【摘要】：為了提高漆酶的穩(wěn)定性,研究了甘油、肌醇和山梨醇3種添加劑對漆酶酸堿穩(wěn)定性的影響,并通過紫外光譜、熒光光譜和圓二色譜分析了添加劑對漆酶的保護機理。研究表明,添加劑對漆酶的保護效果與添加劑的種類和濃度有關。在p H 3的緩沖液中,當肌醇的濃度為0.2 mol/L時漆酶的相對酶活達到最大值(125%),當甘油或山梨醇濃度增加時,漆酶的相對酶活逐漸增大;當添加的濃度相同時,甘油對漆酶的保護效果強于山梨醇,當添加的濃度為0.6 mol/L時,甘油使漆酶相對酶活提高了29%,山梨醇使漆酶相對酶活提高了15%。漆酶適宜的p H值范圍為2~5,加入添加劑后提高了漆酶的酸堿穩(wěn)定性。通過光譜分析可知,通過與漆酶分子間形成氫鍵,甘油、肌醇和山梨醇可以提高漆酶在溶液中的酸堿穩(wěn)定性。
【圖文】：

研究報告2017年第43卷第12期(總第360期)21啟動反應，測定3min內在420nm處反應液的吸光度值的變化，以每分鐘轉化1μmol底物定義為1個酶活力單位(U)。2結果與分析2.1不同濃度的添加劑對漆酶酶活的影響為了便于研究添加劑對漆酶酸堿穩(wěn)定性的影響，首先考察添加劑濃度對漆酶酶活的影響，確定添加劑的適宜濃度。在pH3的漆酶溶液中加入不同濃度的添加劑，測定其酶活并與未加添加劑的漆酶溶液比較，計算漆酶的相對酶活。從圖1可知，隨著肌醇濃度的增加，漆酶的相對酶活先增大后減校當肌醇的濃度達到0.2mol/L時，，漆酶的相對酶活達到最大，故肌醇的適宜濃度為0.2mol/L。加入過量的肌醇，漆酶的活性反而降低，這可能是由于過量的肌醇會阻礙漆酶與ABTS結合，進而使酶活性降低。劉彩琴［9］等人的研究結果也表明加入過多的添加劑會使酶活性下降。添加甘油和山梨醇的相對酶活曲線較為相似，都是隨著濃度的上升，漆酶的相對酶活逐漸增大，當添加的濃度相同時加入甘油后漆酶的相對酶活大于加入山梨醇，說明甘油的效果強于山梨醇。當甘油或山梨醇的添加量達到0.6mol/L時，加入甘油時漆酶相對酶活提高了29%，加入山梨醇后提高了15%。在考察的濃度范圍內由于甘油和山梨醇的相對酶活曲線沒有出現極值，因此我們以0.6mol/L作為甘油和山梨醇的適宜濃度，考察其對漆酶的保護效果。從圖1我們還可看出，添加劑對漆酶的保護效果與添加劑的類型和濃度有關，因此選擇合適的添加劑及其適宜的濃度對其在實際中的應用具有十分重要的意義。圖1加入添加劑后漆酶的相對酶活Fig．1Therelativeenzymeactivityoflaccaseafteraddingadditives2.2添加劑對漆酶的酸堿穩(wěn)定性的影響從圖2可知，隨著溶液pH值的升高，漆酶的相對酶活先增大后減小，在溶液pH3

奶砑恿看?到0.6mol/L時，加入甘油時漆酶相對酶活提高了29%，加入山梨醇后提高了15%。在考察的濃度范圍內由于甘油和山梨醇的相對酶活曲線沒有出現極值，因此我們以0.6mol/L作為甘油和山梨醇的適宜濃度，考察其對漆酶的保護效果。從圖1我們還可看出，添加劑對漆酶的保護效果與添加劑的類型和濃度有關，因此選擇合適的添加劑及其適宜的濃度對其在實際中的應用具有十分重要的意義。圖1加入添加劑后漆酶的相對酶活Fig．1Therelativeenzymeactivityoflaccaseafteraddingadditives2.2添加劑對漆酶的酸堿穩(wěn)定性的影響從圖2可知，隨著溶液pH值的升高，漆酶的相對酶活先增大后減小，在溶液pH3時漆酶的相對酶活達到最大值。漆酶的相對酶活在緩沖液pH2～5時都維持在了100%以上，可以看出其適宜的pH值范圍應該在pH2～5。當溶液為pH2～3時，加入甘油對漆酶的保護效果要好于山梨醇或肌醇，而在pH4的溶液中加入山梨醇后漆酶的相對酶活高于甘油或肌醇�？偟膩碚f甘油的保護效果要好于山梨醇和肌醇，在pH2和3的溶液中能使漆酶的相對酶活分別提高53%和120%。當溶液pH＞5時漆酶的酶活下降較快，加入添加劑對漆酶的保護效果不明顯。在pH6的漆酶溶液中，加入添加劑后漆酶的相對酶活提高了不到10%。添加劑對漆酶的保護效果與漆酶的適宜pH值范圍有關，當溶液pH值超過其適宜范圍時，添加劑對漆酶的保護效果下降。從圖2不難看出，添加劑可以提高漆酶在不同pH值溶液中的相對酶活，添加劑增強了漆酶的酸堿穩(wěn)定性。圖2加入添加劑后漆酶在不同pH溶液中的酶活Fig．2EnzymeactivityoflaccaseafteraddingadditivesindifferentpHsolutions2.3添加劑對漆酶的保護機理2.3.1漆酶的紫外光譜分析蛋白質的紫外光譜有190～220nm和250～300nm兩個吸收峰區(qū)［10

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