采用直接提取稀釋的快速前處理方法,結(jié)合穩(wěn)定同位素稀釋技術(shù),利用超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜,建立了糧食中16種真菌毒素的快速精準分析方法。樣品采用乙腈-水-乙酸溶液（70∶29∶1,體積比）提取,以C18色譜柱進行色譜分離,通過全掃描模式進行定量檢測,并采用穩(wěn)定同位素稀釋以減少基質(zhì)效應對定量分析的影響。結(jié)果表明,16種真菌毒素在一定濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)（r2）均大于0.999,4種常見糧食基質(zhì)（小麥、玉米、大米、大麥）的限量濃度水平的加標回收率（n=6）為75.3%¹23.5%,相對標準偏差為0.41%¹4.7%。該方法簡單、準確,適用于糧食中真菌毒素的檢測,可滿足日常監(jiān)測工作的需要。 

【文章來源】：分析測試學報. 2017,36(04)北大核心CSCD

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直接提取稀釋方法與商品化的多毒素凈化方法

452分析測試學報第36卷由于該凈化填料對于這些毒素有一定的吸附，會導致凈化過程中目標毒素的損失，影響定量結(jié)果的準確性，而直接提取稀釋法由于無需凈化步驟，避免了該過程中目標物的損失，對于所有目標毒素的回收率均在91%～113%之間。因此，直接提取稀釋法更適合于多種真菌毒素的快檢前處理，而且處理過程更加簡單、快捷。圖216種真菌毒素標準混合溶液的色譜圖Fig.2Chromatogramof16mycotoxinsmixedstandardsolution1．NIV，2．DON，3．DON－3G，4．3-AcDON，5．15-AcDON，6．AFG2，7．AFG1，8．AFB2，9．AFB1，10．HT－2，11．FB1，12．T－2，13．ZEN，14．OTA，15．ST，16．FB22.3基質(zhì)效應由于本方法前處理采用直接提取稀釋法，樣品中會存在一定的基質(zhì)效應干擾。本實驗對常見的4種糧食基質(zhì)進行了考察，并以目標物在空白基質(zhì)液中的峰面積與溶劑中峰面積的百分比來評估基質(zhì)效應，當結(jié)果接近100%時，表明無明顯的基質(zhì)效應，而高于100%說明有基質(zhì)增強效應，低于100%則說明有基質(zhì)抑制效應。16種真菌毒素在4種常見糧食基質(zhì)中的基質(zhì)效應結(jié)果顯示，16種真菌毒素的基質(zhì)效應為61.0%～118.4%，說明在這幾種常見的基質(zhì)中存在一定的基質(zhì)增強或抑制效應。如玉米基質(zhì)中的黃曲霉毒素，基質(zhì)抑制作用明顯(61.0%～84.4%)。基質(zhì)匹配標準曲線是一種常見的減少基質(zhì)效應的方法，但是由于真菌毒素污染的普遍性，16種毒素均不含的空白基質(zhì)不易獲得，特別是完全匹配的基質(zhì)難以獲得，而代表性基質(zhì)的普適性面臨挑戰(zhàn)，具有較大的不確定性，導致基質(zhì)匹配定量在標準化檢測中的應用受到局限。因此，為了更好消除基質(zhì)效應的影響，本實驗采用穩(wěn)定同位素稀釋法進行定量，以確保結(jié)果的準確可靠。2.4檢測條件的優(yōu)化對比含不同比例鹽和酸的弱

分辨質(zhì)譜快速精準測定糧食中多種真菌毒素455(續(xù)表5)CompoundContent(μg/kg)HＲMSQQQＲelativeaveragedeviation(%)Assignedvalue(μg/kg)Ｒange(μg/kg)HT－2102.07108.215.810659～152OTA3.123.052.22.871.61～4.13T－2138.87145.624.815187～215ZEN212.01221.504.4212126～2982.7實際樣品的測定采用本方法對某地區(qū)的10份小麥樣品進行檢測，共檢出NIV，DON，DON－3G，15-AcDON，3-Ac-DON，AFB1，AFB2，ZEN，ST9種真菌毒素，其他7種真菌毒素均未檢出，結(jié)果如表6所示。部分檢出毒素的定性結(jié)果如圖3所示。近年來由于異常氣候的原因，導致我國部分地區(qū)真菌毒素的污染較為嚴重，因此加強日常監(jiān)測尤為重要。本方法可以適用于大量糧食樣品中真菌毒素的快速準確定量分析。表610份小麥樣品中真菌毒素毒素的含量Table6Contentsofmycotoxinsin10wheatsamplesw/(μg·kg－1)CompoundWheat1Wheat2Wheat3Wheat4Wheat5Wheat6Wheat7Wheat8Wheat9Wheat10NIV575.271320.571566.70511.34374.75450.02906.46615.421243.48838.08DON2120.384878.665336.741499.001586.621644.843150.092143.354214.723153.44DON－3G415.371274.221439.74264.18307.10380.44649.73554.18951.60808.193-AcDON28.3952.0154.6413.2523.8316.9221.7120.5844.3946.5915-AcDON21.3242.1544.647.9717.3011.2015.431.6935.4337.37AFB20.03NDND0.030.03NDNDNDNDNDAFB11.16NDND2.140.40NDNDNDNDNDZEN67.92168.1658.28115.6823.9117.0086.0020.5562.4124.47ST3.430.26NDNDNDND0.83NDNDND圖3實際樣品(A)和標準溶液(B)中黃曲霉毒素B1的二級質(zhì)譜圖Fig.3MS2spectraofAFB1inrealsample(A)andstandardsolution(B)3結(jié)論基于Q－Exactive高分辨質(zhì)譜技

【參考文獻】：
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