采用還原氧化石墨烯-金納米顆粒（RGO-Au NPs）作為免疫傳感器的固定基質(zhì),將C-反應(yīng)蛋白（CRP）抗體固定在玻碳電極表面,用蒽醌二羧酸作為標(biāo)記物,制成夾心型的CRP免疫傳感器。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下,通過(guò)示差脈沖伏安法對(duì)CRP的含量進(jìn)行檢測(cè)。該傳感器在0.25¹00 ng/m L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,檢出限為0.08 ng/m L,線性系數(shù)為0.997。該傳感器為C-反應(yīng)蛋白的檢測(cè)提供了一種新的手段。 

【文章來(lái)源】：分析測(cè)試學(xué)報(bào). 2017,36(03)北大核心CSCD

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免疫傳感器的制備流程

m)打磨干凈，將電極表面在不同粒徑大小的Al2O3粉末上拋光，再將電極分別用硝酸水溶液(1∶1)、無(wú)水乙醇、水各超聲洗滌5min，自然風(fēng)干后，將電極放在氧化石墨烯溶液中通過(guò)電沉積的方法沉積，在－1.4～1.2V范圍內(nèi)采用循環(huán)伏安法沉積，電極上得到ＲGO;取出電極用PBS緩沖液清洗干凈，放入HAuCl4溶液中用同樣的方法，在－0.8～2.0V范圍內(nèi)采用循環(huán)伏安法沉積上Au納米顆粒。電沉積完成后用PBS溶液沖洗干凈，自然風(fēng)干，在電極表面滴加CＲP抗體10.0μL，圖1免疫傳感器的制備流程Fig.1Stepwiseoffabricatingimmunosensor圖3掃描速度對(duì)傳感器響應(yīng)電流的影響Fig.3Effectofscanratesonresponsecurrentofimmunosensorscanrate(a－g):20，40，60，80，100，120，140mV/s;inset:theplotofpeakcurrentvs.v1/2置于冰箱中在4℃條件下過(guò)夜。將已修飾好CＲP抗體的玻碳電極用PBS緩沖液沖洗3次，自然晾干，在電極上滴加10μL1%的BSA溶液，將電極放在恒溫箱中(溫度為37℃)封閉1h。封閉好的電極用PBS溶液沖洗3次，自然晾干后，用于CＲP的測(cè)定。CＲP免疫傳感器的制備流程如圖1所示。1.4檢測(cè)方法在該免疫傳感器上滴加不同濃度的CＲP抗原，圖2氧化石墨烯的透射電鏡圖Fig.2TEMimageofGO將電極放在恒溫箱中(溫度為37℃)培育，培育完之后取出并用PBS沖洗干凈，自然晾干。然后滴加10.0μL蒽醌二羧酸標(biāo)記的CＲP抗體，置于上述恒溫箱中培育。之后取出并用PBS沖洗干凈，自然晾干。該傳感器作為工作電極，與鉑電極、甘汞電極組成三電極系統(tǒng)，置于pH值為6.5的醋酸緩沖溶液中，通過(guò)示差脈沖伏安法(DPV)進(jìn)行測(cè)定，得到DPV曲線，根據(jù)傳感器響應(yīng)電流值與CＲP濃度成正比的關(guān)系，實(shí)現(xiàn)對(duì)CＲP的定量測(cè)定。每次測(cè)定完后用4mol/L尿素洗脫30min，用PBS緩?

r圖3掃描速度對(duì)傳感器響應(yīng)電流的影響Fig.3Effectofscanratesonresponsecurrentofimmunosensorscanrate(a－g):20，40，60，80，100，120，140mV/s;inset:theplotofpeakcurrentvs.v1/2置于冰箱中在4℃條件下過(guò)夜。將已修飾好CＲP抗體的玻碳電極用PBS緩沖液沖洗3次，自然晾干，在電極上滴加10μL1%的BSA溶液，將電極放在恒溫箱中(溫度為37℃)封閉1h。封閉好的電極用PBS溶液沖洗3次，自然晾干后，用于CＲP的測(cè)定。CＲP免疫傳感器的制備流程如圖1所示。1.4檢測(cè)方法在該免疫傳感器上滴加不同濃度的CＲP抗原，圖2氧化石墨烯的透射電鏡圖Fig.2TEMimageofGO將電極放在恒溫箱中(溫度為37℃)培育，培育完之后取出并用PBS沖洗干凈，自然晾干。然后滴加10.0μL蒽醌二羧酸標(biāo)記的CＲP抗體，置于上述恒溫箱中培育。之后取出并用PBS沖洗干凈，自然晾干。該傳感器作為工作電極，與鉑電極、甘汞電極組成三電極系統(tǒng)，置于pH值為6.5的醋酸緩沖溶液中，通過(guò)示差脈沖伏安法(DPV)進(jìn)行測(cè)定，得到DPV曲線，根據(jù)傳感器響應(yīng)電流值與CＲP濃度成正比的關(guān)系，實(shí)現(xiàn)對(duì)CＲP的定量測(cè)定。每次測(cè)定完后用4mol/L尿素洗脫30min，用PBS緩沖液洗干凈，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程。2結(jié)果與討論2.1氧化石墨烯的微觀形貌對(duì)合成的氧化石墨烯材料進(jìn)行透射電鏡(TEM)表征，如圖2所示，可以看出該材料是一種層狀結(jié)構(gòu)，片層中存在褶皺，說(shuō)明氧化石墨烯的層數(shù)很少。表面非常光滑，呈透明的薄片狀。2.2氧化還原峰電流與掃描速度的關(guān)系為考察QC－labeledanti-CＲP/CＲP/anti-CＲP/ＲGO/GCE免疫傳感器的電化學(xué)行為，實(shí)驗(yàn)考察了掃描速度對(duì)氧化還原峰電流的影響，當(dāng)掃描速度在20～140mV/s范圍內(nèi)變化時(shí)，傳感器在HAc－NaAc緩沖溶液(pH5.5)中的循環(huán)伏安曲線如圖3所示�？梢钥�?

【參考文獻(xiàn)】：
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