本文關鍵詞：色譜質譜技術在化學藥物雜質研究中的應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：《化學藥物雜質研究的技術指導原則》中規(guī)定：任何影響藥物純度的物質統(tǒng)稱為雜質。雜質的研究是藥品開發(fā)的一項重要內容，雜質是否能被全面準確地加以控制，直接關系到藥品的質量可控性與安全性。所以在藥物的研究、生產(chǎn)、供應和臨床使用等方面，必須保證藥物的純度。規(guī)范地進行雜質的研究，并將其控制在一個安全、合理的限度范圍之內，，才能保證藥物的有效和安全。 近年來，隨著各類藥害事件發(fā)生頻率的提高及國人對食品、藥品安全性的關注程度的提高，CFDA對藥物臨床前研究中的雜質相關分析越來越重視，對雜質研究的要求已被提到一個空前的高度。雜質研究是否全面，準確已逐漸成為藥物臨床前申報是否成功的瓶頸之一。但與雜質研究的標準日益提高嚴重不適應的是目前研究的技術手段過于單一，過于陳舊。在傳統(tǒng)的藥物質量控制研究過程中，雜質分析主要以色譜方法為主，大多數(shù)搭配單一檢測器，這就給藥物的雜質研究帶來以下幾個問題： 第一、單一檢測器難以對不同物化特性的雜質進行全面檢測，容易造成雜質的遺漏。 第二、色譜方法只能對能夠獲取對照品的雜質進行鑒別，檢測靈敏度及檢測信息的局限性導致其在發(fā)現(xiàn)及鑒別痕量雜質及未知雜質方面存在困難。 第三、色譜方法在檢測限及線性范圍方面的局限性導致其在低豐度雜質的定量檢測方面亦存在困難。 本研究針對目前化學藥物雜質研究中存在的問題，將不同種類的色譜-質譜技術引入其中，遵循從簡單到復雜，從個體到系統(tǒng)的原則，探索使用色譜-質譜技術對化學藥物臨床前研究中的雜質分析相關問題進行探討，從實際案例中總結色譜-質譜技術在藥物雜質的定性、定量分析中的可行性及方法、策略。 文章共分為以下幾部分： 1.超高效液相色譜-四極桿飛行時間質譜聯(lián)用技術在藥物雜質定性鑒別中的應用 應用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質譜對兩種藥物鹽酸環(huán)噴托酯滴眼液和原料藥三羥芐基芐絲肼中的雜質進行結構分析。實驗發(fā)現(xiàn)，鹽酸環(huán)噴托酯滴眼液在氧化條件下易產(chǎn)生一個雜質，該雜質保留時間在主成分之后。通過一級質譜、二級質譜以及主成分的裂解規(guī)律確定了該雜質的結構。對三羥芐基芐絲肼進行了進行了結構確認，通過液相質譜分離發(fā)現(xiàn)了4個雜質，利用UHPLC-Q-TOF/MS中提供的準確的分子量進行了分子式篩選，通過二級質譜的數(shù)據(jù)對4個雜質的結構進行了確認，并確定了其裂解規(guī)律。 實驗表明，UHPLC-Q-TOF/MS在在線分析藥物痕量雜質結構中具有方便、快捷的優(yōu)勢，可以大大提高了實驗的效率。 2.鹽酸普拉格雷片的雜質分析 本章首先結合四大光譜（NMR，UV，IR，MS）對三類仿制藥鹽酸普拉格雷片劑中3個雜質的對照品進行了結構分析，供后續(xù)研究使用。通過核磁分析對物質中的信號峰進行了歸屬，推斷出了其具體結構，質譜分析對得到的結構進行了分子量及分子式的確認，紅外光譜對3中物質中的官能團進行了分析，紫外光譜儀確定了3個標準品的最大吸收波長。然后利用UHPLC-Q-TOF/MS對鹽酸普拉格雷片中的降解雜質進行分析。將鹽酸普拉格雷原料藥和制劑于一定的降解條件下（酸、堿、氧化、高溫、光照）放置一定時間后進行分離分析。在空白對照樣品中共發(fā)現(xiàn)了6個工業(yè)雜質，在進行降解的樣品中共找到了13個降解雜質。最終結合質譜數(shù)據(jù)、文獻調研以及藥物的合成路線確定了各雜質的結構以及相應的裂解規(guī)律。文章闡明了鹽酸普拉格雷片中潛在的降解雜質的來源及降解規(guī)律，可為藥品生產(chǎn)過程提供了一定的參考和借鑒。 3.鹽酸美金剛片的降解實驗研究 本章首先利用氣相色譜方法對仿制藥品鹽酸美金剛片中的有關物質進行定量方法開發(fā)，在方法專屬性檢查中發(fā)現(xiàn)降解實驗中存在著嚴重的物料不守恒現(xiàn)象，即雜質的上升量遠遠小于主成分的下降量，經(jīng)過條件優(yōu)化不能得到改善，說明原方法對鹽酸美金剛片有關物質的檢查存在著一定的不足。利用UHPLC-Q-TOF/MS對降解樣品進行檢測并發(fā)現(xiàn)了新的雜質，初步解釋了氣相色譜中的不守恒現(xiàn)象。深入研究后，結果發(fā)現(xiàn)，在酸、堿、高溫、氧化破壞中基本上可以達到物料守恒的要求，光照破壞中主成分的下降率和雜質的上升率均不明顯，說明樣品在光照下是穩(wěn)定的。最后對在液相色譜-質譜中發(fā)現(xiàn)的降解雜質進行研究，確定了7個雜質的結構。本實驗同時也說明了在實驗過程中多種方法結合的必要性，實驗結合多種分析儀器對鹽酸美金剛片進行研究，為該藥物質量控制方法的完善提供了依據(jù)。 4.鹽酸美金剛片中雜質的限量檢查 繼前一章對鹽酸美金剛片的定性分析后，本章將對其可能存在的重要的雜質進行限量分析，其中包括三個工藝雜質（1,3-二甲基金剛烷、3,5-二甲基-1-金剛烷醇、1-溴-3,5-二甲基金剛烷）和2個降解雜質（甲酰基美金剛胺、美金剛-乳糖結合物）。其中1,3-二甲基金剛烷、3,5-二甲基-1-金剛烷醇、1-溴-3,5-二甲基金剛烷、甲酰基美金剛胺為小分子化合物，利用氣相色譜法進行研究；美金剛-乳糖結合物為大分子化合物，且沒有紫外吸收的官能團，故利用HPLC-ELSD進行研究。結果表明，兩種方法的靈敏度可達到要求，且5個物質的線性關系良好，儀器精密度良好，樣品在一定時間內穩(wěn)定，回收率均在80%-120%之間。 兩種限量方法相輔相成，對鹽酸美金剛中的雜質進行全面的限量控制，可作為保證該藥品雜質控制的有效手段。 本研究從新藥臨床前申報的具體需求出發(fā)，綜合運用色譜-質譜技術解決化學藥物雜質研究中的各類定性、定量問題。將高分辨串聯(lián)質譜技術應用于藥物雜質的定性鑒別，建立了高靈敏度和高準確度的藥物雜質分析方法。為將色譜-質譜技術從實驗室過渡到藥物研發(fā)領域做出了有益探索，為建立更高標準的藥物質量控制體系尤其是雜質控制提供了參考和借鑒。
【關鍵詞】：藥物雜質 鹽酸普拉格雷片 鹽酸美金剛片 色譜-質譜技術
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R917;O657.63
【目錄】：

• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 縮略詞13-14
• 第一章 前言14-18
• 一、 課題背景介紹14-17
• 二、 課題的研究內容和意義17-18
• （一） 課題的研究內容17
• （二） 課題的研究意義17-18
• 第二章 超高效液相色譜 四極桿飛行時間質譜聯(lián)用技術在藥物雜質定性鑒別中的應用18-33
• 第一節(jié) 概述18-19
• 第二節(jié) 實驗部分19-33
• 一、 鹽酸環(huán)噴托酯滴眼液中氧化雜質的結構確定19-24
• （一） 材料與試劑19
• （二） 色譜條件19
• （三） 質譜條件19-20
• （四） 供試品制備20
• （五） 結果20-24
• 二、 三羥芐基芐絲肼中雜質的結構鑒定24-32
• （一） 材料與試劑24
• （二） 色譜條件24
• （三） 質譜條件24-25
• （四） 供試品制備25
• （五） 結果25-32
• 三、 小結與討論32-33
• 第三章 鹽酸普拉格雷的雜質分析33-77
• 第一節(jié) 概述33-34
• 第二節(jié) 實驗部分34-77
• 一、 鹽酸普拉格雷雜質對照品結構確證34-53
• （一） 儀器與試藥34
• （二） 核磁測試34-46
• （三） 高分辨質譜分析46-48
• （四） 紫外光譜測試48-50
• （五） 紅外光譜測試50-53
• 二、 鹽酸普拉格雷中降解雜質分析53-76
• （一） 材料與試劑53
• （二） 色譜條件53-54
• （三） 降解條件54
• （四） 供試品的制備54-76
• 三、 小結與討論76-77
• 第四章 鹽酸美金剛片的降解實驗研究77-95
• 第一節(jié) 概述77-78
• 第二節(jié) 實驗部分78-95
• 一、 鹽酸美金剛片降解實驗的氣相色譜法研究78-84
• （一） 儀器78
• （二） 試劑和試藥78
• （三） 色譜條件78
• （四） 供試品制備78-79
• （五） 結果79-84
• 二、 鹽酸美金剛片降解實驗的液相色譜 質譜研究84-94
• （一） 儀器84
• （二） 試劑和試藥84
• （三） 色譜條件84
• （四） 質譜條件84-85
• （五） 萃取法提取樣品的質譜研究結果85
• （六） 樣品處理的溶劑優(yōu)化85-87
• （七） 鹽酸美金剛片降解實驗物料守恒研究87-94
• 三、 小結與討論94-95
• 第五章 鹽酸美金剛片中雜質的限量測定95-132
• 第一節(jié) 概述95-97
• 第二節(jié) 實驗部分97-132
• 一、 基于氣相色譜法的鹽酸美金剛片中雜質限量測定97-120
• （一） 材料和方法97-98
• （二） 方法學考察98-119
• （三） 限量測定119-120
• 二、 基于液相色譜法的鹽酸美金剛片中雜質美金剛 乳糖結合物的限量測定120-131
• （一） 材料和方法120-121
• （二） 方法學考察121-130
• （三） 限量測定130-131
• 三、 小結與討論131-132
• 全文總結132-133
• 參考文獻133-138
• 攻讀學位期間發(fā)表論文和參加科研工作情況138-139
• 致謝139

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：色譜質譜技術在化學藥物雜質研究中的應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：256188