本文關(guān)鍵詞：新型香菇多糖的純化、鑒定與免疫活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《華南理工大學(xué)》 2013年

新型香菇多糖的純化、鑒定與免疫活性研究

閆慧丹  

【摘要】：香菇（Lentinus edodes），屬于擔(dān)子菌綱側(cè)耳科（Pleurotaceae）真菌，是一種可食用和藥用的真菌，具有很高的食補(bǔ)價(jià)值，，在我國(guó)分布廣泛。香菇含有多種有效藥用成分，其中香菇多糖是其主要有效成分之一，目前對(duì)香菇多糖的研究主要集中于其結(jié)構(gòu)和生物活性方面，其構(gòu)效關(guān)系及生物活性機(jī)理還不清楚。本課題以香菇為原料，對(duì)香菇多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)表征和免疫活性進(jìn)行了研究，并且成功合成了一種香菇多糖鈣的復(fù)合物L(fēng)2-Ca，主要研究結(jié)果如下： 采用水提醇沉法提取香菇多糖，經(jīng)過醇沉、脫蛋白、醇沉、DEAE-52纖維素離子交換柱層析、濃縮、透析、凍干后得到香菇粗多糖組分：CL1、CL2、CL3、CL4，其中CL2所占比率最高。利用葡聚糖凝膠柱層析（填料為Sephadex-G200）對(duì)香菇粗多糖組分CL2進(jìn)行進(jìn)一步純化得到高純度香菇多糖L2，硫酸苯酚法測(cè)定L2的多糖含量為97%。高效凝膠色譜法測(cè)得香菇多糖L2的平均分子量為26KDa。 紫外掃描確認(rèn)香菇多糖L2不含蛋白質(zhì)和核酸。紅外光譜分析顯示香菇多糖L2含有3418～3405cm~(-1)處的O-H伸縮振動(dòng)、2932～2927cm~(-1)處的C-H伸縮振動(dòng)以及1430～1200cm~(-1)處的一組羧基的伸縮振動(dòng)，表明該物質(zhì)具有多糖的特征紅外吸收，是多糖樣品。結(jié)合其它特征吸收峰確定L2是不含糖醛酸的吡喃多糖。 對(duì)香菇多糖L2進(jìn)行氣相色譜分析，證明了L2的單糖組成是L-阿拉伯糖、D-葡萄糖和D-半乳糖，其摩爾比大致為L(zhǎng)-阿拉伯：D-葡萄糖：D-半乳糖=1:31:3。高碘酸氧化和Smith降解產(chǎn)物分析顯示，L2含有1,6、1,3、1,2糖苷鍵，其百分比分別分別為：44.33%、37.45%、18.22%。 剛果紅實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明L2不具有三螺旋結(jié)構(gòu)，這與很多文獻(xiàn)報(bào)道中的香菇多糖高級(jí)結(jié)構(gòu)不一致。原子力顯微鏡圖顯示香菇多糖L2的分子形態(tài)為相互纏繞的鏈狀結(jié)構(gòu)，經(jīng)137℃高溫處理后，糖鏈斷裂，糖鏈長(zhǎng)度減小，說明L2經(jīng)高溫處理后，其高級(jí)結(jié)構(gòu)可能發(fā)生變化。這可能是多糖高溫處理后失活的原因之一。 通過對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7培養(yǎng)液中NO濃度的測(cè)定，說明DEAE-52離子交換層析得到的四種香菇粗多糖組分CL1、CL2、CL3、CL4均能顯著提高小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7的NO釋放量，其中CL2的作用最為顯著。L2劑量效應(yīng)關(guān)系的研究顯示，當(dāng)L2的濃度小于250μg/mL時(shí)，NO、TNF-α和IL-6的分泌量和L2的濃度呈顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系，當(dāng)L2的濃度大于250μg/mL時(shí)，NO釋放量隨L2濃度的增加而降低，TNF-α和IL-6的濃度沒有顯著變化。溫度和pH值對(duì)L2的免疫活性影響分析顯示，L2在137℃下處理30min后失活，在pH4.0-8.0范圍內(nèi)是有序的糖鏈結(jié)構(gòu)，pH10.0時(shí)，L2的活性結(jié)構(gòu)被損壞； TLR2是巨噬細(xì)胞RAW264.7識(shí)別L2的受體之一，除此之外，L2可能還有其他受體，但可以排除TLR4、CR3和Dectin~(-1)。這個(gè)結(jié)果也說明L2的受體和Letinan有很大的不同。 合成了香菇多糖鈣復(fù)合物L(fēng)2-Ca，其最佳合成工藝條件為：溫度：65℃、pH9.0、反應(yīng)時(shí)間60min、CaCl2與L2的質(zhì)量比為5.5:1；比較香菇多糖L2與香菇多糖鈣復(fù)合物L(fēng)2-Ca的紅外吸收光譜圖，推測(cè)香菇多糖與鈣的絡(luò)合可能以C-O配位為主；香菇多糖鈣L2-Ca的免疫活性和L2相當(dāng)，同時(shí)兼有補(bǔ)鈣作用，有望用于保健食品領(lǐng)域。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：O629.12
【目錄】：

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周蓮娣;香菇多糖對(duì)約氏瘧原蟲感染BALB/c小鼠紅內(nèi)期免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

2 謝紅旗;香菇多糖提取、純化、結(jié)構(gòu)表征及生物活性的研究[D];中南大學(xué);2007年

3 姜元榮;米糠免疫活性多糖的研究[D];江南大學(xué);2004年

4 葉益萍;黑鰻藤中C_（21）甾體苷類成分及其免疫活性研究[D];浙江大學(xué);2006年

5 劉金海;黑曲霉菌在生物發(fā)酵飼料上的應(yīng)用及其產(chǎn)品對(duì)動(dòng)物抗病力的影響[D];吉林大學(xué);2012年

6 孟慶國(guó);基于丙谷胺小分子化合物的組合合成及免疫活性研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2002年

7 李曉譽(yù);兩種蘿藦科植物的C_（21）甾體苷類成分和免疫活性研究[D];浙江大學(xué);2006年

8 趙智慧;棗水溶性多糖的研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

9 初曉霞;ITP患者IgG酶切片段的免疫活性及其對(duì)血小板聚集功能的影響[D];山東大學(xué);2006年

10 孫永旭;白樹花菌絲體多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)及其免疫活性研究[D];東北師范大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 閆慧丹;新型香菇多糖的純化、鑒定與免疫活性研究[D];華南理工大學(xué);2013年

2 耿安靜;香菇多糖的制備、結(jié)構(gòu)特性和生物活性的研究[D];華南理工大學(xué);2010年

3 王國(guó)佳;香菇多糖注射制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的系統(tǒng)化研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 李浩烜;香菇多糖對(duì)小鼠T細(xì)胞功能的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

5 蔡云;香菇多糖脂質(zhì)體的藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];華中科技大學(xué);2009年

6 蔡云;香菇多糖脂質(zhì)體的藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];華中科技大學(xué);2009年

7 李丹;香菇多糖體外抗HIV的免疫調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2002年

8 井歡;香菇多糖對(duì)脾虛小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用[D];遼寧中醫(yī)學(xué)院;2003年

9 婁冠群;香菇多糖提取和β-葡萄糖苷酶應(yīng)用研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 辜明;香菇多糖LT1的提取純化及結(jié)構(gòu)鑒定[D];華中科技大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：新型香菇多糖的純化、鑒定與免疫活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：195114