【摘要】：尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)對(duì)DNA中尿嘧啶特異性識(shí)別和移除,屬于尿嘧啶損傷修復(fù)蛋白,它通過識(shí)別DNA中的尿嘧啶并切斷尿嘧啶與脫氧核糖之間的N-糖苷鍵來移除尿嘧啶(U)堿基,產(chǎn)生無堿基或無嘧啶(AP)位點(diǎn),啟動(dòng)堿基切除修復(fù)路徑,然后結(jié)合其他蛋白酶完成整個(gè)DNA損傷修復(fù)過程。它在堿基切除修復(fù)路徑中具有重要的作用,可維持基因組完整性。鑒于以上分析,本文利用堿基切除修復(fù)的熒光生物傳感方法對(duì)UDG活性進(jìn)行靈敏、準(zhǔn)確檢測(cè)。本文共分為三章:第一章為緒論,概述了堿基切除的產(chǎn)生原因和機(jī)理、UDG的結(jié)構(gòu)和功能、研究意義以及分析歸納了目前關(guān)于UDG活性的傳統(tǒng)檢測(cè)方法和新型生物傳感檢測(cè)方法,并指出檢測(cè)方法中存在的問題。第二章構(gòu)建了一種基于自引物自模板循環(huán)滾環(huán)擴(kuò)增(Self-RRCA)策略用于UDG活性的靈敏和準(zhǔn)確檢測(cè)。首先,設(shè)計(jì)了含有一個(gè)U的不成熟的模板鏈,它與引物鏈部分互補(bǔ),形成一個(gè)前體擴(kuò)增子識(shí)別探針。經(jīng)UDG和內(nèi)切酶Ⅳ(endoⅣ)作用后,前體擴(kuò)增子探針發(fā)生構(gòu)象轉(zhuǎn)變,進(jìn)而形成一個(gè)RCA擴(kuò)增子。然后RCA擴(kuò)增子被用于觸發(fā)RCA反應(yīng),經(jīng)Nt.BbvCI切刻酶作用,新的擴(kuò)增子被釋放來觸發(fā)下一輪RCA,這就構(gòu)成了一個(gè)Self-RRCA。在這個(gè)方法中,設(shè)計(jì)的不成熟模板與引物在連接部分不完全互補(bǔ),這可有效地避免非特異性連接,最終有效地避免非特異性擴(kuò)增。相比線性RCA,Self-RRCA展現(xiàn)了更高的擴(kuò)增效率。由于以上優(yōu)勢(shì),本方法實(shí)現(xiàn)了 UDG的靈敏和準(zhǔn)確檢測(cè),檢測(cè)限低至510-5U mL-1。而且,這個(gè)方法用于篩選UDG抑制劑和分析HeLa細(xì)胞裂解液中的UDG活性。這個(gè)方法將會(huì)提供一種有前景的分析工具用于進(jìn)一步的UDG生物研究和臨床診斷。第三章構(gòu)建了一種基于內(nèi)源性酶觸發(fā)的DNA walker用于胞內(nèi)檢測(cè)UDG活性。首先,金納米顆粒上修飾有3'端標(biāo)記熒光團(tuán)FAM的且含有U堿基的底物鏈(SR)和DNAwalker鏈(DW)。由于熒光共振能量轉(zhuǎn)移,金納米顆粒將SR上熒光淬滅掉。其次,DW上有一部分與SR堿基互補(bǔ),在目標(biāo)物UDG作用下,尿嘧啶堿基被移除,產(chǎn)生AP位點(diǎn)。緊接著在AP內(nèi)切酶(APE1)作用下,將AP位點(diǎn)切割,底物鏈被切斷后熒光恢復(fù)。隨后,DW繼續(xù)與下一條SR雜交,產(chǎn)生增強(qiáng)的熒光信號(hào)。此策略中,首先,DNA walker的運(yùn)行是由胞內(nèi)內(nèi)源性酶觸發(fā)的,無需外加蛋白酶或其他任何物質(zhì),保證了 DNAwalker在胞內(nèi)的正常運(yùn)行。其次,由于金納米顆粒上DNA局部濃度增大,可進(jìn)一步促進(jìn)酶切反應(yīng)和底物鏈的卸載,這有利于DNA walker的快速反應(yīng)和熒光釋放,最后,由于DNA負(fù)載到金納米顆粒上可有效避免胞內(nèi)核酸酶對(duì)DNA鏈的降解。本文提出的這一策略將為胞內(nèi)檢測(cè)其他DNA修復(fù)酶提供一個(gè)重要的工具。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：O657.3
【圖文】：

圖ｉ．ｉ堿基切除修復(fù)路徑示意圖２４逡逑啶－ＤＮＡ糖基化酶概述逡逑啶－ＤＮＡ糖基化酶的結(jié)構(gòu)和功能逡逑啶－ＤＮＡ糖基化酶（ＵＤＧ）是ＤＮＡ糖基化酶中的一種，屬于白，分子量大約為３７邋ＫＤａ，屬于小的單體蛋白，無需其他輔因其活性２８。它是高度保守型的，由４個(gè)平行的貝塔折疊和８個(gè)而且４個(gè)平行的貝塔折疊是由８阿爾法螺旋包圍著，其二級(jí)

著、春４逡逑＃＃逡逑ｗｕ？，／逡逑圖１．３邋ＵＤＧ作用于ＤＮＡ的示意圖３５＿３７。逡逑注：含脫氧尿苷的ＤＮＡ綁定到ＵＤＧ的被８個(gè)阿爾法螺旋包圍著的四條平行貝塔折疊逡逑的Ｃ－末端邊緣。脫氧尿苷核苷酸從堿基堆里翻轉(zhuǎn)過來進(jìn)入酶活性位點(diǎn)。逡逑３逡逑

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張蕊;李平利;陳克廣;劉煥君;郭曦;常萍;高海青;郭瑞臣;;基因多態(tài)性檢測(cè)在5-氟尿嘧啶治療胃癌患者中的應(yīng)用[J];中國臨床藥理學(xué)雜志;2016年24期

2 譚斌;;5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑術(shù)前短程沖擊化療大腸癌的效果觀察[J];中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育;2016年34期

3 楊睿;陳嬌;;氟尿嘧啶與紫杉醇聯(lián)合在治療晚期胃癌患者中的應(yīng)用[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2016年92期

4 施子夏;張兵兵;徐翔宇;;奈達(dá)鉑聯(lián)合氟尿嘧啶治療晚期食管癌的療效評(píng)價(jià)[J];中國藥業(yè);2017年07期

5 張錦;曹艷;習(xí)永霞;柯玉芳;魏峰;;喜遼妥聯(lián)合硫酸鎂防治氟尿嘧啶所致化療性靜脈炎的臨床觀察[J];吉林醫(yī)學(xué);2017年06期

6 方曉瑞;;奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶治療食道癌的臨床療效觀察[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2017年06期

7 袁航;任統(tǒng)偉;楊銀成;;奈達(dá)鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶治療晚期食管癌的臨床分析[J];黑龍江醫(yī)藥;2017年02期

8 陳娟;;5-氟尿嘧啶為主的化療對(duì)心臟毒性的影響分析[J];臨床合理用藥雜志;2017年26期

9 王橋;宋波;趙晶;陳靜;李佐強(qiáng);;注射用重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子治療5-氟尿嘧啶致口腔黏膜炎的臨床研究[J];中國臨床藥理學(xué)雜志;2017年18期

10 張可新;;奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶治療消化道癌的療效觀察[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2015年33期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉朝興;陳聰;周翔;;核酸中5醛基修飾尿嘧啶的富集與檢測(cè)[A];第十屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集（墻報(bào)）[C];2017年

2 劉愛國;魯令傳;趙國海;趙成功;王建國;張從雨;周宗和;李德群;王家米;楊榮強(qiáng);盧賢映;;緩釋氟尿嘧啶在進(jìn)展期胃癌術(shù)中腹腔內(nèi)植入臨床研究[A];第一屆中國腫瘤靶向治療技術(shù)大會(huì)論文集[C];2003年

3 張二變;郝玉萍;;氟尿嘧啶在兩種不同途徑化療中的臨床效果觀察[A];山西省抗癌協(xié)會(huì)第六屆腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2003年

4 張瓊瑤;趙月萍;葉勇;;磁性5-氟尿嘧啶核殼納米粒子的制備及其載藥、釋藥性能[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會(huì)第十一屆分析化學(xué)專業(yè)年會(huì)論文集[C];2007年

5 李振亞;鄭連義;;氟尿嘧啶微球的制備研究[A];第一屆全國化學(xué)工程與生物化工年會(huì)論文摘要集(下)[C];2004年

6 韓士田;劉彥欽;扈睛;;卟啉-5-氟尿嘧啶新化合物的合成[A];中國化學(xué)會(huì)第四屆有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集（上冊(cè)）[C];2005年

7 方英立;王秀問;;重視氟尿嘧啶導(dǎo)致的重度中樞神經(jīng)毒性[A];2014年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十四屆中國藥師周論文集[C];2014年

8 彭帆;王西明;段秋紅;陳蓓蓓;何善述;;褪黑素和5-氟尿嘧啶體內(nèi)協(xié)同抗小鼠荷瘤作用及其機(jī)制研究[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)第七屆第十四次學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2003年

9 高君偉;孫搏;郭彥琨;李曉宇;劉皋林;;二氫嘧啶脫氫酶基因多態(tài)性對(duì)氟尿嘧啶化療毒性的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)臨床藥學(xué)分會(huì)2014年全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

10 欽傳光;;半乳糖修飾5-氟尿嘧啶靶向抗腫瘤藥物的合成與活性研究[A];中國化學(xué)會(huì)全國第十一屆有機(jī)合成化學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2014年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 ;晚期胃癌化療 國內(nèi)方案少依據(jù)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

2 ;比5－氟尿嘧啶強(qiáng)400倍的抗癌藥物[N];健康報(bào);2005年

3 是明啟;抗癌之外展身手[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

4 孫華君;直腸癌患者術(shù)后5－氟尿嘧啶聯(lián)合化療再配合放療的Ⅲ期臨床試驗(yàn)效果觀察[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

5 記者　 張顯峰 陳磊;我科學(xué)家成功解析出H/ACA復(fù)合物完整結(jié)構(gòu)[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

6 ;在進(jìn)展期難治性結(jié)直腸癌患者中進(jìn)行貝伐單抗聯(lián)合5－氟尿嘧啶＋亞葉酸的Ⅱ期多中心臨床試驗(yàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

7 朱國旺;重視循證醫(yī)學(xué)關(guān)注靶向治療[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

8 ;對(duì)初發(fā)且未經(jīng)治療的轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌患者進(jìn)行減量5－氟尿嘧啶＋亞葉酸＋依立替康聯(lián)合治療方案或者注射5－氟尿嘧啶＋亞葉酸＋奧沙利鉑治療的隨機(jī)對(duì)照研究[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

9 小旋;多西他賽獲批治療SCCHN[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

10 中科;“順鉑+氟尿嘧啶”輔助化療未能帶來進(jìn)一步生存益處[N];中國醫(yī)藥報(bào);2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉朝興;核酸中5-醛基尿嘧啶的合成與檢測(cè)[D];武漢大學(xué);2018年

2 郭慶海;5-氟尿嘧啶食道支架的制備和體外研究[D];上海交通大學(xué);2007年

3 沈義峰;人結(jié)腸癌細(xì)胞經(jīng)5-氟尿嘧啶處理所產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄組與表觀遺傳組的動(dòng)態(tài)應(yīng)答及獲得性耐藥機(jī)制[D];福建醫(yī)科大學(xué);2017年

4 熊靜;5-氟尿嘧啶氨基酸類化合物的合成及抗癌活性[D];大連理工大學(xué);2009年

5 郝愛軍;5-氟尿嘧啶高分子前體藥物及脂質(zhì)體的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2005年

6 李廣振;硫氧還蛋白1抑制劑PX-12抑制肝癌細(xì)胞生長并增強(qiáng)其對(duì)5-氟尿嘧啶的化療敏感性[D];華中科技大學(xué);2016年

7 王晶;吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的合成及其吸干乳劑的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2007年

8 胡詠梅;生物可降解聚氨酯/5-氟尿嘧啶控釋載藥體系研究[D];燕山大學(xué);2014年

9 印安寧;FADD真核表達(dá)載體聯(lián)合5-氟尿嘧啶抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞作用及機(jī)制探討[D];武漢大學(xué);2010年

10 楊鴿;抗氧化劑調(diào)控Src激酶活性減弱5-氟尿嘧啶誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫巖;硫酸羥氯喹在氟尿嘧啶誘導(dǎo)的胃腸炎模型中的治療作用及分子機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

2 孔晶晶;尿嘧啶及去甲斑蝥素的氟烷基化反應(yīng)研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2018年

3 張冬霞;5-氟尿嘧啶對(duì)大鼠心肌線粒體的損傷作用及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2018年

4 楊流;分子動(dòng)力學(xué)模擬研究大腸桿菌尿嘧啶轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白UraA的構(gòu)象變化[D];吉林大學(xué);2018年

5 張?zhí)O蘋;基于堿基切除修復(fù)的熒光生物傳感策略用于尿嘧啶-DNA糖基化酶活性檢測(cè)[D];山東大學(xué);2018年

6 王瑤;載有紫杉醇及5-氟尿嘧啶的多藥載藥系統(tǒng)的研制[D];吉林大學(xué);2018年

7 唐佳文;5-氟尿嘧啶口服結(jié)腸癌定位靶向微球的研究[D];延邊大學(xué);2013年

8 吳芳園;山莨菪堿對(duì)5-氟尿嘧啶致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2017年

9 張馨予;氧氣為唯一氧化劑的Pd催化咖啡因或尿嘧啶C-H鍵脫氫偶聯(lián)反應(yīng)[D];福建師范大學(xué);2017年

10 王利;氟尿嘧啶注射液及氟尿嘧啶植入劑對(duì)食管癌細(xì)胞的抑制效果和臨床應(yīng)用研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2725516