基于shotgun混合蛋白質(zhì)鑒定思路,研究山羊角水提液中蛋白質(zhì)類、肽類物質(zhì)組成。采用超高分辨的線性離子阱-靜電場軌道阱質(zhì)譜（LTQ/Orbitrap MS）,從山羊角水提液中大于3ku部位鑒定出52個蛋白質(zhì),從小于3ku部位鑒定出1 288個肽段,這些肽段源于46個蛋白質(zhì)。鑒定出的蛋白質(zhì)主要為角蛋白、膠原蛋白、角蛋白相關(guān)蛋白等結(jié)構(gòu)蛋白。根據(jù)每個氨基酸出現(xiàn)的頻次,將蛋白質(zhì)上的肽段標(biāo)記,繪制熱圖（heat map）,據(jù)此推測山羊角水提液中多肽類物質(zhì)形成的過程為:從蛋白質(zhì)的熱區(qū)（hot regions）中經(jīng)過降解、脫落、溶出,形成水提液中的各種肽段。該方法能夠快速、高效地分析鑒定山羊角水提液中蛋白質(zhì)肽類物質(zhì)組成,可用于角類動物藥蛋白質(zhì)類物質(zhì)組成與分析,也可為中藥動物藥的系統(tǒng)研究提供借鑒與方法參考。 

【文章來源】：質(zhì)譜學(xué)報. 2017,38(01)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

圖１山羊角水提液Ｆ１所有肽段中氨基酸的出現(xiàn)頻次Ｆｉｇ．１ＦｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎａｌｌｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ

圖１山羊角水提液Ｆ１所有肽段中氨基酸的出現(xiàn)頻次Ｆｉｇ．１ＦｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎａｌｌｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ肽段的分子質(zhì)量分布統(tǒng)計(jì)結(jié)果示于圖２�？梢姡亩蔚姆肿淤|(zhì)量介于７１５．２７～３７６３．６３ｕ之間，其中，８１．６８％的肽段分子質(zhì)量低于２０００ｕ。通常認(rèn)為，肽段的分子質(zhì)量低于２０００ｕ將有利于肽段透過生物屏障發(fā)揮功效［９］。圖２山羊角水提液Ｆ１中所有肽段的分子質(zhì)量分布Ｆｉｇ．２ＭＷｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ通過ｎａｎｏＬＣ－ＭＳ／ＭＳ結(jié)合蛋白質(zhì)搜庫鑒定的思路，鑒定了山羊角水提液中可溶性肽段與蛋白質(zhì)信息。肽段的氨基酸序列表明，這些肽段多數(shù)源于ＫＲＴ和ＫＡＰｓ，鑒定結(jié)果可在一定程度上解釋山羊角水提液中肽段的形成過程。根據(jù)每個氨基酸出現(xiàn)的頻次，將蛋白質(zhì)上的肽段標(biāo)記，繪制“熱圖（ｈｅａｔｍａｐ）”，示于圖３。圖中，顏色越紅，表明氨基酸出現(xiàn)頻次越高，蛋白質(zhì)的這部分肽段可被認(rèn)為是一個“熱區(qū)（ｈｏｔｒｅｇｉｏｎｓ）”，處于熱區(qū)內(nèi)的氨基酸為出現(xiàn)頻次較高的氨基酸序列，表明這些肽段的序列易于降解、脫落、溶出，最終形成提取液中的各種肽段［１０］。以角蛋白（Ｋｅｒａｔｉｎ３４，Ｅ３ＶＷ７９＿ＳＨＥＥＰ）為例，山羊角水提液中共有２２１個肽段源于該蛋白，其中１４個是唯一肽段，唯一肽段數(shù)＞２，可確定該蛋白為山羊角水提液中肽段的來源蛋白之一。肽段（Ｇ

Ｆ１中所有肽段的分子質(zhì)量分布Ｆｉｇ．２ＭＷｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ通過ｎａｎｏＬＣ－ＭＳ／ＭＳ結(jié)合蛋白質(zhì)搜庫鑒定的思路，鑒定了山羊角水提液中可溶性肽段與蛋白質(zhì)信息。肽段的氨基酸序列表明，這些肽段多數(shù)源于ＫＲＴ和ＫＡＰｓ，鑒定結(jié)果可在一定程度上解釋山羊角水提液中肽段的形成過程。根據(jù)每個氨基酸出現(xiàn)的頻次，將蛋白質(zhì)上的肽段標(biāo)記，繪制“熱圖（ｈｅａｔｍａｐ）”，示于圖３。圖中，顏色越紅，表明氨基酸出現(xiàn)頻次越高，蛋白質(zhì)的這部分肽段可被認(rèn)為是一個“熱區(qū)（ｈｏｔｒｅｇｉｏｎｓ）”，處于熱區(qū)內(nèi)的氨基酸為出現(xiàn)頻次較高的氨基酸序列，表明這些肽段的序列易于降解、脫落、溶出，最終形成提取液中的各種肽段［１０］。以角蛋白（Ｋｅｒａｔｉｎ３４，Ｅ３ＶＷ７９＿ＳＨＥＥＰ）為例，山羊角水提液中共有２２１個肽段源于該蛋白，其中１４個是唯一肽段，唯一肽段數(shù)＞２，可確定該蛋白為山羊角水提液中肽段的來源蛋白之一。肽段（Ｇ６９－Ｒ８２）的鑒定圖和肽段在Ｋｅｒａｔｉｎ３４中的分布情況示于圖４。根據(jù)ＭＳ／ＭＳ圖譜與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫比對搜庫結(jié)果，確定肽段的氨基酸序列，以肽段ＧＮＥＫＥＴＭＱ－ＦＬＮＤＲ為例，ｍ／ｚ７９１．３７的主要碎片離子峰包括ｙ１＋（１７５．１２）、ｙ２＋（２９０．１５）、ｙ３＋（４０４．１９）、注：每個氨基酸的出現(xiàn)頻次用不同顏色表示圖３角蛋白Ｋｅｒａｔｉｎ３４的熱圖Ｆｉｇ．３ＨｅａｔｍａｐｓｏｆＫｅｒａｔｉｎ３４１

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水牛角中水溶性物質(zhì)化學(xué)組成分析與鑒定[J]. 劉睿,段金廒,吳皓,劉培,尚爾鑫,錢大瑋.  藥學(xué)學(xué)報. 2015(05)
[2]不同工藝金振口服液藥效實(shí)驗(yàn)比較研究[J]. 孫蘭,李家春,徐連明,王振中,蕭偉.  中醫(yī)藥導(dǎo)報. 2014(09)
[3]角蛋白的分子構(gòu)成、提取及應(yīng)用[J]. 賈如琰,何玉鳳,王榮民,李芳蓉,王艷.  化學(xué)通報. 2008(04)
[4]黃羊角、山羊角、綿羊角、鵝喉羚羊角與羚羊角的鎮(zhèn)痛及對平滑肌藥理作用的比較[J]. 李凡,袁子琪.  天津中醫(yī). 1988(05)
[5]黃羊角、山羊角、綿羊角與羚羊角的藥理比較試驗(yàn)[J].   中成藥研究. 1978(03)
[6]羚羊角、山羊角、綿羊角藥理作用的初步研究[J].   江蘇醫(yī)藥. 1976(04)



本文編號：3017001