本文選題：氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 + 超高效液相色譜-熒光法��； 參考：《南昌大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：酪氨酸屬于芳香氨基酸,在體內(nèi)由苯丙氨酸羥化而來(lái),在人體新陳代謝過(guò)程中起著重要的作用,是人體健康狀況的重要參數(shù)。研究表明,酪氨酸的代謝紊亂不僅與氨基酸代謝疾病有關(guān),而且與惡性腫瘤有一定的相關(guān)性。因此,建立簡(jiǎn)單、快速、靈敏的分析方法并且用于人體尿液中酪氨酸及其代謝產(chǎn)物含量的監(jiān)測(cè),對(duì)于一些疾病的普查、早期診斷、監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)價(jià)具有極其重要的現(xiàn)實(shí)意義。然而,在已有的測(cè)定酪氨酸及其代謝產(chǎn)物的研究中,以血清中酪氨酸的代謝產(chǎn)物研究報(bào)道較多,而對(duì)尿液中酪氨酸的代謝產(chǎn)物研究介紹較少。本文應(yīng)用色譜及其聯(lián)用技術(shù),系統(tǒng)地探討了酪氨酸及其代謝產(chǎn)物分離分析條件,在此基礎(chǔ)上,研究建立了尿液中酪氨酸及其多種代謝產(chǎn)物同時(shí)分析新方法,并應(yīng)用于實(shí)際樣品分析,取得了令人滿意的效果。主要研究成果如下:1. 建立了氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定人體尿液中的對(duì)羥苯基丙酸、尿黑酸和對(duì)羥苯基乳酸的分析新方法。尿液經(jīng)乙腈除蛋白后,氮?dú)獯蹈?加入硅烷化試劑(BSTFA+1%TMCS)衍生,離心后取上清液過(guò)0.22μm有機(jī)相濾膜后直接進(jìn)樣檢測(cè)。采用HP-5MS毛細(xì)管柱(30 m′0.25 mm′0.25μm),流速為1.0m L/min,在優(yōu)化的色譜升溫程序下進(jìn)行分離。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,對(duì)羥苯基丙酸、尿黑酸和對(duì)羥苯基乳酸的線性范圍均為0.025~3.00 mg/L,線性相關(guān)系數(shù)在0.9993~0.9995之間,三種物質(zhì)的加標(biāo)回收率在94.50%~110.0%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3.0%。該方法應(yīng)用于人體尿液中對(duì)羥苯基丙酸、尿黑酸和對(duì)羥苯基乳酸的同時(shí)測(cè)定,結(jié)果令人滿意。2.建立了超高效液相色譜-熒光法測(cè)定人體尿液中的對(duì)羥苯基乳酸、對(duì)羥苯基乙酸以及對(duì)羥苯基丙酸的分析新方法。尿樣經(jīng)離心后取上清液過(guò)GenerikC8/BCX固相萃取小柱凈化,取洗脫液進(jìn)行檢測(cè)。采用ZO RBAX SB-C18快速分離柱,以50 mmol/L乙酸-乙酸銨(p H=6.8,5 mmol/L四丁基溴化銨):乙腈=95:5(V/V)為流動(dòng)相,在流速為0.2 m L/min下分離,熒光檢測(cè)波長(zhǎng)為λ_(ex)=277 nm,λ_(em)=316 nm。在優(yōu)化的色譜條件下,對(duì)羥苯基乳酸、對(duì)羥苯基乙酸和對(duì)羥苯基丙酸的線性范圍分別為0.05~4.0 mg/L、0.05~50 mg/L及0.1~4.0 mg/L。檢出限分別為8.8′10~(-3) mg/L、4.8′10~(-3) mg/L及9.0′10~(-3) mg/L,健康人尿樣中三種待測(cè)物在三個(gè)添加水平下的平均加標(biāo)回收率在85.0%~120.0%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.2%~3.1%之間。此方法用于尿液中三種物質(zhì)的同時(shí)測(cè)定,結(jié)果令人滿意。3.建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定尿液中的酪氨酸、多巴、對(duì)羥苯基乳酸、對(duì)羥苯基乙酸、尿黑酸、對(duì)羥苯基丙酸和酪胺的分析新方法。尿液被超純水稀釋兩倍后離心,取上清液過(guò)0.22μm水系濾膜后直接進(jìn)樣。采用Shim-pack GIST C18分離柱,以乙酸-乙酸銨(20 mmol/L):乙腈=95:5(V/V)為流動(dòng)相,流速為0.2 m L/min,在優(yōu)化的質(zhì)譜條件下,七種組分的線性較好且相關(guān)系數(shù)在0.9992~0.9998之間,尿樣中七種待測(cè)物在三個(gè)水平下的平均加標(biāo)回收率在85.5%~112.0%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.0%~5.0%之間。此方法簡(jiǎn)單快速,為今后酪氨酸及其代謝產(chǎn)物的研究提供了重要的方法學(xué)參考。
[Abstract]:A simple , rapid , sensitive analytical method is established in the study of tyrosine and its metabolites in human urine . A new method for the determination of p - hydroxyphenylpropionic acid , urine black acid and p - hydroxyphenyllactic acid in human urine by GC - MS was established . The results showed that the linear range of p - hydroxyphenylpropionic acid , urine black acid and p - hydroxyphenylpropionic acid was 0 . 025 - 3.00 mg / L , and the relative standard deviation was less than 3.0 % . The detection limit was 8 . 8 ' 10 - ( -3 ) mg / L , 4.8 ' 10 - ( -3 ) mg / L and 9.0 ' 10 - ( -3 ) mg / L , respectively . The method is simple and rapid , and provides an important methodological reference for the research of tyrosine and its metabolites in the future .
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9;O657.63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2051969