【摘要】：采用靶向親和-液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(Target molecule affinity-LC-ESI-MS~n)快速篩選黃藤總生物堿中能夠抑制乙酰膽堿酯酶活性的成分,共篩選出12種具有潛在抑制乙酰膽堿酯酶的活性成分,并鑒定了6種成分,分別為黃藤素(Palmatine)、小檗堿(Berberine)、藥根堿(Jatrorrhizine)、巴馬汀紅堿(Palmatrubine)、7,8-二氫-8-羥基小檗堿(7,8-Dihydro-8-hydroxyberberine)、Groenlandicine,結(jié)合體外酶學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)這6種化合物進(jìn)行了活性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,黃藤素抑制活性最強(qiáng),其抑制作用強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸多奈哌齊,說(shuō)明黃藤素具有開(kāi)發(fā)成抗阿爾茨海默癥藥物的潛力。本方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確地從復(fù)雜的中藥提取物中篩選出具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的成分,適用于復(fù)雜體系中的高通量篩選。
【圖文】：

6002t（min）mAU4002000０４６８１０１２E20t（min）mAU０406080１０0１40D１201211109876453120t（min）mAU０406080１０0１40C１20t（min）20mAU０406080１０0１40A１2012111098764532t（min）20mAU0０406080１０0１40B１2012111098765431221543210108642122.01.51.00.50.01086420圖1不同靶向親和作用體系的高效液相色譜圖。(A)黃藤總生物堿與乙酰膽堿酯酶(AChE)相互作用體系;(B)黃藤總生物堿原液;(C)未加AChE的空白對(duì)照;(D)黃藤總生物堿與等量的滅活A(yù)ChE相互作用體系;(E)鹽酸多奈哌齊與AChE相互作用體系。Fig．1HPLCchromatogramsof(A)ultrafiltrationHPLCscreeningoftotalalkaloidsforbindingtoAChE，(B)totalalkaloidsstocksolution，(C)controlassayoftotalalkaloidswithnoAChE，(D)ultrafiltrationHPLCscreeningoftotalalkaloidsforbindingtodenaturedAChEand(E)ultrafiltrationHPLCscreeningofdonepezilhydrochlorideforbindingtoAChE3．3活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)黃藤總生物堿和其中能夠獲得的單體化合物黃藤素、藥根堿和小檗堿等進(jìn)行了體外酶活性抑制實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，，陽(yáng)性藥鹽酸多奈哌齊在0．25mg/mL時(shí)對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率為65．86%，IC50為(90．7±0．003)$g/mL;而黃藤總生物堿在同樣濃度下的抑制率為89．12%，IC50為(6．2±0．035)$g/mL;各單體化合物中黃藤素的抑制活性最強(qiáng)，0．25mg/mL時(shí)抑制率為92．25%，其抑制率呈現(xiàn)出黃藤素＞黃藤總生物堿＞巴馬汀紅堿＞藥根堿＞鹽酸多奈哌齊＞小檗堿＞7，8-二氫-8-羥基小檗堿＞Groenlandicine，表明黃藤素具

6002t（min）mAU4002000０４６８１０１２E20t（min）mAU０406080１０0１40D１201211109876453120t（min）mAU０406080１０0１40C１20t（min）20mAU０406080１０0１40A１2012111098764532t（min）20mAU0０406080１０0１40B１2012111098765431221543210108642122.01.51.00.50.01086420圖1不同靶向親和作用體系的高效液相色譜圖。(A)黃藤總生物堿與乙酰膽堿酯酶(AChE)相互作用體系;(B)黃藤總生物堿原液;(C)未加AChE的空白對(duì)照;(D)黃藤總生物堿與等量的滅活A(yù)ChE相互作用體系;(E)鹽酸多奈哌齊與AChE相互作用體系。Fig．1HPLCchromatogramsof(A)ultrafiltrationHPLCscreeningoftotalalkaloidsforbindingtoAChE，(B)totalalkaloidsstocksolution，(C)controlassayoftotalalkaloidswithnoAChE，(D)ultrafiltrationHPLCscreeningoftotalalkaloidsforbindingtodenaturedAChEand(E)ultrafiltrationHPLCscreeningofdonepezilhydrochlorideforbindingtoAChE3．3活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)黃藤總生物堿和其中能夠獲得的單體化合物黃藤素、藥根堿和小檗堿等進(jìn)行了體外酶活性抑制實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，陽(yáng)性藥鹽酸多奈哌齊在0．25mg/mL時(shí)對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率為65．86%，IC50為(90．7±0．003)$g/mL;而黃藤總生物堿在同樣濃度下的抑制率為89．12%，IC50為(6．2±0．035)$g/mL;各單體化合物中黃藤素的抑制活性最強(qiáng)，0．25mg/mL時(shí)抑制率為92．25%，其抑制率呈現(xiàn)出黃藤素＞黃藤總生物堿＞巴馬汀紅堿＞藥根堿＞鹽酸多奈哌齊＞小檗堿＞7，8-二氫-8-羥基小檗堿＞Groenlandicine，表明黃藤素具

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