2-O-α-D-甘油葡糖苷是一種在食品、化妝品、保健品及醫(yī)藥領域有著重大應用前景的高附加值產品,但國內仍未實現2-O-α-D-甘油葡糖苷的工業(yè)化生產,且鮮有關于2-O-α-D-甘油葡糖苷合成的相關報道。文中旨在開發(fā)一種利用食品安全級重組枯草芽孢桿菌全細胞催化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的方法,通過構建一株異源表達腸膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶（Sucrose phosphorylase,SPase）的重組枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis 168/pMA5-gtfA,并將其用作全細胞催化劑合成2-O-α-D-甘油葡糖苷,通過優(yōu)化培養(yǎng)溫度、時間及全細胞轉化條件,提高其轉化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的產量。結果表明,重組枯草芽孢桿菌B. subtilis 168/pMA5-gtfA在30℃下培養(yǎng)20 h,菌體裂解物酶活力最大達1.43 U/mL,并且在1 mol/L蔗糖、2.5 mol/L甘油、pH 7.0、菌體OD600為40、30℃下全細胞轉化反應48h,共生成2-O-α-D-甘油葡糖苷189.3g/L,平均轉化速率為15.6mmol/（L·h）,蔗糖轉化率約為75.1%,... 

【文章來源】：生物工程學報. 2020,36(09)北大核心CSCD

【文章頁數】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株與質粒
        1.1.2 酶和試劑
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 引物設計
        1.2.2 構建重組表達菌株
        1.2.3 Spase在大腸桿菌中的表達和純化
        1.2.4 Spase在枯草芽孢桿菌中的表達
        1.2.5 酶活測定
        1.2.6 酶的最適溫度的測定
        1.2.7 酶的最適p H的測定
        1.2.8 酶的溫度穩(wěn)定性的測定
        1.2.9 酶的p H穩(wěn)定性的測定
2 結果與分析
    2.1 腸膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶基因gtf A的克隆與表達
    2.2 溫度和p H對SPase酶活力和穩(wěn)定性的影響
        2.2.1 溫度對SPase酶活力和穩(wěn)定性的影響
        2.2.2 p H對SPase酶活力和穩(wěn)定性的影響
    2.3 SPase在枯草芽孢桿菌中的表達
    2.4 優(yōu)化SPase在枯草芽孢桿菌中的表達
        2.4.1 培養(yǎng)溫度的優(yōu)化
        2.4.2 培養(yǎng)時間的優(yōu)化
    2.5 重組菌B.subtilis 168/p MA5-gtf A全細胞轉化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的條件優(yōu)化
        2.5.1 溫度對全細胞轉化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的影響
        2.5.2 初始p H對全細胞轉化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的影響
        2.5.3 菌體量對全細胞轉化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的影響
        2.5.4 底物濃度對全細胞轉化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的影響
    2.6 5 L發(fā)酵罐全細胞轉化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]甘油葡萄糖苷的吸附分離方法研究[J]. 劉欣昱,呂雪峰,談曉明.  青島農業(yè)大學學報(自然科學版). 2015(04)
[2]ggpS基因過表達對集胞藻PCC 6803甘油葡萄糖苷和甘油合成的影響[J]. 馬培珍,談曉明,呂雪峰,田繼遠.  生物工程學報. 2016(03)
[3]蔗糖磷酸化酶制備及應用的研究進展[J]. 侯顧偉,馬江鋒,隋姍姍,姜岷,韋萍.  中國釀造. 2010(06)



本文編號：3153936