【摘要】：類(lèi)胡蘿卜素(Carotenoid)是一類(lèi)普遍存在于植物、動(dòng)物和微生物中的色素,具有抗氧化、抗炎、抗糖尿病、抗癌、預(yù)防心血管疾病和提高免疫力等生物活性,在食品、藥品和化妝品等行業(yè)有著廣泛的應(yīng)用。本論文以高產(chǎn)類(lèi)胡蘿卜素的法夫酵母(Phaffia rhodozyma簡(jiǎn)寫(xiě)P.rhodozyma)為原料,優(yōu)化其類(lèi)胡蘿卜素的提取條件,并研究類(lèi)胡蘿卜素提取物(Carotenoid crude extract,簡(jiǎn)稱CCE)對(duì)老齡小鼠抗氧化作用以及對(duì)大鼠抗化學(xué)肝損傷輔助保護(hù)作用;優(yōu)化高速逆流色譜(HSCCC)分離類(lèi)胡蘿卜素的條件,進(jìn)一步結(jié)合柱層析、HPLC、質(zhì)譜和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)類(lèi)胡蘿卜素進(jìn)行分離純化和鑒定;并研究蝦青素(Astaxanthin)對(duì)胰脂肪酶(Pancreatic lipase,簡(jiǎn)稱PL)的抑制作用機(jī)理。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)通過(guò)單因素及正交實(shí)驗(yàn),得到P.rhodozyma中類(lèi)胡蘿卜素的最佳提取條件為:以丙酮為提取溶劑,破壁溫度30 oC,乳酸用量1:20,料液比1:20,浸提時(shí)間5 min。(2)采用優(yōu)化的HSCCC條件:溶劑體系為正己烷-丙酮-乙醇-水(1.2:1:1:0.8,v/v/v/v),檢測(cè)波長(zhǎng)474 nm,流速3 mL/min,溫度25 o C,轉(zhuǎn)速850 rpm,上樣濃度20 mg/m L,上樣量10 mL,并進(jìn)一步通過(guò)柱層析分離,從P.rhodozyma中得到5個(gè)樣品。結(jié)合HPLC、質(zhì)譜和標(biāo)準(zhǔn)品確定其中3個(gè)樣品分別為β-胡蘿卜素、海膽酮和蝦青素。(3)通過(guò)給老齡小鼠灌胃CCE后,發(fā)現(xiàn)CCE的低、中和高劑量組均能顯著降低血清中MDA、蛋白質(zhì)羰基含量以及GSH的活性,并能提高SOD活力,說(shuō)明CCE對(duì)老齡小鼠有抗氧化作用。(4)通過(guò)建立四氯化碳肝損傷模型研究CCE對(duì)大鼠化學(xué)性肝損傷輔助保護(hù)作用。發(fā)現(xiàn)模型對(duì)照組血清中ALT、AST顯著升高,CCE的高劑量組動(dòng)物血清中ALT相比模型對(duì)照組出現(xiàn)了降低,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)不同劑量的CCE對(duì)大鼠肝臟具有一定程度的保護(hù)作用,說(shuō)明CCE對(duì)大鼠的化學(xué)性肝損傷具有輔助保護(hù)作用。(5)采用酶動(dòng)力學(xué)、圓二色譜、熒光光譜以及分子對(duì)接等方法研究蝦青素對(duì)PL的抑制作用及其作用機(jī)理。發(fā)現(xiàn)蝦青素對(duì)PL具有較強(qiáng)的抑制作用,其IC50值為38.2μg/mL,其抑制類(lèi)型為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制類(lèi)型。蝦青素與PL相互作用時(shí),使PLα-螺旋含量降低,β-轉(zhuǎn)角含量增加。增大蝦青素濃度能使PL最大波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度降低,但PL最大發(fā)射波長(zhǎng)沒(méi)有發(fā)生改變,表明蝦青素對(duì)PL的色氨酸熒光產(chǎn)生了熒光淬滅,并未改變PL色氨酸殘基所處的環(huán)境。分子對(duì)接證明蝦青素在催化位點(diǎn)以上與PL結(jié)合,堵住了底物進(jìn)入催化活性中心的通道,導(dǎo)致p-NPB不能進(jìn)入酶的催化活性中心,以及生成的產(chǎn)物不能從酶中釋放,從而使PL的催化活性降低。本論文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為P.rhodozyma不同類(lèi)胡蘿卜素的分離制備及其生物活性的研究提供了理論依據(jù)和技術(shù)支持。
【圖文】：

圖 1-1 幾種類(lèi)胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)Fig. 1-1 Molecular structures of the carotenoids studied in this experiment: lycopene, β-carotene, lutein,canthaxanthin, zeaxanthin and astaxanthin圖 1-2 蝦青素的結(jié)構(gòu)Fig.1-2 The structrue of astaxanthin蝦青素分子結(jié)構(gòu)中有 C-3 和 C-3’位兩個(gè)手性中心，，這兩個(gè)手性中心可以以左旋（R）和右旋（S）兩種形式存在，所以蝦青素分子結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，存在（3S, 3′S），（3S, 3′R）和（3R, 3′R）3 種立體異構(gòu)體，分別稱為左旋、內(nèi)消旋和右旋[11]（如圖 1-3 所示），在自然界

美大學(xué)碩士學(xué)位論文 法夫酵母類(lèi)胡蘿卜素的提取純化及生物活性研見(jiàn)光吸收，使蝦青素呈現(xiàn)紫紅色，因而蝦青素結(jié)晶粉末及其溶液呈現(xiàn)鮮艷的紫紅色[1圖 1-1 幾種類(lèi)胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)Fig. 1-1 Molecular structures of the carotenoids studied in this experiment: lycopene, β-carotene, lutcanthaxanthin, zeaxanthin and astaxanthin
【學(xué)位授予單位】：集美大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：O629.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2574425