶多酚類物質(zhì)對弗林蛋白酶（furin）活性的抑制研究[D]. 朱晶晶.西北大學(xué) 2009
[5]毛細(xì)管電泳與化學(xué)發(fā)光/生物發(fā)光聯(lián)用技術(shù)用于單細(xì)胞分析[D]. 治卿.上海交通大學(xué) 2007



本文編號：3346425