【摘要】：天然產(chǎn)物中存在多種豐度很低的小分子蛋白,為維持生命體的正常運(yùn)行發(fā)揮重要作用。固定化金屬親和層析法因其特異性吸附功能而備受青睞,但雜蛋白會(huì)與目標(biāo)小分子競(jìng)爭(zhēng)親和介質(zhì)的吸附位點(diǎn),降低親和分離的選擇性。為削弱雜蛋白對(duì)吸附位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng),本課題使用二醇基修飾固定化金屬親和介質(zhì),以更好地排阻雜蛋白,增強(qiáng)吸附活性小分子。為避免因載體均一度不佳而影響應(yīng)用,本課題采用膜乳化-原位法制備出均勻的親和載體。結(jié)果如下:(1)以膜乳化法制備殼聚糖微球,在乙酸含量3%、乳化劑含量4%、乳化壓力200kPa、轉(zhuǎn)速400r·min-1、交聯(lián)劑2mL及固化溶液pH值為7.5的條件下,可得到平均粒徑為5.95μm,粒徑分布系數(shù)為0.37的殼聚糖微球。再結(jié)合原位法,當(dāng)殼聚糖與FeC12·4H20的質(zhì)量比為1:1時(shí),可得到磁飽和強(qiáng)度為25.69emu.g-1的均勻磁性殼聚糖微球(M-CS)。(2)用環(huán)氧氯丙烷(ECH)來活化載體(M-CS),在45℃、ECH體積分?jǐn)?shù)為50%、NaOH濃度為0.6mol·L-1及反應(yīng)6h的條件下,所得環(huán)氧基密度最高,為189.72μmol·g-1。再以IDA為螯合劑,制備出磁性固定化Cu2+親和介質(zhì)(M-CS@Cu2+),并優(yōu)化該介質(zhì)吸附牛血清蛋白(BSA)的條件:當(dāng) BSA 濃度為 1.0mg·mL-1 時(shí),在 0.01 mol·L-1 的 PBS 緩沖液 pH 為 6.8,35℃吸附1.5h的條件下,M-CS@Cu2+對(duì)BSA的吸附量最大,為123.27mg·g-1。同時(shí)發(fā)現(xiàn)可用Freundlich方程來描述M-CS@Cu2+對(duì)BSA的吸附,且該吸附符合偽二級(jí)動(dòng)力學(xué)模型。(3)通過控制IDA的用量來分配環(huán)氧基的反應(yīng)路徑,在M-CS@Cu2+的基礎(chǔ)上制備出二醇基修飾的親和介質(zhì)(M-CS@Cu2+@OH)。以VSLPEW為活性小分子模型,BSA為大分子蛋白模型,比較M-CS、M-CS@Cu2+和M-CS@Cu2+@OH對(duì)BSA與VSLPEW的混合體系的吸附,發(fā)現(xiàn)M-CS@Cu2+@OH存在更好的特異性吸附效果,可把VSLPEW的含量由0.99%富集到4.66%。用pH為5.0,2.0 mol·L-1的NaCl溶液洗脫介質(zhì)三次,每次25min,且介質(zhì)在重復(fù)使用三次后效果變差,再生后吸附能力基本穩(wěn)定。以酪蛋白酶解液來模擬實(shí)際體系,通過比較M-CS、M-CS@Cu2+和M-CS@Cu2+@OH對(duì)酶解液的吸附及活性檢測(cè),發(fā)現(xiàn)被M-CS@Cu2+@OH吸附的蛋白具有更高的活性。
【圖文】：

２．４．１．２乙酸含量對(duì)微球制備的影響逡逑本實(shí)驗(yàn)用一定濃度的乙酸溶液溶解殼聚糖，以２邋ｍＬ的Ｓｐａｎ－８０作乳化劑，在轉(zhuǎn)速逡逑ＳＯＯｒｍｉｉｒ１，乳化壓力２００ｋＰａ的條件下乳化，再使用１邋ｍＬ的戊二醛交聯(lián)，調(diào)節(jié)溶液ｐＨ逡逑值為８．０進(jìn)行固化，考察不同乙酸含量對(duì)微球制備的影響，所制備的微球相對(duì)應(yīng)的粒徑逡逑分布如圖２－２所示。逡逑當(dāng)乙酸含量較低時(shí)，殼聚糖溶解度較低，分散相粘度較高，這將引起乳滴過膜時(shí)的逡逑團(tuán)聚，導(dǎo)致微球粒徑不均一；當(dāng)乙酸含量較高時(shí)，分散相粘度較低，相同乳化壓力下相逡逑對(duì)較快通過膜孔，粗乳液來不及被分散為小乳滴，最終導(dǎo)致過膜后的乳滴粒徑較大。當(dāng)逡逑乙酸含量為３％時(shí)，微球的平均粒徑較小為７．１３邋ｐｍ，粒徑分布系數(shù)為０．６２，粒徑均一性逡逑較好。故選擇用３％的乙酸來溶解殼聚糖。逡逑２．４．１．３乳化劑Ｓｐａｎ－８０用量對(duì)微球制備的影響逡逑本實(shí)驗(yàn)用３％的乙酸溶解殼聚糖，向連續(xù)相中加入一定含量的Ｓｐａｎ－８０作乳化劑，逡逑在轉(zhuǎn)速ＳＯＯｒｍｉｎ－１，乳化壓力２００ｋＰａ的條件下乳化，再使用ｌｍＬ的戊二醛交聯(lián)，調(diào)節(jié)逡逑

２．４．１．２乙酸含量對(duì)微球制備的影響逡逑本實(shí)驗(yàn)用一定濃度的乙酸溶液溶解殼聚糖，以２邋ｍＬ的Ｓｐａｎ－８０作乳化劑，在轉(zhuǎn)速逡逑ＳＯＯｒｍｉｉｒ１，乳化壓力２００ｋＰａ的條件下乳化，再使用１邋ｍＬ的戊二醛交聯(lián)，調(diào)節(jié)溶液ｐＨ逡逑值為８．０進(jìn)行固化，考察不同乙酸含量對(duì)微球制備的影響，所制備的微球相對(duì)應(yīng)的粒徑逡逑分布如圖２－２所示。逡逑當(dāng)乙酸含量較低時(shí)，殼聚糖溶解度較低，分散相粘度較高，這將引起乳滴過膜時(shí)的逡逑團(tuán)聚，導(dǎo)致微球粒徑不均一；當(dāng)乙酸含量較高時(shí)，分散相粘度較低，相同乳化壓力下相逡逑對(duì)較快通過膜孔，粗乳液來不及被分散為小乳滴，最終導(dǎo)致過膜后的乳滴粒徑較大。當(dāng)逡逑乙酸含量為３％時(shí)，微球的平均粒徑較小為７．１３邋ｐｍ，粒徑分布系數(shù)為０．６２，粒徑均一性逡逑較好。故選擇用３％的乙酸來溶解殼聚糖。逡逑２．４．１．３乳化劑Ｓｐａｎ－８０用量對(duì)微球制備的影響逡逑本實(shí)驗(yàn)用３％的乙酸溶解殼聚糖，向連續(xù)相中加入一定含量的Ｓｐａｎ－８０作乳化劑，逡逑在轉(zhuǎn)速ＳＯＯｒｍｉｎ－１，乳化壓力２００ｋＰａ的條件下乳化，再使用ｌｍＬ的戊二醛交聯(lián)，，調(diào)節(jié)逡逑
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：O636.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 于慧;李明艷;張典;崔明曉;;響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化裙帶菜蛋白酶解工藝及酶解液抗氧化活性[J];食品科學(xué);2017年06期

2 郭U嗹

本文編號(hào)：2535934