發(fā)布時(shí)間：2020-07-22 12:18

【摘要】：液相比色分析法通常使用有機(jī)染料、酶底物、貴金屬納米顆粒等作為比色探針,將目標(biāo)物的濃度轉(zhuǎn)換成均相反應(yīng)溶液的顏色強(qiáng)度進(jìn)行分析。由于顏色強(qiáng)度僅是最終反應(yīng)溶液的一維信息,因此,現(xiàn)有的液相比色分析方法可統(tǒng)稱(chēng)為一維液相比色分析法(One Dimensional Liquid-Phase Colorimetric Assay,1D LPCA)。它們具有操作簡(jiǎn)單、成本經(jīng)濟(jì)、可實(shí)現(xiàn)目視定性或半定量檢測(cè)等突出優(yōu)點(diǎn),長(zhǎng)期以來(lái)備受分析工作者的青睞,美中不足的是必須借助紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)等光學(xué)儀器才能進(jìn)行分析物的定量檢測(cè)。本論文以半胱胺、腺苷以及重金屬離子為模型分析物并巧妙結(jié)合二維液相比色分析(Two Dimensional Liquid-Phase Colorimetric Assay,2D LPCA)理論,成功開(kāi)發(fā)出了兩種具有原始創(chuàng)新性的免儀器定量生物傳感新方法。(1)就現(xiàn)有的基于納米金的液相比色分析理論(GNP-LPCAs)而言,實(shí)現(xiàn)液相中目標(biāo)物的免儀器定量檢測(cè)基本上是一個(gè)不可能完成的任務(wù)。為解決這一難題,在第二章中,開(kāi)發(fā)了一種基于半胱胺誘導(dǎo)GNPs團(tuán)聚的二維液相比色分析新方法(2D GNP-LPCA)。在反應(yīng)溶液中加入甲酰胺這一智能顏色分層調(diào)節(jié)劑后,會(huì)得到一種雙色(上紅-下藍(lán)或者上藍(lán)-下紅)混合溶液,更重要的是,隨著半胱胺濃度的增大,甲酰胺可以調(diào)節(jié)最終形成的雙色混合溶液中有色溶液的長(zhǎng)度隨之增長(zhǎng),因此可將顏色長(zhǎng)度作為另一信息用于半胱胺的免儀器定量檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下,半胱胺的線性檢測(cè)范圍為1.3~80μM,目視檢測(cè)下限為1.3μM�；诖�,又開(kāi)發(fā)了一種基于核酸適配體的2D GNP-LPCA策略,并將之作為2D GNP-LPCA新理論的拓展性應(yīng)用,使其便捷、低成本、靈敏、特異性地檢測(cè)緩沖液或人血清樣品中的腺苷。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下,腺苷的線性檢測(cè)范圍為9.7 nM~10μM,目視檢測(cè)下限為9.7 nM。將新方法應(yīng)用于人血清樣品分析,回收率結(jié)果令人滿(mǎn)意。(2)在眾多重金屬中,銀屬于最高毒性中的一種。傳統(tǒng)的銀離子(Ag+)定量檢測(cè)方法普遍需要借助大型分析儀器。在第三章中,提出了一種基于二維液相比色分析策略的低成本免儀器Ag+目視即時(shí)定量檢測(cè)新方法。新方法使用甲酰胺溶解3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)探針。當(dāng)將Ag+水溶液樣品滴入TMB溶液時(shí),Ag+便快速氧化TMB生成藍(lán)色醌式聯(lián)苯胺。因該產(chǎn)物更傾向于在水相中形成,最終得到獨(dú)特的上層藍(lán)色-下層無(wú)色的雙色混合溶液。其中,甲酰胺可起到智能調(diào)節(jié)劑的作用。換言之,隨著Ag+濃度的增大,甲酰胺可以調(diào)節(jié)最終形成的雙色混合溶液中有色溶液的長(zhǎng)度隨之增長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下,Ag+的線性檢測(cè)范圍為62.5μM~4 mM,目視檢測(cè)下限為24.9μM。將新方法應(yīng)用于池塘水樣分析,回收率結(jié)果令人滿(mǎn)意。
【學(xué)位授予單位】：桂林理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：O657;TP212.3
【圖文】：

理示意圖（A）現(xiàn)有的 1D GNP-LPCAs 其主要依據(jù)均相納米金 參考信息，（B）提出的 2D GNP-LPCAs，該體系產(chǎn)生的是一個(gè)雙溶液，并且顏色長(zhǎng)度作為另外一個(gè)（第二）維度信息用作免儀器atic of colorimetric and detection principles of (A) the existing 1D Gation of color type and intensity of a homogeneous GNP solutionhe reader and (B) the proposed 2D GNP-LPCAs in which a top-bred) solution is formed and the color length can be explored as the admation for equipment-free quantitative analysis.下藍(lán)”模式的 2D GNPs-LPCAs 新方法用于半胱胺的檢s 相對(duì)于傳統(tǒng) 1D GNP-LPCAs 在分析檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)所在。Ps-LPCAs 方法是前面新方法的加強(qiáng)版，被進(jìn)一步開(kāi)發(fā)出免儀器目視定量檢測(cè)緩沖液和人血清中的靶分子腺苷。的各種各樣的適體可直接獲取天然存在的，或者根據(jù)特化技術(shù)[72]（systematic evolution of ligands by exponen

GNP 溶液在 520 nm 處的吸收峰的強(qiáng)度有所降低（圖 2.2C，曲線 2）；將 30 μL 40 μM 由PBS 配制的半胱胺快速滴加到 100 μL 紅色 GNP 水溶液中去，則產(chǎn)生一種均相藍(lán)色混合溶液（圖2.2B，圖片3），明顯觀察出半胱胺可誘導(dǎo)GNP團(tuán)聚，聚集后的GNP在669 nm處存在明顯吸收峰（圖 2.2C，曲線 3）；將 30 μL40 μM PBS 配的半胱胺逐滴滴加到 100μL 紅色 GNP 水溶液中去，依然產(chǎn)生一種均相藍(lán)色混合溶液（圖 2.2B，圖片 4）；同樣

合溶液（圖 2.2B，圖片 6）；雙色混合溶液上層的紅色 GNP 在紫外光譜圖中，20 nm 處存在特征吸收峰（圖 2.2C，曲線 6-top），這表明紅色 GNP 在雙色混層分散良好；另外，下層藍(lán)色溶液在 520 nm 處的吸收峰明顯降低，同時(shí)在 66現(xiàn)一個(gè)新的吸收峰（圖 2.2C，曲線 6-bottom）。以上結(jié)果表明，采用“甲酰胺滴滴加”是 2D LPCA 方法成功的兩個(gè)關(guān)鍵要素。1.2 半胱胺的體積優(yōu)化半胱胺可介導(dǎo) GNP 團(tuán)聚，在 2D GNP-LPCA 方法中，要想得到理想的顯色效胺的體積起到至關(guān)重要的作用�；谇懊娴牡渭臃绞�，先將 PBS 配制的半胱胺等體積混合，將此混合物（半胱胺濃度為 40 μM）分別以不同的體積（15、30、40 和 50 μL）滴加至 100 μL 紅色 GNP 水溶液中（圖 2.3），隨著混合物加，半胱胺介導(dǎo) GNP 變藍(lán)的程度越大，當(dāng)混合物體積小于 30 μL 時(shí)，可使P 溶液部分團(tuán)聚，但存在界線不清晰的問(wèn)題；當(dāng)混合物體積大于 40 μL 后，P 溶液幾乎完全變藍(lán)，因此，在這里我們選擇混合物的體積 30 μL 作為最優(yōu)的體后面對(duì)半胱胺的定量分析。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Highly sensitive chemiluminescence technology for protein detection using aptamer-based rolling circle amplification platform[J];Journal of Pharmaceutical Analysis;2011年03期

本文編號(hào)：2765807