【摘要】：為研究大腸桿菌的高靈敏快速檢測(cè)方法,建立一種基于萘酰亞胺標(biāo)記的DNA探針和磁性四氧化三鐵氧化石墨烯分離的大腸桿菌O157:H7檢測(cè)方法。將標(biāo)記萘酰亞胺的ssDNA(單鏈DNA)作為捕獲探針吸附在磁性氧化石墨烯表面,當(dāng)目標(biāo)ssDNA存在時(shí),捕獲探針與之部分雜交,利用磁場(chǎng)將目標(biāo)ssDNA捕獲并富集。然后加入釋放探針完成雜交,使標(biāo)記熒光的捕獲探針從磁性氧化石墨烯的表面釋放出來(lái),通過(guò)測(cè)定溶液熒光強(qiáng)度可以實(shí)現(xiàn)大腸桿菌O157:H7的高靈敏檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在一定條件下,O157:H7數(shù)量的對(duì)數(shù)值和熒光強(qiáng)度與空白值熒光強(qiáng)度的比值(F/F_0)呈線性關(guān)系,線性范圍為150~1.5×10~6個(gè)/m L,經(jīng)過(guò)富集后檢出限可達(dá)100個(gè)/m L。該方法靈敏度高,檢出限低,耗時(shí)較短,操作簡(jiǎn)單,為致病菌的高靈敏檢測(cè)提供新思路。
[Abstract]:In order to study the highly sensitive and rapid detection method of Escherichia coli, a DNA probe based on naphthalimide and a O157:H7 method for the separation of magnetic graphene tetroxide were developed. SsDNA (single-stranded DNA) labeled with naphthalene imide was used as a trap probe to adsorb on the surface of magnetic graphene oxide. When the target ssDNA existed, the trap probe was hybridized with part of it, and the target ssDNA was captured and enriched by magnetic field. Then the labeled fluorescence capture probe was released from the surface of the magnetic graphene oxide by adding the release probe to complete the hybridization. The highly sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 could be achieved by measuring the fluorescence intensity of the solution. The experimental results show that the logarithmic value of O 157: h 7 and the ratio of fluorescence intensity to blank fluorescence intensity (F/F_0) show a linear relationship under certain conditions. The linear range is 150 ~ 1.5 脳 10 ~ 6 / mL, and the detection limit can reach 100 / mL after enrichment. This method has the advantages of high sensitivity, low detection limit, short time consuming and simple operation, which provides a new method for the sensitive detection of pathogenic bacteria.
【作者單位】： 湖南大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院環(huán)境生物與控制教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(51541801)~~
【分類號(hào)】：O657.3

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本文編號(hào)：2211238