【摘要】：反膠束萃取技術(shù)將提純與濃縮集于一起,可以高效節(jié)能地從復(fù)雜體系中提取純化出目標(biāo)蛋白質(zhì)并保持其生物活性。與傳統(tǒng)提取方法相比,反膠束萃取技術(shù)具有極大的技術(shù)優(yōu)勢與應(yīng)用潛能。因此,該技術(shù)在蛋白質(zhì)的提取分離中越來越受到關(guān)注。目前反膠束萃取技術(shù)中所使用的表面活性劑多為傳統(tǒng)表面活性劑。本論文分別使用兩種新型表面活性劑-季銨鹽Gemini表面活性劑二溴化—雙(二甲基十二烷基)辛二銨(C_(12)C_8C_(12))和二溴化—雙(二甲基十二烷基)十二銨(C_(12)C_(12)C_(12))所形成的反膠束對(duì)菠蘿皮中的菠蘿蛋白酶進(jìn)行了萃取,發(fā)現(xiàn)Gemini表面活性劑反膠束對(duì)菠蘿蛋白酶的萃取效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)表面活性劑(如十二烷基三甲基溴化銨)反膠束的萃取效果。通過系統(tǒng)研究萃取過程中各項(xiàng)參數(shù)對(duì)Gemini表面活性劑反膠束萃取效果的影響,發(fā)現(xiàn)萃取過程中的各項(xiàng)參數(shù),如表面活性劑的結(jié)構(gòu)與濃度、水相pH值、離子強(qiáng)度、菠蘿蛋白酶粗提液稀釋倍數(shù)等都在萃取過程中起著重要的作用,從而影響了菠蘿蛋白酶的總萃取效率、活性回收率及純化倍數(shù)。使用C_(12)C_8C_(12)/正己烷／正己醇／水反膠束體系從菠蘿皮中提取菠蘿蛋白酶時(shí),最優(yōu)提取工藝參數(shù)為：前萃取水相pH值為8.0,前萃取水相中NaCl濃度為0.1 M,后萃取水相pH值為4.2,后萃取水相中KBr濃度為0.5 M,C_(12)C_8C_(12)濃度為0.03g/ml,菠蘿蛋白酶粗提液的稀釋倍數(shù)為25倍；最佳萃取條件下,菠蘿蛋白酶的總萃取效率、活性回收率和純化倍數(shù)分別為50%、163%和3.3。使用C_(12)C_(12)C_(12)/正己烷／正己醇／水反膠束體系從菠蘿皮中提取菠蘿蛋白酶時(shí),最佳工藝參數(shù)為：前萃取水相pH值為10.0,前萃取水相中NaCl濃度為0.1 M,后萃取水相pH值為4.2-5.6,后萃取水相中KBr濃度為0.25-1.0 M,C_(12)C_(12)C_(12)濃度為0.005-0.04 g/ml,菠蘿蛋白酶粗提液的稀釋倍數(shù)為15-35倍；最佳萃取條件下,菠蘿蛋白酶的總萃取效率、活性回收率和純化倍數(shù)分別為50%-59%、140%-160%和1.8-3.2。因此,C_(12)C_8C_(12)反膠束體系與C_(12)C_(12)C_(12)反膠束體系均可用于菠蘿皮中菠蘿蛋白酶的高效提取,但C_(12)C_(12)C_(12)反膠束體系比C_(12)C_8C_(12)反膠束體系適用的萃取條件范圍更廣,說明C_(12)CsC_(12)型表面活性劑的間隔基越長,應(yīng)該越有利于該類表面活性劑在菠蘿蛋白酶萃取中的應(yīng)用。
[Abstract]:Reverse micelle extraction (RME), which combines purification and concentration, can efficiently and energy-saving extract and purify the target protein from the complex system and maintain its biological activity. Compared with traditional extraction methods, reverse micelle extraction has great technical advantages and potential applications. Therefore, more and more attention has been paid to this technique in protein extraction and separation. At present, most of the surfactants used in reverse micelle extraction are traditional surfactants. In this paper, two new surfactants-quaternary ammonium salt Gemini surfactant-bis (dimethyl dodecyl) octylammonium (C _ (12) and dibrominated-bis (dimethyl dodecane) were used respectively. Bromelain was extracted from pineapple skin by reverse micelle formed by dodecylammonium (C12) (C12C12C12), in which bromelain was extracted from pineapple peel. It was found that the extraction effect of Gemini surfactant reverse micelle was better than that of traditional surfactant (such as dodecyl trimethyl ammonium bromide) in the extraction of bromelain. The effects of various parameters in the extraction process on the reverse micelle extraction of Gemini surfactants were systematically studied. It was found that the parameters in the extraction process, such as the structure and concentration of surfactants, the pH value of aqueous phase, and the ionic strength, were used in the extraction process. The dilution ratio of bromelain crude extract plays an important role in the extraction process, which affects the total extraction efficiency, activity recovery and purification multiple of bromelain. When using C _ (12) / n-hexane / n-hexanol / water reverse micelle system to extract bromelain from pineapple skin, the optimum extraction parameters are as follows: the pH value of water phase is 8.0, The concentration of NaCl in the aqueous phase is 0.1m, the pH value in the aqueous phase is 4.2, the concentration of KBr in the aqueous phase is 0.5M, and the concentration of C12 / 8C12 is 0.03g / ml. The dilution ratio of bromelain crude extract was 25 times. Under the optimum extraction conditions, the total extraction efficiency, activity recovery and purification multiple of bromelain were 50%, 163% and 3.3%, respectively. When using C _ (12) / n-hexane / n-hexanol / water reverse micelle system to extract bromelain from pineapple peel, the optimum technological parameters are as follows: the pH value of water phase is 10.0, The concentration of NaCl in the aqueous phase was 0.1m, the pH value in the aqueous phase was 4.2? 5.6, and the concentration of KBr in the aqueous phase was 0.25? The concentration of C _ (12) was 0.005g / ml and the dilution multiple of bromelain crude extract was 15 ~ 35 times. Under the optimum extraction conditions, the total extraction efficiency, activity recovery and purification multiple of bromelain were 50% ~ 59%, 140% ~ 160% and 1.8 ~ 3.2%, respectively. Therefore, both C _ (12) reverse micelle system and C _ (12) reverse micelle system can be used to extract bromelain efficiently from pineapple peel. However, C _ (12) reverse micelle system is more suitable for extraction than C _ (12) C _ (8) C _ (12) reverse micelle system, indicating that the spacer of C _ (12) CsC_ (12) surfactant is longer than that of C _ (12) reverse micelle system. It should be beneficial to the application of this kind of surfactant in the extraction of bromelain.
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O629.8;O658.2

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本文編號(hào)：2469288