采用整體柱建立了流速/溶劑雙梯度反相高效液相色譜法快速同時(shí)測(cè)定復(fù)方丹參片中三七皂苷R1,人參皂苷Rg1,Re,Rb1,Rd,Rb2及丹參酮ⅡA 7種有效成分。通過(guò)對(duì)溶劑和流速雙梯度體系的逐步優(yōu)化,并應(yīng)用色譜模擬軟件Dry Lab,得到分離7種成分的最佳色譜條件。采用色譜柱Merck Chromolith Performance RP-18e（100 mm×4.6 mm）,以乙腈-水為流動(dòng)相體系,流速/溶劑雙梯度洗脫,柱溫30℃;片劑中的7種成分在21 min內(nèi)達(dá)到基線分離;Rg1在60.60²42.40 mg/L（r=0.999 0）、丹參酮ⅡA在16.52⁶6.08 mg/L（r=0.999 9）,其余皂苷在30.70¹42.66 mg/L（r≥0.999 4）范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系;定量下限（S/N=10）為21¹24μg/kg,回收率為96.7%¹00.1%。該方法能在短時(shí)間內(nèi)同時(shí)分離不同極性的化合物,提高被測(cè)物的柱效,減少半峰寬和拖尾,可應(yīng)用于復(fù)方丹參片中7種成分的含... 

【文章來(lái)源】：分析測(cè)試學(xué)報(bào). 2017,36(02)北大核心CSCD

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DryLab模擬3.2mL·min－1，32%乙腈下Ｒb1，Ｒd，Ｒb2的圖譜

?實(shí)際起始時(shí)間應(yīng)為扣除滯留影響后的時(shí)間。滯留時(shí)間可由下式求得:tD=VD/F。因此，各階段之間的梯度起始時(shí)間應(yīng)修正提前，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，第一梯度若采用Mode1進(jìn)行洗脫，應(yīng)扣除滯后時(shí)間0.88min，修正為7.39min進(jìn)行第二梯度洗脫;若采用Mode2進(jìn)行洗脫，則應(yīng)扣除滯后時(shí)間1.48min，修正為7.35min進(jìn)行第二梯度洗脫。同理，第三梯度的實(shí)際起始洗脫時(shí)間應(yīng)修正為扣除滯后時(shí)間0.88min后的14.03min。2.5流速/乙腈濃度雙梯度優(yōu)化分離模式的確定綜合各梯度流速/乙腈濃度的優(yōu)化，可得出兩種分離模式下的結(jié)果，相關(guān)色譜圖見(jiàn)圖2。圖2復(fù)方丹參片在兩種模式下的高效液相色譜圖Fig.2ChromatogramsofcompoundSalviamiltiorrhizabungetabletsindoubleacetonitrilecontent/flowgradientＲPHPLCmodes1．notoginsenosideＲ1;2．ginsenosideＲg1;3．ginsenosideＲe;4．ginsenosideＲb1;5．ginsenosideＲd;6．ginsenosideＲb2;7．tanshinoneⅡA選擇4組峰對(duì):Ｒg1與Ｒe，Ｒb1與前一雜峰，丹參酮ⅡA與前后2個(gè)雜峰，應(yīng)用色譜優(yōu)化函數(shù)［18］

則為末峰丹參酮ⅡA的保留時(shí)間。經(jīng)計(jì)算得出Mode1COF值為0.864;Mode2COF值為0.985，大于Mode1。表明模式2的優(yōu)化分離效果更好。用傳統(tǒng)的填充柱分離7個(gè)組分需要兩組不同的流動(dòng)相分別進(jìn)行［3］，測(cè)定方法相當(dāng)繁瑣、費(fèi)時(shí);而整體柱測(cè)定所有成分僅需21min，對(duì)于所有關(guān)鍵峰對(duì)均能達(dá)到基線分離。2.6方法學(xué)研究及復(fù)方丹參片含量測(cè)定采用最終優(yōu)化的模式2，按“1.3”色譜條件進(jìn)行方法學(xué)研究及片劑的含量測(cè)定。首先注入混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，記錄色譜圖，供試品結(jié)果見(jiàn)圖2Mode2，其余結(jié)果見(jiàn)圖3。理論塔板數(shù)按三七皂苷Ｒ1計(jì)算不低于4500，7種待測(cè)物的拖尾因子不大于2，分離度均大于1.5，主峰峰面積的重復(fù)性ＲSD均小于2%，陰性對(duì)照溶液未見(jiàn)干擾。通過(guò)精密吸取不同體積的工作對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定，以峰面積(y)對(duì)進(jìn)樣質(zhì)量(x，μg)進(jìn)行線性回歸，求得7種待測(cè)物的線性方程;根據(jù)樣品信號(hào)與噪音信號(hào)比(S/N)為10計(jì)算定量下限(LOQ)為0.021～0.124μg/kg;稱取供試品0.5g(精確至0.001g)至50mL棕色量瓶中，加入混合對(duì)照品溶液適量，配制低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度，按“1.2.2”方法平行制備6份樣品溶液，按“1.3”條件測(cè)定分析，分別得出7種待測(cè)組分的平均加樣回收率96.7%～100.1%(表5)，ＲSD(n=6)為0.63%～1.4%，表明本方法的準(zhǔn)確度和精密度良好。圖3復(fù)方丹參片的HPLC系統(tǒng)適用性圖譜Fig.3ChromatogramsofsystemsuitabilityofcompoundSalviamiltiorrhizabungetabletsA．mixedreference，B．lackingsalviamiltiorrhizanotoginseng，C．lackingsalviamiltiorrhiza，D．lackingnotoginseng;thenumber(1－6)denotedwasthesameasthatinFig.2表57種待測(cè)組分的方法學(xué)參數(shù)測(cè)定和復(fù)方丹參片有效成分的測(cè)定結(jié)果Table5Analyticalperformancepa

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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