采用整體柱建立了流速/溶劑雙梯度反相高效液相色譜法快速同時測定復方丹參片中三七皂苷R1,人參皂苷Rg1,Re,Rb1,Rd,Rb2及丹參酮ⅡA 7種有效成分。通過對溶劑和流速雙梯度體系的逐步優(yōu)化,并應用色譜模擬軟件Dry Lab,得到分離7種成分的最佳色譜條件。采用色譜柱Merck Chromolith Performance RP-18e（100 mm×4.6 mm）,以乙腈-水為流動相體系,流速/溶劑雙梯度洗脫,柱溫30℃;片劑中的7種成分在21 min內(nèi)達到基線分離;Rg1在60.60²42.40 mg/L（r=0.999 0）、丹參酮ⅡA在16.52⁶6.08 mg/L（r=0.999 9）,其余皂苷在30.70¹42.66 mg/L（r≥0.999 4）范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系;定量下限（S/N=10）為21¹24μg/kg,回收率為96.7%¹00.1%。該方法能在短時間內(nèi)同時分離不同極性的化合物,提高被測物的柱效,減少半峰寬和拖尾,可應用于復方丹參片中7種成分的含... 

【文章來源】：分析測試學報. 2017,36(02)北大核心CSCD

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DryLab模擬3.2mL·min－1，32%乙腈下Ｒb1，Ｒd，Ｒb2的圖譜

?實際起始時間應為扣除滯留影響后的時間。滯留時間可由下式求得:tD=VD/F。因此，各階段之間的梯度起始時間應修正提前，結(jié)果見表4。由表4可知，第一梯度若采用Mode1進行洗脫，應扣除滯后時間0.88min，修正為7.39min進行第二梯度洗脫;若采用Mode2進行洗脫，則應扣除滯后時間1.48min，修正為7.35min進行第二梯度洗脫。同理，第三梯度的實際起始洗脫時間應修正為扣除滯后時間0.88min后的14.03min。2.5流速/乙腈濃度雙梯度優(yōu)化分離模式的確定綜合各梯度流速/乙腈濃度的優(yōu)化，可得出兩種分離模式下的結(jié)果，相關(guān)色譜圖見圖2。圖2復方丹參片在兩種模式下的高效液相色譜圖Fig.2ChromatogramsofcompoundSalviamiltiorrhizabungetabletsindoubleacetonitrilecontent/flowgradientＲPHPLCmodes1．notoginsenosideＲ1;2．ginsenosideＲg1;3．ginsenosideＲe;4．ginsenosideＲb1;5．ginsenosideＲd;6．ginsenosideＲb2;7．tanshinoneⅡA選擇4組峰對:Ｒg1與Ｒe，Ｒb1與前一雜峰，丹參酮ⅡA與前后2個雜峰，應用色譜優(yōu)化函數(shù)［18］

則為末峰丹參酮ⅡA的保留時間。經(jīng)計算得出Mode1COF值為0.864;Mode2COF值為0.985，大于Mode1。表明模式2的優(yōu)化分離效果更好。用傳統(tǒng)的填充柱分離7個組分需要兩組不同的流動相分別進行［3］，測定方法相當繁瑣、費時;而整體柱測定所有成分僅需21min，對于所有關(guān)鍵峰對均能達到基線分離。2.6方法學研究及復方丹參片含量測定采用最終優(yōu)化的模式2，按“1.3”色譜條件進行方法學研究及片劑的含量測定。首先注入混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，進行系統(tǒng)適用性試驗，記錄色譜圖，供試品結(jié)果見圖2Mode2，其余結(jié)果見圖3。理論塔板數(shù)按三七皂苷Ｒ1計算不低于4500，7種待測物的拖尾因子不大于2，分離度均大于1.5，主峰峰面積的重復性ＲSD均小于2%，陰性對照溶液未見干擾。通過精密吸取不同體積的工作對照品溶液進行測定，以峰面積(y)對進樣質(zhì)量(x，μg)進行線性回歸，求得7種待測物的線性方程;根據(jù)樣品信號與噪音信號比(S/N)為10計算定量下限(LOQ)為0.021～0.124μg/kg;稱取供試品0.5g(精確至0.001g)至50mL棕色量瓶中，加入混合對照品溶液適量，配制低、中、高3個質(zhì)量濃度，按“1.2.2”方法平行制備6份樣品溶液，按“1.3”條件測定分析，分別得出7種待測組分的平均加樣回收率96.7%～100.1%(表5)，ＲSD(n=6)為0.63%～1.4%，表明本方法的準確度和精密度良好。圖3復方丹參片的HPLC系統(tǒng)適用性圖譜Fig.3ChromatogramsofsystemsuitabilityofcompoundSalviamiltiorrhizabungetabletsA．mixedreference，B．lackingsalviamiltiorrhizanotoginseng，C．lackingsalviamiltiorrhiza，D．lackingnotoginseng;thenumber(1－6)denotedwasthesameasthatinFig.2表57種待測組分的方法學參數(shù)測定和復方丹參片有效成分的測定結(jié)果Table5Analyticalperformancepa

【參考文獻】：
期刊論文
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