基于雙邊異佛爾酮丙二腈、吡啶鹽類(lèi)衍生物為熒光發(fā)色團(tuán),采用2,4-二硝基苯磺酰基（DNBS）、芳基硼酸酯為識(shí)別基團(tuán),分別構(gòu)建了新型比值型熒光探針用于生物硫醇和過(guò)氧化氫的檢測(cè)、分析以及動(dòng)態(tài)生物成像。此外利用超分子閉鎖系統(tǒng),結(jié)合熒光分析技術(shù)探究其在藥物遞送上的應(yīng)用。（1）DNBS由于對(duì)生物硫醇具有較高的反應(yīng)活性,已被廣泛用于小分子熒光探針的設(shè)計(jì)中。但是,由于其對(duì)熒光團(tuán)具有強(qiáng)烈的猝滅作用,大多數(shù)基于DNBS的熒光探針對(duì)生物硫醇表現(xiàn)出“off-on”的熒光反應(yīng)。在本文中,我們提出了基于DNBS的生物硫醇比值型熒光探針的替代設(shè)計(jì)。將帶有兩個(gè)異佛爾酮丙二腈結(jié)構(gòu)的新熒光團(tuán)與DNBS偶聯(lián)以提供目標(biāo)探針（CHT）,該探針表現(xiàn)出對(duì)生物硫醇的比值傳感行為。其傳感過(guò)程快速且較高度的選擇性。最重要的是,與單波長(zhǎng)響應(yīng)生物硫醇的對(duì)照探針CHM相比,CHT在對(duì)Cys的定量檢測(cè)具有較高的穩(wěn)定性。通過(guò)比值熒光信號(hào),在活細(xì)胞中使用CHT成功監(jiān)測(cè)了內(nèi)源性生物硫醇。（2）通過(guò)這項(xiàng)研究,我們提出了一種用于體外和在活細(xì)胞中檢測(cè)H₂O₂的比值型和具有線粒體靶向功能的熒光探針（Mito-HT）... 

【文章來(lái)源】：上海師范大學(xué)上海市

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

比值型熒光檢測(cè)

第1章上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文2當(dāng)DF的發(fā)射光譜與AF的吸收光譜很好地重疊時(shí)，就會(huì)發(fā)生有效的FRET。ESIPT熒光團(tuán)顯示出強(qiáng)烈的發(fā)射，光穩(wěn)定性和較大的斯托克斯位移（圖1-1c）。例如，在激發(fā)時(shí)，優(yōu)選的烯醇形式可以通過(guò)ESIPT轉(zhuǎn)化為激發(fā)的酮互變異構(gòu)體。激發(fā)的酮形式的松弛通過(guò)反向質(zhì)子轉(zhuǎn)移來(lái)再生烯醇形式。重要的是，ESIPT工藝通常受pH，氫鍵容量和溶劑極性的影響。圖1-2造成比值熒光變化的光物理過(guò)程，（a）內(nèi)部電荷轉(zhuǎn)移（ICT），（b）熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）和（c）激發(fā)態(tài)分子內(nèi)質(zhì)子轉(zhuǎn)移（ESIPT）。Figure1-2Photophysicalprocessesresponsibleforratiometricfluorescentchanges;(a)internalchargetransfer(ICT),(b)fluorescenceresonanceenergytransfer(FRET),and(c)excited-stateintramolecularprotontransfer(ESIPT).

第1章上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文4生物巰基主要包括半胱氨酸（Cys）、高半胱氨酸（Hcy）和谷胱甘肽（GSH），他們?cè)谏锵到y(tǒng)中的代謝和運(yùn)輸與一系列重要的酶和蛋白質(zhì)有關(guān)，他們的異常水平還可能誘發(fā)許多相關(guān)的疾病[30,52-55]。而比值型熒光探針由于其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，而被研究者青睞。Strongin等，報(bào)道了基于激發(fā)態(tài)分子內(nèi)質(zhì)子轉(zhuǎn)移（ESIPT）的HMBT熒光探針[56]，如圖1-3所示，該探針用于檢測(cè)HEPES/EtOH（8:2）中的半胱氨酸（Cys）和高半胱氨酸（Hcy）。極低濃度的Cys/Hcy（分別為L(zhǎng)OD=0.11μM和0.18μM）的存在將導(dǎo)致基于硫醇的綴合物添加到探針HMBT的丙烯酸酯基團(tuán)中，從而導(dǎo)致隨后的氨基環(huán)化反應(yīng)，這提供了HMBT熒光團(tuán)和各自的內(nèi)酰胺，并導(dǎo)致了比值發(fā)射強(qiáng)度（I487/I377）的巨大變化。發(fā)現(xiàn)探針HMBT對(duì)Cys/Hcy具有比其他生物學(xué)相關(guān)氨基酸優(yōu)異的選擇性。此外，由于7元環(huán)對(duì)8元環(huán)形成速率的差異，探針HMBT被證明能夠區(qū)分Cys與Hcy，這種差異反映在每種分析物的不同光譜和動(dòng)力學(xué)特征中。圖1-3基于ESIPT機(jī)理的熒光探針HMBT，可選擇性檢測(cè)半胱氨酸和高半胱氨酸。Figure1-3BasedonESIPTmechanismfluorescentprobeHMBTthatallowsfortheselectivedetectionofCysandHcy.此外，林偉英老師課題組，基于分子內(nèi)部電荷轉(zhuǎn)移（ICT）的機(jī)理合理地設(shè)計(jì)了新型比值型熒光探針1用于特異性檢測(cè)半胱氨酸和高半胱氨酸[57]。如圖1-4所示，在添加半胱氨酸或高半胱氨酸后，由于關(guān)閉了分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移，該探針在發(fā)射中顯示出非常大的藍(lán)移，從519nm處藍(lán)移至493nm處（125nm）。這種大的發(fā)射波長(zhǎng)偏移可允許探針1用于定量檢測(cè)Cys/Hcy。


本文編號(hào)：3123788