本文選題：木瓜蛋白酶 + 催化　； 參考：《西南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：過氧化物酶是一種重要的催化劑,在生物催化中有重要的實(shí)際應(yīng)用前景比如醫(yī)藥、化工、分析化學(xué)等領(lǐng)域。天然的過氧化物酶普遍存在于動(dòng)植物和微生物中,它能催化雙氧水氧化某些電子供體底物,如2,3-二甲氧基苯酚,愈創(chuàng)木酚,魯米諾,2,2'-連氮基-雙-(3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)和3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)。作為生物催化劑,天然酶具有顯著的優(yōu)勢(shì),在溫和條件下,它有非常好的水溶性和生物相容性,并且能高效、高選擇性的進(jìn)行催化反應(yīng)。因?yàn)榇蠖鄶?shù)的天然酶是蛋白質(zhì),它們很容易受到環(huán)境的影響(例如:溫度,pH值等)。此外,其制備和純化通常是非常耗時(shí)且昂貴的。為了拓展更廣泛的應(yīng)用,研究人員一直在尋找能克服上述局限性的類似天然酶催化活性的材料——人工酶模擬物。迄今為止,人工模擬酶因?yàn)槠浯呋钚愿�、穩(wěn)定性能好、能耐受極端環(huán)境、重復(fù)利用率高等優(yōu)點(diǎn)被普遍應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。相比于天然酶,人工模擬酶更易設(shè)計(jì)合成、廉價(jià)且有較高的穩(wěn)定性。但是,某些納米材料為了提高模擬酶的活性或防止團(tuán)聚,其表面通常會(huì)修飾劑一些基團(tuán)和穩(wěn)定劑。其催化性能往往可能因?yàn)榉�(wěn)定劑的引入降低或影響,大批量的制備某些納米材料也是非常困難的,且不同批次的同種納米材料的性能也會(huì)相差甚遠(yuǎn)。因此,探索新的過氧化物模擬酶具有重要意義。前面的研究中我們研究了木瓜蛋白酶有過氧化物模擬酶的催化活性,在此基礎(chǔ)上,我們構(gòu)建了尿酸、肌氨酸和抗壞血酸的比色檢測(cè)法并探究了金屬離子錳對(duì)其模擬酶活性的影響。(1)過氧化物酶由于其在不同領(lǐng)域的潛在應(yīng)用引起了人們的廣泛關(guān)注。然而,由于天然過氧化物酶的價(jià)格昂貴,易受環(huán)境影響,故限定了其應(yīng)用的范圍。在前面的工作中,我們已經(jīng)證明木瓜蛋白酶具有過氧化物模擬酶活性,它可以催化過氧化氫氧化TMB產(chǎn)生藍(lán)色反應(yīng)。故我們結(jié)合尿酸酶和木瓜蛋白酶構(gòu)建了一個(gè)低成本檢測(cè)尿酸(UA)的比色法。其檢測(cè)的線性范圍為20-200μM,檢出限為2.4μM。而且該方法已經(jīng)成功地應(yīng)用到人血清樣品的尿酸測(cè)定中。(2)肌氨酸作為前列腺癌的標(biāo)志物,它的檢測(cè)在生物醫(yī)學(xué)中占有非常重要的地位。木瓜蛋白酶作為過氧化物模擬酶,它可以在H_2O_2存在下催化酶特征底物TMB產(chǎn)生顯色反應(yīng),并在A652處有最大吸光度值。結(jié)合肌氨酸氧化酶與肌氨酸的反應(yīng)產(chǎn)物為H_2O_2,得到吸光度值與肌氨酸濃度呈相關(guān)性,由此建立了一種快速、簡(jiǎn)單、高選擇性和靈敏性測(cè)定肌氨酸的方法。(3)抗壞血酸也稱維生素C,是一種人體重要的輔助因子。對(duì)人體的健康有著重要的作用,而抗壞血酸的缺乏通常與心血管疾病以及癌癥等密切相關(guān)。所以檢測(cè)抗壞血酸非常有意義。木瓜蛋白酶能高效地催化H_2O_2氧化TMB發(fā)生顯色反應(yīng),而抗壞血酸具有還原性,它能與H_2O_2發(fā)生氧化還原反應(yīng),消耗H_2O_2,從而阻礙TMB的氧化,使體系顏色變淺。由此建立一種檢測(cè)抗壞血酸含量的比色法。(4)Mn~(2+)是自然界存在的一種重要金屬元素,亦是體內(nèi)所需要的微量元素。木瓜蛋白酶具有過氧化物模擬酶活性,它能催化H_2O_2產(chǎn)生羥基自由基,從而氧化過氧化物酶底物TMB產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。Mn~(2+)能夠抑制木瓜蛋白酶的過氧化物模擬酶活性,從而減少羥基自由基的產(chǎn)生,導(dǎo)致TMB氧化產(chǎn)物減少,藍(lán)色變淡,并在652nm處的吸光度值降低。由此我們考察了Mn~(2+)對(duì)木瓜蛋白酶催化活性的抑制情況。
[Abstract]:In order to improve the activity of the enzyme and to prevent agglomeration , it is very difficult to prepare certain nano - materials , which can catalyze the oxidation of hydrogen peroxide to produce blue reaction .

【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：O629.8;O657.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1889438