泛素化修飾是真核細(xì)胞中蛋白質(zhì)翻譯后修飾最常見的方式之一,該過程基本涉及真核細(xì)胞生命活動(dòng)的各個(gè)進(jìn)程,發(fā)揮重要的調(diào)控作用,在蛋白質(zhì)的降解、定位、功能、代謝等過程中不可或缺。近來,人們發(fā)現(xiàn)嗜肺軍團(tuán)菌效應(yīng)蛋白MavC作為一個(gè)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶,通過其轉(zhuǎn)谷氨酰胺活性介導(dǎo)調(diào)控一種獨(dú)特的泛素化,即MavC催化將Ub（泛素）第40位的谷氨酰胺（Gln40）連接到UBE2N,從而對(duì)UBE2N進(jìn)行泛素化修飾。在本文中,我們解析了 MavCC74A/UBE2N/Ub三元復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu),從分子水平上揭示了這種獨(dú)特的泛素化機(jī)制。為了深入了解這種非常規(guī)泛素化的催化過程,我們還解析了MavC/UBE2N-Ub二元復(fù)合物的結(jié)構(gòu)。此外,我們還發(fā)現(xiàn)MavC對(duì)其本身催化的這種獨(dú)特泛素化過程也表現(xiàn)出催化逆反應(yīng)的較弱的活性,即對(duì)該非常規(guī)泛素化產(chǎn)物UBE2N-Ub進(jìn)行去泛素化,將產(chǎn)物UBE2N-Ub分解為UBE2N和Ub。通過對(duì)上述兩個(gè)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)分析,我們針對(duì)復(fù)合物中的MavC、UBE2N以及Ub設(shè)計(jì)了多個(gè)關(guān)鍵氨基酸突變,并純化了上述蛋白,進(jìn)行其體外泛素化、去泛素化、脫氨基實(shí)驗(yàn)等功能性驗(yàn)證的生化實(shí)驗(yàn)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)合我們獲得的復(fù)合... 

【文章來源】：北京化工大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１經(jīng)典的三酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)催化的泛素化過程??Ｆｉｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｕｂｉｕｉｔｉｎａｔｉｏｎｒｏｃｅｓｓ?ｃａｔａｌｚｅｄ?ｂｔｈｅ?ｃａｎｏｎｉｃａｌ?ｔｈｒｅｅ－ｅｎｚｍｅ?ｃａｓｃａｄｅ??

?北京化工大學(xué)碩士學(xué)位論文???Ｍ??嫌?？??ＨＨＨＩＨＶ??圖２－３蛋白樣品跑膠后示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｓａｍｐｌｅｓ?ａｆｔｅｒ?ｒｕｎｎｉｎｇ??２．３蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)解析??２．３．１主要使用的儀器與耗材??在對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)晶前后，需要使用一些儀器與實(shí)驗(yàn)耗材。對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)晶條件的??篩選需要用到的坐滴和懸滴板、８孔電動(dòng)排槍以及與其對(duì)應(yīng)使用的槍頭耗材、商??品化的晶體條件篩選試劑盒，本文主要應(yīng)用的是生產(chǎn)自Ｈａｍｐｔｏｎ?Ｒｅｓｅａｒｃｈ?（ＨＲ）、??Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ?（ＭＤ）以及?Ｅｍｅｒａｌｄ?Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ?（ＥＢ）三家公司的晶體條件篩??選試劑盒，其中購自ＨＲ公司的晶體篩選試劑盒如表２－８：??表２－８購自ＨＲ公司試劑盒??Ｔａｂｌｅ?２－８?Ｋｉｔｓ?ｐｕｒｃｈａｓｅｄ?ｆｒｏｍ?ＨＲ???公司名稱?試劑盒名稱?條件數(shù)???ＨＲ２－０８２?４８??ＨＲ２－０８４?４８??ＨＲ２－０９８?４８??ＨＲ２－１０７?４８??Ｈａｍｐｔｏｎ?Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＨＲ）?ＨＲ２－１０９?４８??ＨＲ２－１１０?４８??ＨＲ２－１１２?４８??ＨＲ２－１１４?４８???ＨＲ２－１１６?４８???２２??

撈取晶體使用的顯微鏡、撈晶體的輔助工具、保存晶體的超低溫液氮罐等。??２．３．２蛋白質(zhì)結(jié)晶原理??若想讓蛋白質(zhì)結(jié)晶，首先要求蛋白質(zhì)的純度必須非常高，理論上來說蛋白質(zhì)??純度越高，結(jié)晶的可能性就越大。在對(duì)蛋白質(zhì)晶體進(jìn)行結(jié)晶實(shí)驗(yàn)時(shí)，將蛋白質(zhì)溶??液中加入帶有沉淀劑以及鹽的溶液中，然后封閉在一定的小空間內(nèi)，通過氣相擴(kuò)??散使整個(gè)體系達(dá)到過飽和狀態(tài)形成蛋白質(zhì)晶核后，蛋白質(zhì)晶體慢慢生長析出。晶??體結(jié)晶過程可能經(jīng)歷四個(gè)階段，分別為．？不飽和區(qū)、亞穩(wěn)定區(qū)、成核區(qū)、沉淀區(qū)??（晶體生長示意圖如圖２－４）。而蛋白質(zhì)溶液達(dá)到一定的沉淀劑濃度、過飽和狀態(tài)??時(shí)，才能進(jìn)入成核區(qū)然后進(jìn)行生長。??Ｉ?１??＿?＇?Ｓｕｐｅｒｓａｔｕｒａｔｉｏｎ?Ｉ??■?ｒ＼??＼?＼?Ｐｒｅｃｉｐｉｌｓｔｉｏｎ?ｔｏｎｅ??育－?＼?＼?Ｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ?＇?＼??１?＼?＼?＼??＾＊＊＊＊＂＊＊＊－－?ＴｉｉｉｐｍｒｔｎｌｉｉｈＨｆｔｙ??Ｍｅｉａｓｔａｂｌｅ?ｃｕｒｖ＃??－［Ｕｎ．ｔｏｍ．ｔｕｍｌｌｏｎｌ?．?猶哞嶋??Ａｄｊｕｓｔａｂｌｅ?Ｐａｒａｍｅｔｅｒ??圖２－４蛋白質(zhì)晶體生長相圖ｔ２９ｌ??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｐｈａｓｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｃｒｙｓｔａｌ?ｇｒｏｗｔｈ??２４??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]組蛋白泛素化與去泛素化對(duì)染色質(zhì)和基因表達(dá)的研究進(jìn)展[J]. 林燁,裴培,王珊.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2019(08)
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本文編號(hào)：3009713