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聚芳撐乙炔水溶性共軛聚合物的合成及其在生物檢測中的應(yīng)用研究

發(fā)布時(shí)間:2021-04-12 11:57
  水溶性共軛聚合物材料由于光學(xué)性能優(yōu)異,在生物化學(xué)、生命科學(xué)以及臨床醫(yī)學(xué)等方面都顯示了非常廣泛的應(yīng)用前景,引起科研工作者們濃厚的研究興趣。水溶性共軛聚合物是一種新型的熒光材料,具有“分子導(dǎo)線”熒光信號放大特性、摩爾吸光系數(shù)大、熒光量子產(chǎn)率高、易溶于水等優(yōu)點(diǎn)。基于這些特殊的光學(xué)性質(zhì),近年來,水溶性共軛聚合物在生物科學(xué)、化學(xué)分析等方面的研究越來越多。本論文的主旨是合成光電性能、光穩(wěn)定性和溶解性良好的水溶性共軛聚合物材料,用其構(gòu)建各類生物傳感器完成對目標(biāo)分子的高靈敏、高特異性檢測。主要有以下三個(gè)方面的研究工作:(1)水溶性陽離子熒光共軛聚合物的合成。利用Sonogashira聚合反應(yīng)合成了一種聚苯撐乙炔類中性共軛聚合物,中性聚合物通過季銨化反應(yīng)得到水溶性比較好的陽離子共軛聚合物,其結(jié)構(gòu)以及分子量利用核磁共振氫譜、GPC等進(jìn)行了確認(rèn)和表征;利用紫外分光光度計(jì)與熒光分光光度計(jì)對聚合物的紫外吸收光譜、熒光發(fā)射光譜、熒光量子效率等光物理性質(zhì)進(jìn)行了表征。(2)水溶性熒光共軛聚合物結(jié)合雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)用于DNA檢測的研究。利用目標(biāo)DNA誘導(dǎo)的雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(HCR)形成較長的含有很多熒光素FAM的雙鏈DNA結(jié)構(gòu),以水溶性陽離子共軛聚合物作為熒光共振能量轉(zhuǎn)移的供體,熒光素FAM修飾的探針DNA作為熒光共振能量轉(zhuǎn)移的受體,通過陽離子共軛聚合物(PFEPN+)與雙鏈DNA結(jié)構(gòu)之間的靜電作用使PFEPN+與熒光素FAM靠近,從而發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,根據(jù)熒光轉(zhuǎn)移效率的改變,實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)DNA的高靈敏檢測;赑FEPN+與HCR的雙重信號放大,這種生物傳感器能夠檢測到濃度為0.3 nM的目標(biāo)DNA,同時(shí)能區(qū)分單堿基錯(cuò)配以及三堿基錯(cuò)配的DNA,本實(shí)驗(yàn)方法簡單快捷,為目標(biāo)分子的檢測提供了一條新的途徑。(3)水溶性熒光共軛聚合物結(jié)合核酸適配體檢測癌細(xì)胞。本部分主要利用癌細(xì)胞MCF-7表面過度表達(dá)的Mucin 1與其對應(yīng)的核酸適配體DNAa之間的特異性作用,以核酸適配體互補(bǔ)鏈DNAb-FAM作為分子識別元件,結(jié)合陽離子熒光共軛聚合物的熒光信號放大特性,以水溶性陽離子共軛聚合物為熒光共振能量轉(zhuǎn)移的供體,熒光素FAM作為熒光共振能量轉(zhuǎn)移的受體,發(fā)展一種靈敏、特異性的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7檢測新方法。
【學(xué)位授予單位】:南京郵電大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:O631.3;O657.3
文章目錄
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 研究的背景及意義
    1.2 共軛聚合物的結(jié)構(gòu)、種類和合成方法
        1.2.1 共軛聚合物的種類與結(jié)構(gòu)
        1.2.2 共軛聚合物主要合成方法
    1.3 共軛聚合物的熒光信號放大原理
    1.4 共軛聚合物在化學(xué)生物傳感器方面的應(yīng)用
        1.4.1 基于水溶性共軛聚合物的離子傳感器
        1.4.2 基于水溶性共軛聚合物的小分子傳感器
        1.4.3 基于水溶性共軛聚合物的DNA傳感器
        1.4.4 基于水溶性共軛聚合物的蛋白質(zhì)傳感器
        1.4.5 基于水溶性共軛聚合物的酶傳感器
    1.5 本論文擬開展的工作
第二章 陽離子水溶性共軛聚合物的合成
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與藥品
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        2.2.3 合成路線
        2.2.4 單體合成及表征
        2.2.5 聚合物的合成及表征
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 合成及表征
        2.3.2 PFEP的光學(xué)特征
    2.4 本章小結(jié)
第三章 基于水溶性熒光共軛聚合物和雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的DNA檢測
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 試劑和藥品
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和方法
        3.2.3 雙鏈DNA聚合體的制備
        3.2.4 基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的DNA檢測
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 檢測原理
        3.3.2 雙鏈DNA聚合體的表征
        3.3.3 基于PFEPN+和HCR信號放大的傳感體系的設(shè)計(jì)
        3.3.4 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        3.3.5 PFEPN+結(jié)合HCR對目標(biāo)DNA的高靈敏檢測
        3.3.6 PFEPN+結(jié)合HCR對目標(biāo)DNA的高選擇性檢測
    3.4 本章小結(jié)
第四章 基于水溶性共軛聚合物和核酸適配體的癌細(xì)胞檢測
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 試劑和藥品
        4.2.2 儀器和方法
        4.2.3 MCF-7 細(xì)胞的培養(yǎng)與細(xì)胞成像
        4.2.4 熒光檢測
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 檢測機(jī)理
        4.3.2 合適的S1 Nuclease消化時(shí)間
        4.3.3 Mucin 1 檢測
        4.3.4 細(xì)胞成像
        4.3.5 癌細(xì)胞檢測
    4.4 本章小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 論文總結(jié)
    5.2 前景展望
參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間撰寫的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間申請的專利
附錄3 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目
致謝

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本文編號:2274580

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