發(fā)布時間：2017-03-20 17:08

  本文關(guān)鍵詞：磁性殼聚糖微球的制備及其分離降血壓肽的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：長蛇鯔是我國主要經(jīng)濟(jì)魚類之一,年產(chǎn)量大,其魚肉蛋白質(zhì)酶解后可得到體外對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)具有抑制作用的降血壓多肽,然而從酶解液中分離純化降血壓多肽是一個復(fù)雜繁瑣的過程。本文以生物相容性良好的磁性殼聚糖微球作為固定化載體,偶聯(lián)固定化豬肺粗提ACE作為親和配基,對長蛇鯔酶解液中降血壓肽組分進(jìn)行分離純化,為降血壓肽分離純化技術(shù)提供一定的技術(shù)支持和理論基礎(chǔ)。 采用乳化交聯(lián)法制備了磁性殼聚糖微球,并確定最優(yōu)制備工藝條件為：醋酸溶液濃度為3%,殼聚糖溶液濃度為10mg·mL-1,水油相之比為1：6,攪拌速率為800rpm。對磁性微球進(jìn)行性質(zhì)表征可知,微球平均粒徑為901nm,粒徑均一,并包裹了Fe304磁性納米粒子, Fe304含量約為28%,呈超順磁性,磁響應(yīng)性良好,可快速分離和富集。 采用環(huán)氧氯丙烷對磁性殼聚糖微球進(jìn)行環(huán)氧基修飾活化,并確定最優(yōu)活化條件為：NaOH溶液濃度為0.9mol·L-1,環(huán)氧氯丙烷體積分?jǐn)?shù)為40%,NaBH4濃度為0.5g·L-1,反應(yīng)溫度為40℃,反應(yīng)時間為4h。此時,微球表面環(huán)氧基密度可達(dá)159.23μmol·g-1,活化后的微球可應(yīng)用于酶的固定化。 以環(huán)氧基活化的磁性殼聚糖微球?yàn)楣潭ɑd體,對豬肺粗提血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)進(jìn)行固定化,并確定固定化最優(yōu)工藝條件為：pH為8.3,反應(yīng)溫度為50℃,反應(yīng)時間為1.5h,酶液蛋白濃度為6mg·mL-1最優(yōu)條件下,固定化酶活力為0.048U·g-1。與游離酶相比,固定化酶pH穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性均得到了提高,具有較好的重復(fù)操作穩(wěn)定性和儲藏穩(wěn)定性。 以固定化ACE的磁性殼聚糖微球?yàn)橛H和載體,對長蛇鯔酶解液中降血壓多肽組分進(jìn)行一步親和吸附實(shí)驗(yàn)。研究結(jié)果表明,經(jīng)親和吸附后,酶解液ACE抑制率從71.50%提高到了82.06%。采用高效液相色譜對吸附前后酶液進(jìn)行分析,色譜結(jié)果跟ACE抑制活性檢測結(jié)果吻合,表明磁性殼聚糖親和載體可應(yīng)用于長蛇鯔中降血壓多肽的快速分離純化。
【關(guān)鍵詞】：磁性 殼聚糖 復(fù)合微球 降血壓肽 親和吸附
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：O636.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 符號說明11-12
• 第一章 緒論12-23
• 1.1 磁性高分子微球12-14
• 1.1.1 磁性高分子微球簡介12
• 1.1.2 磁性高分子微球組成與結(jié)構(gòu)12-13
• 1.1.3 磁性高分子微球的特性13-14
• 1.2 殼聚糖14-15
• 1.3 磁性殼聚糖微球15-20
• 1.3.1 磁性納米材料的制備方法15-16
• 1.3.2 磁性殼聚糖微球的制備方法16-18
• 1.3.3 磁性殼聚糖微球的應(yīng)用18-20
• 1.4 降血壓肽20-21
• 1.4.1 降血壓肽概述20-21
• 1.4.2 降血壓肽的分離純化21
• 1.5 論文選題意義和主要研究內(nèi)容21-23
• 第二章 磁性殼聚糖微球的制備及表征23-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器23-24
• 2.1.1 材料與試劑23
• 2.1.2 儀器與設(shè)備23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-25
• 2.2.1 改性磁流體的制備24
• 2.2.2 磁性殼聚糖微球的制備24
• 2.2.3 磁性殼聚糖微球的表征方法24-25
• 2.3 結(jié)果與討論25-31
• 2.3.1 磁性殼聚糖微球制備工藝條件優(yōu)化25-28
• 2.3.2 磁性殼聚糖微球的表征28-31
• 2.4 本章小結(jié)31-32
• 第三章 磁性殼聚糖微球活化工藝研究32-39
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器32-33
• 3.1.1 材料與試劑32
• 3.1.2 儀器與設(shè)備32-33
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法33-34
• 3.2.1 磁性殼聚糖微球的活化33
• 3.2.2 磁性殼聚糖微球環(huán)氧基修飾密度的分析33-34
• 3.3 結(jié)果與討論34-37
• 3.3.1 NaOH溶液濃度對微球環(huán)氧基活化密度的影響34
• 3.3.2 環(huán)氧氯丙烷體積分?jǐn)?shù)對微球環(huán)氧基活化密度的影響34-35
• 3.3.3 NaBH_4濃度對微球環(huán)氧基活化密度的影響35-36
• 3.3.4 反應(yīng)溫度對微球環(huán)氧基活化密度的影響36-37
• 3.3.5 反應(yīng)時間對微球環(huán)氧基活化密度的影響37
• 3.4 本章小結(jié)37-39
• 第四章 磁性殼聚糖微球固定化血管緊張素轉(zhuǎn)化酶工藝優(yōu)化39-48
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器39-40
• 4.1.1 材料與試劑39
• 4.1.2 儀器與設(shè)備39-40
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法40-41
• 4.2.1 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的提取40
• 4.2.2 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的固定化40
• 4.2.3 蛋白質(zhì)含量的測定40-41
• 4.2.4 ACE活性檢測方法41
• 4.3 結(jié)果與討論41-47
• 4.3.1 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線41-42
• 4.3.2 馬尿酸標(biāo)準(zhǔn)曲線42
• 4.3.3 磁性殼聚糖微球固定化ACE工藝條件研究42-45
• 4.3.4 固定血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的酶學(xué)性質(zhì)45-47
• 4.4 本章小結(jié)47-48
• 第五章 磁性殼聚糖親和微球分離降血壓肽的工藝研究48-54
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器48-49
• 5.1.1 材料與試劑48
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器48-49
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法49-51
• 5.2.1 親和微球分離純化ACEI組分49-50
• 5.2.2 蛋白質(zhì)含量測定50
• 5.2.3 ACE抑制活性檢測50
• 5.2.4 液相色譜條件50-51
• 5.3 結(jié)果與討論51-53
• 5.3.1 吸附時間對蛋白吸附量的影響51
• 5.3.2 ACE抑制活性分析51-52
• 5.3.3 親和吸附組分液相色譜分析52-53
• 5.4 本章小結(jié)53-54
• 第六章 結(jié)論與展望54-56
• 6.1 主要結(jié)論54-55
• 6.2 展望55-56
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 致謝63-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64

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