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基于LC-MS的白色鏈霉菌代謝物差異分析及其應(yīng)用研究

發(fā)布時間:2021-03-25 00:03
  鏈霉菌的次級代謝能力非常強大,代謝形式更是繁復(fù)多樣,其可以提供豐富的天然產(chǎn)物,被廣泛應(yīng)用于人類醫(yī)學(xué),動物健康和植物作物保護。但是我們對鏈霉菌的代謝路徑、生物合成基因簇功能的了解還是相對有限,通過對微生物代謝組學(xué)的分析,可以對鏈霉菌的細胞功能有更深層次的了解。(1)目前,代謝物的識別和鑒定是代謝組學(xué)進展最重要的限制因素之一,建立代謝物二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫可以有效地促進代謝組學(xué)的發(fā)展。我們利用HPLC-Q-TOF高分辨質(zhì)譜對模式菌株白色鏈霉菌(Streptomyces albus)的代謝產(chǎn)物進行檢測,然后通過二級質(zhì)譜(Auto ms/ms)對代謝物的結(jié)構(gòu)進行鑒定,從而建立基礎(chǔ)的白色鏈霉菌代謝物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫。通過實驗本文共獲得了1188個二級質(zhì)譜譜圖,297種無重復(fù)的化合物二級質(zhì)譜數(shù)據(jù),鑒定了其中52種代謝產(chǎn)物。此數(shù)據(jù)庫為后續(xù)分析白色鏈霉菌以及其為宿主的異源表達菌株的代謝差異和研究SF2768生物合成基因簇功能奠定了堅實的基礎(chǔ)。(2)SF2768為雙異腈天然活性物質(zhì),具有潛在應(yīng)用價值。本章研究旨在揭示SF2768的生物合成途徑,尋找可能的生物合成前體,解釋其生物合成基因簇的功能。首先,本文比較了野生... 

【文章來源】:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】:85 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

基于LC-MS的白色鏈霉菌代謝物差異分析及其應(yīng)用研究


基于Metlin的代謝物鑒別工作流程圖

形貌,培養(yǎng)方式,形貌,固體培養(yǎng)


、樣品前處理方法、液相色譜分離條件、質(zhì)譜采集參化。養(yǎng)基及培養(yǎng)方式的選擇考察了菌體的培養(yǎng)方式,包括固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)、 培養(yǎng)基、MS 培養(yǎng)基)。實驗結(jié)果顯示,在 2CM 培養(yǎng)為 2CM 營養(yǎng)貧瘠,不利于白色鏈霉菌的代謝,故本實S 培養(yǎng)基中含有大量的大豆餅粉,營養(yǎng)物質(zhì)豐富,白于此培養(yǎng)基基質(zhì)復(fù)雜,經(jīng)過樣品前處理后進質(zhì)譜檢測擾效應(yīng)。所以最終本實驗選擇基質(zhì)簡單,營養(yǎng)程度適中培養(yǎng)被污染時,固體培養(yǎng)易于觀察,而且其樣品前處最終選擇固體培養(yǎng)方式。圖 2-1 為液培、固培菌體外

色譜圖,二級質(zhì)譜,數(shù)據(jù)庫,檢測模式


圖 2-2 液相方法優(yōu)化色譜圖Fig. 2-2 The Chromatograms in different liquid separation methods3.2 二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)的采集與初步處理由于Q-TOF-MS的靈敏度很高,而且容易獲取大量的二級質(zhì)譜片段,同時對于Q-TOF-MS來說,具有可以同時獲得幾百個高分辨率和精確度的二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)的功能,所以我們利用Q-TOF-MS檢測模式菌株白色鏈霉菌代謝產(chǎn)物,快速獲得大批量二級質(zhì)譜圖。0 5 10 15 20 255.0x1051.0x1061.5x1062.0x1062.5x10method 2Aquisition Time(min)

【參考文獻】:
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碩士論文
[1]色譜—質(zhì)譜聯(lián)用分析微生物代謝網(wǎng)絡(luò)[D]. 許衛(wèi)萍.大連工業(yè)大學(xué) 2011
[2]模式鏈霉菌可移動基因組的比較分析[D]. 邵鈺城.上海交通大學(xué) 2011



本文編號:3098642

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