【摘要】：土霉素,屬廣譜抗生素四環(huán)族,目前已廣泛應(yīng)用于種植業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)。人體因攝取殘留抗生素的食物而產(chǎn)生的抗藥性問題,越來越引起人們的重視。目前針對抗生素的檢測方法大多需要復(fù)雜的儀器,繁瑣的前處理,或者較長的周期等;并且存在靈敏度和可靠性不能兩者得而兼之的情況。因此,研究和建立一種操作簡易,快速可靠的土霉素檢測新方法具有重要意義。表面增強拉曼光譜(SERS)具有指紋識別和快速靈敏等優(yōu)勢,使其在疾病診斷、食品檢測、環(huán)境檢測等方面應(yīng)用廣泛。本研究在納米金具有拉曼增強效應(yīng)的基礎(chǔ)上,通過納米自組裝,以進(jìn)行拉曼檢測,成功構(gòu)建了具有良好特異性和超高靈敏度的土霉素SERS檢測方法,為抗生素的超靈敏檢測提供了一定借鑒。主要研究工作包括:首先,構(gòu)建了基于液相的金納米顆粒自組裝土霉素SERS檢測方法。本實驗采用包含土霉素適配體及其互補序列的莖環(huán)結(jié)構(gòu)單鏈DNA,以實現(xiàn)對土霉素的識別以及拉曼熱點的變化。首先將80 nm金顆粒通過DNA序列與20 nm金顆粒偶聯(lián),拉曼分子4-巰基苯甲酸(4-MBA)修飾在20 nm金顆粒的表面,形成拉曼熱點。在最優(yōu)條件下,土霉素濃度在4.96×10-2-4.96×102 fg/mL時,4-MBA在1094 cm-1處的拉曼強度增加值與土霉素濃度的對數(shù)值之間存在良好的線性關(guān)系(y=1948.97+148.52x,R2=0.9979),檢測限為4.35×10-3 fg/mL。選擇金霉素、多西環(huán)素、美他環(huán)素和米諾環(huán)素對土霉素進(jìn)行特異性試驗,結(jié)果顯示此方法特異性較好;以牛奶為樣品進(jìn)行加標(biāo)回收實驗,回收率為85.08-93.80%,結(jié)果表明可用于牛奶中土霉素的檢測。其次,構(gòu)建了基于銀膜的納米顆粒自組裝土霉素SERS檢測方法。本實驗將修飾4-MBA的20 nm金顆粒通過DNA組裝到納米銀膜上,對土霉素進(jìn)行SERS檢測。最優(yōu)條件下,土霉素的濃度在4.96×10-3-49.65 fg/mL時,1094 cm-1處拉曼強度的增加值與土霉素濃度的對數(shù)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(y=27747.68+10535.74x,R2=0.9912),檢測限為2.03×10-3 fg/mL。通過特異性試驗顯示,該方法的特異性較為顯著;加標(biāo)回收實驗表明,此檢測方法可以用來檢測實際樣品。再次,構(gòu)建了基于超濾膜的納米金顆粒自組裝同時檢測四環(huán)素和土霉素SERS方法。本實驗利用兩種DNA序列和兩種拉曼分子(4-MBA和二硫代二硝基苯甲酸即DTNB)進(jìn)行自組裝,獲得兩種拉曼襯底,將其混合后經(jīng)過超濾膜,制備了可以同時檢測四環(huán)素和土霉素的SERS襯底。在最優(yōu)條件下,四環(huán)素濃度在0.48-4.81×103 fg/mL時,1094cm-1(4-MBA)處的峰強度增加值與四環(huán)素濃度的對數(shù)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(y=996.07x+5861.01,R2=0.9963),檢測限為2.14×10-1 fg/mL;土霉素的濃度在0.49-4.96×103 fg/mL時,1330 cm-1(DTNB)處的峰強度增加值與土霉素濃度的對數(shù)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(y=1316.85x+7386.72,R2=0.9918),檢測限為0.17 fg/mL。特異性試驗和加標(biāo)回收實驗結(jié)果表明,此檢測方法特異性良好,并能檢測實際樣品。
【圖文】：

圖 1-1 土霉素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig. 1-1 The structural formula of oxytetracycline現(xiàn)土霉素之后，由于療效好、成本低、毒性小，土牧業(yè)等。土霉素作為動物飼料添加劑，被廣泛地應(yīng)和家禽的飼養(yǎng)方面，同時也用于動物傳染性疾病(療[3]。據(jù)報道，土霉素是農(nóng)業(yè)上最早大面積應(yīng)用的抗胡桃等細(xì)菌性病害療效顯著[4]。除了在動物養(yǎng)殖和應(yīng)用在食品保藏上，特別是肉類食品的保藏上，是的資料，全球有 1/3 的患者死于用藥不當(dāng)，，全球有其中主要包括畜用抗生素的不合理使用。根據(jù)美國用于農(nóng)牧業(yè)方面的抗生素約是治療人群感染量的十用的抗生素約為 9.7 萬噸，占每年抗生素使用總量10%為畜牧疾病治療[7]。據(jù) Ying 等人[8]報道，2013雖僅占 1.47%，在中國是抗生素生產(chǎn)和消耗大國的

亞胺、氯金酸(HAuCl4·3 H2O)、硝酸銀(AgNO3)、抗壞血酸(L-A化鈉(NaBH4)、氟化銨(NH4F)、三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)、甲醇酸、鹽酸、巰基苯甲酸(4-MBA)、二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)、環(huán)素、美他環(huán)素和米諾環(huán)素等化學(xué)試劑均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試AA，相對分子質(zhì)量 2000)，購自上海晶純生化科技股份有限公司10 μm，電阻率小于 0.001 Ω·cm)，購自浙江立晶科技公司；超濾)購自 Merck Millipore 公司；親和素, 三(2-羧乙基)膦, 1-(3-二甲胺鹽酸鹽(EDC·HCl)購自西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司；牛奶樣祁橋店；以上試劑均為分析純，實驗所用水為超純水。素適配體[106-107]的 DNA 序列(二級結(jié)構(gòu)見圖 2-1 a)為：C GCA CCA CCG TCA TGA GTG CGA ACT TAC GCA CTGT CGC TGG TGC GTA CCT GGT TGC CGT TGT GT -3′素適配體的[107-108]DNA 序列(二級結(jié)構(gòu)見圖 2-1 b)為：C GCA CCA CCG TCA TGA GTG CGA ACT TAC GCA CTGG TGG TG -3′部分為檢測物適配體序列，以上序列均由生工生物工程（上海）有
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：O657.37;TS207.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2587179