發(fā)布時間：2021-08-08 09:01

　　應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）法研究含二硫鍵的人胰島素與甘精胰島素酶解液的源內(nèi)裂解（ISD）。比較了不同基質(zhì)種類及不同結(jié)晶狀態(tài)對含二硫鍵的人胰島素與甘精胰島素酶解液的源內(nèi)裂解的影響。結(jié)果表明,含二硫鍵的蛋白質(zhì)的ISD發(fā)生受激光點照射位置的影響,在不同基質(zhì)與結(jié)晶形態(tài)的條件下,含二硫鍵的蛋白質(zhì)的ISD碎片信息不同。通過分析比較,含二硫鍵的蛋白質(zhì)的ISD較容易控制,并且其基質(zhì)的種類及結(jié)晶狀態(tài)作用很關(guān)鍵。需要獲得大量碎片時,使激光照射在樣品和阿魏酸（FA）基質(zhì)形成的大結(jié)晶處;不希望出現(xiàn)碎片時,可使用2,4,6-三羥基苯乙酮（THAP）為基質(zhì),或使激光照射在樣品和其他基質(zhì)形成的細小均勻結(jié)晶處。 

【文章來源】：質(zhì)譜學(xué)報. 2017,38(03)北大核心EICSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖１人胰島素（ａ）和甘精胰島素（ｂ）的結(jié)構(gòu)式和相對分子質(zhì)量Ｆｉｇ．１Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｓｏｆｈｕｍａｎｉｎｓｕｌｉｎ（ａ）ａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｇｌａｒｇｉｎｅ（ｂ）

注：左圖為以ＦＡ為基質(zhì)的經(jīng)胰蛋白酶酶解后人胰島素的位點照片圖２均勻結(jié)晶位置（ａ）和大結(jié)晶處（ｂ）所得的ＭＡＬＤＩ質(zhì)譜圖Ｆｉｇ．２ＭＡＬＤＩｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｕｍｒｅｃｏｒｄｅｄｉｎａｒｅｇｉｏｎｗｈｅｒｅｃｒｙｓｔａｌｓａｒｅｖｅｒｙｆｉｎｅｌｙｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ（ａ）ａｎｄｒｅｃｏｒｄｅｄｏｎａｌａｒｇｅｃｒｙｓｔａｌ（ｂ）分析甘精胰島素的質(zhì)譜圖觀察到了相似的現(xiàn)象，結(jié)果示于圖３。從圖３可見，除了ｍ／ｚ４８０９．２０離子外，所有質(zhì)譜峰與圖２中結(jié)果相同。結(jié)果證實，含二硫鍵的蛋白質(zhì)ＩＳＤ的發(fā)生依賴于其結(jié)晶狀態(tài)，這與采用ＭＡＬＤＩＩＳＤ研究全甲基化糖的結(jié)果［２３］一致。在其報道中，因為糖對陽離子的親和性較高，所以碎裂可以由樣品點無定形區(qū)域的高濃度鈉所避免。另一方面，由于基質(zhì)晶體處沒有鈉離子，糖苷鍵被質(zhì)子化而斷裂。這種機理不能解釋當(dāng)前的實驗現(xiàn)象，因為多肽是被質(zhì)子化的，對于此現(xiàn)象的合理解釋是：結(jié)晶越小，樣品吸收的激光強度越小，ＭＡＬＤＩ過程越溫和；反之，結(jié)晶越大，樣品吸收的激光強度越大，ＭＡＬＤＩ過程越劇烈［２４］。注：左圖為以ＦＡ為基質(zhì)的經(jīng)胰蛋白酶酶解后甘精胰島素的位點照片；※號標記為通過對稱和非對稱斷裂二硫鍵而產(chǎn)生的碎片離子圖３均勻結(jié)晶位置（ａ）和大結(jié)晶處（ｂ）所得到的ＭＡＬＤＩ質(zhì)譜圖Ｆｉｇ．３ＭＡＬＤＩｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｕｍｒｅｃｏｒｄｅｄｉｎａｒｅｇｉｏｎｗｈｅｒｅｃｒｙｓｔａｌｓａｒｅｖｅｒｙｆｉｎｅｌｙｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ（ａ）ａｎｄｒｅｃｏｒｄｅｄｏｎａｌａｒｇｅｃｒｙｓｔａｌ（ｂ）為更

【參考文獻】：
期刊論文
[1]HPLC MALDI-TOF質(zhì)譜法檢測IFN-α2b二硫鍵結(jié)構(gòu)[J]. 張平.  海峽藥學(xué). 2016(05)
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本文編號：3329653