【摘要】：土霉素是四環(huán)素類抗生素中的一種,屬于廣譜抗生素,在醫(yī)療制藥和畜牧養(yǎng)殖行業(yè)應(yīng)用比較廣泛,但是不合理的添加劑量和不完善的處理措施使得土霉素殘留成為人們共同關(guān)注的問題。人們因食用含有抗生素殘留的食品導(dǎo)致抗生素進入體內(nèi),對人體的健康造成損害。此外,環(huán)境中殘留抗生素使得像植物乳桿菌這樣的益生菌產(chǎn)生耐藥性,這類微生物通過食物鏈進入人體將抗性基因傳遞給致病菌,同樣給人體健康造成威脅。目前在食品中抗生素殘留檢測方面,大多存在對樣品的前處理要求較高,儀器操作復(fù)雜,檢測時間較長等問題。在微生物耐藥菌株的篩選上,也存在耗時長,容易產(chǎn)生偏差等問題。本實驗利用表面增強拉曼光譜(SERS)技術(shù),結(jié)合具有優(yōu)異SERS增強效應(yīng)的金銀納米材料,構(gòu)建了對牛奶中土霉素殘留檢測的新方法,同時運用SERS技術(shù)研究了土霉素對植物乳桿菌生長的影響。主要研究工作如下:首先,建立了基于銀納米材料自組裝結(jié)構(gòu)的土霉素SERS檢測方法。該方法利用含有土霉素適配體的莖環(huán)結(jié)構(gòu)DNA將銀納米棒和銀納米球顆粒進行組裝,在靶標土霉素存在條件下,適配體與土霉素特異性結(jié)合導(dǎo)致莖環(huán)結(jié)構(gòu)斷裂,銀納米球向銀納米棒靠近,使得銀納米球表面信號分子4-巰基苯甲酸(4-MBA)SERS信號得到增強。最適條件下,土霉素濃度在4.96×10~-22 fg/mL-4.96×10~2 fg/m L時,濃度的對數(shù)值與SERS信號強度具有良好的線性關(guān)系,標準曲線為y=4660.35+2139.42x(R~2=0.9984),檢測限為0.0373 fg/mL。通過特異性分析和牛奶樣品加標回收實驗,證明該方法可用于實際樣品的檢測。其次,建立了基于金銀納米材料自組裝結(jié)構(gòu)的土霉素SERS檢測方法。該方法是在第一個實驗的基礎(chǔ)上,對納米材料進行改進,以銀納米球為基礎(chǔ)通過氯金酸與銀的置換反應(yīng)合成空心金納米球顆粒。在相同的組裝模式下,該方法進一步提高了檢測靈敏度。在最優(yōu)實驗條件下,土霉素濃度在4.96×10~(-3) fg/m L-4.96×10~2 fg/mL時,濃度的對數(shù)值與SERS信號強度具有良好的線性關(guān)系,標準曲線為y=1136.31+227.7x(R~2=0.9954),檢測限為0.00012 fg/m L。在特異性實驗和加標回收實驗中,該方法均能得到良好的結(jié)果,可用于實際樣品的快速檢測。最后,基于銀納米棒固相SERS基底研究了土霉素對植物乳桿菌生長的影響。將銀納米棒與石英片進行組裝,制備了一種SERS增強效應(yīng)良好、重復(fù)性高的固相基底。將不同濃度的土霉素與植物乳桿菌分別孵育30 min、60 min和90 min,在固相基底上對菌細胞SERS信號進行測定,通過對拉曼光譜的出峰位置和峰強度變化進行分析,研究了不同濃度土霉素在不同時間對植物乳桿菌生長的影響以及菌細胞成分的變化。該方法有利于更好地了解抗生素對微生物的影響,也為微生物耐藥性菌株的快速篩選提供了技術(shù)支持。
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：O657.37;TS207.5
【圖文】：

要試劑3）、氯金酸（HAuCl4·3 H2O）、氨水（NH3H2氧化鈉（NaOH）、抗壞血酸（L-AscorbicAcid）烷（Tris）、檸檬酸三鈉、氯化鈉、鹽酸、硝酸奇霉素、硫酸鎂、四環(huán)素、金霉素、巰基苯甲）、無水乙醇、0.2 μm 水系濾膜、牛肉浸膏、酸氫二鉀等所有試劑均購買于國藥控股有限公基）膦鹽酸鹽、6-巰基-1-正丁醇（MCH）購自銨購自生工生物工程（上海）有限公司。牛奶驗用水均為超純水，所用試劑均為分析純tarum XLP1733）：本實驗室前期篩選保藏。的 DNA 序列為：5'-biotin-ACC GCA CCA CA CTC ATG ACG ACG CAC AGT CGC TGG3′，由生工生物工程（上海）有限公司合成。

圖 2-2 基于銀納米自組裝結(jié)構(gòu)土霉素 SERS 檢測方法原理圖Schematic illustration of SERS detection for oxytetracycline based on self-assemnanostructures法原理如圖 2-2 所示：SERS 信號分子 4-MBA 以 Ag-S 鍵修飾在球再通過含有土霉素適配體及其互補序列的莖環(huán)結(jié)構(gòu) DNA 與銀納

圖 2-3 基于金銀納米自組裝結(jié)構(gòu)土霉素 SERS 檢測方法原理圖2-3 Schematic illustration of SERS detection for oxytetracycline based on self-assenanostructures composed of gold and silver米棒的制備

【參考文獻】

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本文編號：2784476